RNA提取实验

Cas9技术从细菌的免疫系统，到一个众所周知的生物技术工具；从单一的一项敲除技术，到应用领域遍地开花，Cas9技术发展不可谓不快。到底有多快？看到13年14年那么多关于Cas9的nature、science、cell，我和我的小伙伴都惊呆了！Cas9技术广泛用于基因功能研究，到底有多广泛？说全能，我想不过分吧。不信？那就听我说说。研究基因功能，最常用的方法就是基因敲除、上调表达、下调表达、融合蛋白及做突变。说到基因敲除 ...

钦文 我用人的外周血4ml分离淋巴细胞，计数约400万个细胞，分成两孔种到24孔板中，培养3天后提取淋巴细胞的RNA，由于红细胞较多，提RNA前用红细胞裂解液先处理了细胞的，操作严格按照说明书进行，我用的是Takala的Trizol，500ul，800ul，1ml的量都用过，但是每次做到加入异丙醇离心后均未见沉淀，用DEPC水溶解后跑电泳也没有条带，不知道是什么原因，RNA提不出来，实验没办法进行，着急啊，请大家帮我 ...

能nca 各位师兄师姐，我做RNA提取了，很多遍了，到现在也不出结果，不知道哪里出了差错氯仿的保质期是多长时间啊，我师姐说氯仿从08年就买了，会不是时间太长了啊？liubingood 氯仿、异丙醇等这些化学试剂性质比较稳定，通常在说明书上不写保质期的，理论上可以长期保存，但是对于开封和未开封要区别对待。未开封的试剂试剂瓶的密封并不一定很严，多少会受外界水分等影响；一旦开封了就尽早使用，外界污染的可能性就存在了。通常对于这 ...

xthuangsui 小弟在做RT-PRC。样本来是SD雄性大鼠附睾精子悬浮液。这样的样本应该如何处理，提取RNA。飘渺的虫 普通用trozl法提取rna就可以吧，感觉上没有什么困难啊，主要是量要尽量一致大鹏鸟 先离心把精子沉淀下来，1000-4000转都可以，低转速精子活力更高点