体外转录相关技术

1 前言RNA是生物体内最重要的物质基础之一，它与DNA和蛋白质一起构成生命的框架。但长久以来，RNA分子一直被认为是小角色。它从DNA那儿获得自己的顺序，然后将遗传信息转化成蛋白质。然而，一系列发现表明——这些小分子RNA事实上操纵着许多细胞功能。它可通过互补序列的结合反作用于DNA，从而关闭或调节基因的表达。甚至某些小分子RNA可以通过指导基因的开关来调控细胞的发育时钟。2 综述2.1 研究历史与发展前景2.1.1 定义双链 ...

Human RNA silences viral DNAMicroRNA plays an unexpected role in the process, researchers report in Science | By Charles Q ChoiRNA silencing can defend against viruses in humans, French scientists report in this week's Science. Surprisingly, say the scientists, microRNA (miRNA) appears ...

设计原则：1.克隆到shRNA表达载体中的shRNA包括两个短反向重复序列，中间由一茎环（loop）序列分隔的，组成发夹结构，由polⅢ启动子控制。随后在连上5-6个T作为RNA聚合酶Ⅲ的转录终止子。2.两个互补的寡核苷酸两端须带有限制性酶切位点。3.Stratagene发现29个寡核苷酸较之原先推荐的23个寡核苷酸可以更有效的抑制目的基因。4.在启动子下游的酶切位点下方紧连一个C，使插入片段和启动子有一定空间间隔 ...

MIRNA(microRNA)检测实验流程(加polyA法)一：概述microRNA(miRNA)是一类有大约22个核苷酸组成的非编码小分子RNA，其广泛存在于真核生物中。miRNA在个体发育的不同时期及不同组织中有不同的表达模式，都表明了其在发育和分化中起有重大的调控作用。迄今为此，对miRNA的检测方法主要有Northern Blot 等基于分子杂交的方法，这些方法敏感度低、耗时长、RNA的用量较大。miRNA qPCR D ...

miRNA是一类小分子RNARecent discoveries of small regulatory RNA molecules have been keeping the research community abuzz. Thus far, two classes of tiny regulatory RNA molecules have been identified.siRNAsThe first class encompasses the small interfering RNAs (siRNAs), which have an ...

1.Human embryonic stem cells express a unique set of microRNAs • ARTICLEDevelopmental Biology, Volume 270, Issue 2, 15 June 2004, Pages 488-498Mi-Ra Suh, Yoontae Lee, Jung Yeon Kim, Soo-Kyoung Kim, Sung-Hwan Moon, Ji Yeon Lee, Kwang-Yul Cha, Hyung Min Chung, Hyun Soo Yoon, Shin Yong Moon et al.SummaryPl ...

以下是常用的microRNA靶标数据库和软件资源列表，希望对microRNA的研究者有所帮助。（1） miRbase：众所周知的microRNA基因注释数据库。目前miRBase只提供了microRNA的靶标的预测软件的链接（如：PicTar）。 网址：http://mirbase.org/index.shtml（2） starBase：一个高通量实验数据CLIP-Seq（或称为HITS-CLIP）和mRNA降解组测序数据支持的mi ...

microRNA作用机制上海百传生物科技有限公司（Shanghai Bio-Tran Bio-Technology Ltd）是一家集研发，生产、销售和服务为一体的生物高科技企业，专业研发生产具有自主知识产权的分子生物学实验研究用产品，包括干扰核酸（siRNA）、微核酸（microRNA）、反义核酸（antisense RNA等）动物体内转染试剂盒、体外细胞株转染试剂盒、原代细胞转染试剂盒、DNA转染试剂盒、细胞凋亡检测试剂盒（TUN ...

组织和细胞RNA的制备一、 组织和细胞总RNA提取：异硫氰酸胍法（一）试剂准备1．CSB缓冲液：42mM柠檬酸钠；0.83% N-lauryl sarcosine(十二烷基，N甲基甘氨酸钠)；0.2 mM β-巯基乙醇。2．变性液：异硫氰酸胍（终浓度 4 M）25g、CSB缓冲液 33ml，混合直至完全溶解，可在65℃助溶。4℃保存备用。3．2 M乙酸钠：pH 4.0。4．异丙醇5．无水乙醇、70%乙醇6．酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）7．DEPC H2O：100ml ddH2O中，加 ...

Cloningof miRNAs was performed as described (Elbashir et al., 2001; Llaveet al., 2002a). In brief, ;600 mg of RNA was resolved through two laneson a denaturing 15% polyacrylamide gel. Labeled DNA oligonucleotideswere used as size standards. A gel fragment spanning the size rangeof 15 to 26 nucleo ...

摘要：生物通 www.ebiotrade.com　　对于富含miRNA的样品，如大部分组织样品，TaqMan和miRCURY平台都很有可能产生好的结果。然而，在对低丰度miRNA样品（如血浆样品）进行图谱分析时，miRCURY平台的高灵敏度和线性似乎更胜一筹。生物通报道 为准确评估血浆中的miRNA水平，来自丹麦的研究人员对市场上常用的三个miRNA表达谱平台进行了比较。该研究成果发表在近期的《BMC Genomics》上。近几年 ...

生物通报道 为准确评估血浆中的miRNA水平，来自丹麦的研究人员对市场上常用的三个miRNA表达谱平台进行了比较。该研究成果发表在近期的《BMC Genomics》上。近几年来，microRNA（miRNA）的研究持续升温。在临床上，miRNA有潜力成为癌症的生物标志物。尽管miRNA在组织中很丰富，但它们在血浆中还是很稀少的。据报道，血浆中的总RNA水平大约在6-300 ng/ml，而miRNA只占了极小的一部分。因此，对于 ...

lncRNA专题讨论帖开始了！大家一起来交流与沟通吧！导语lncRNA在抗病毒天然免疫反应中具有重要调控功能。这一发现有助于深入了解病毒与宿主的相互作用，为新型抗病毒药物的研制提供新思路和重要的理论依据。该项研究成果于11月12日在国际学术期刊《细胞》子刊《细胞—宿主与微生物》（Cell Host &Microbe）上发表。流感病毒感染宿主后，病毒RNA被宿主的病原识别受体所识别，激活抗病毒天然免疫应答。一系列天然免疫相 ...

短发夹RNA (small hairpin RNA，shRNA)可在细胞中被加工成siRNA。设计shRNA时，shRNA中两个反向重复序列的设计原则与siRNA序列的设计相同（可参考Transheep SiRNA序列的设计方法），需要重点考虑的是shRNA 环序列的长度及组成，而且环序列不能与靶基因内的其它序列具有同源性。1 .shRNA环序列的长度一般来讲，设计shRNA时选择3～10 nt长度的发夹环均可。Brummelkamp等& ...

本内容需要回复后才能下载！ 本书版权归作者所有，请于下载后24小时内删除MicroRNA-从基础科学到疾病生物学（高清中英文版）0作　　者/Author:Krishnarao Appasani 著 Not Specified 编出 版 社/Publisher:Cambridge University PressＩＳＢＮ:9780521118552出版时间/Publication Date:2009-08-20版　　次/Edition:1页　　数/Pages:580MicroR ...

导读：来自中山大学、中国科学技术大学和哈佛医学院的研究人员在新研究中开发出了一种新型的分子传递平台，利用该平台可克服当前将基于RNA的基因沉默技术用于癌症治疗的一个重要障碍：确保治疗能到达正确的位点并在该处停留。RNA诱导的沉默复合物来自中山大学、中国科学技术大学和哈佛医学院的研究人员在新研究中开发出了一种新型的分子传递平台，利用该平台可克服当前将基于RNA的基因沉默技术用于癌症治疗的一个重要障碍：确保治 ...

RNA干扰RNA干扰（RNA interference，缩写为RNAi）是指一种分子生物学上由双链RNA诱发的基因沉默现象，其机制是通过阻碍特定基因的翻译或转录来抑制基因表达。当细胞中导入与内源性mRNA编码区同源的双链RNA时，该mRNA发生降解而导致基因表达沉默。RNAi在基因沉默(silent gene)方面具有高效性和简单性，所以是基因功能研究的重要工具。siRNA是一类长约21～25 个核苷酸的双链小RNA分子 ...

1.区分生物学重复与技术重复生物学重复：指样本重复，比如3只小鼠，同时做一种处理，就是三个生物学重复。技术重复：一般是三次实验，比如对一块组织，提了三次RNA，做三次realtime。2.设置生物学重复的意义由于新一代测序技术的优越性以及高成本，曾一度忽略了“生物学重复”的重要性。但生物学重复对于测序实验的设计以及实验数据的解读和分析都非常重要。设置生物学重复：能够消除组内误差：生物学重复可以测量变异程度增强结果的 ...

什么是转录因子？ 0 0); font-family: arial; font-size: 13px; line-height: 18px;"● 转录因子（Transcription factor，TF）是一类能与特异性DNA序列结合并调节基因转录的调控蛋白。 0 0); font-family: arial; font-size: 13px; line-heig ...

● 转录因子与2012年诺贝尔奖 2012年的诺贝尔生理学或医学奖得主山中伸弥，在小鼠成纤维细胞中表达Oct3/4、Sox2、c-Myc以及Klf4四种转录因子，将成纤维细胞逆转形成多能干细胞（iPS），进一步揭示了转录因子在生物学研究中的重要研究价值。 每年的诺贝尔奖都会受到举世瞩目，而其获奖内容亦会引领新一轮新的研究热潮。 不想out的科学家们，你们还在等什么？！ ● & ...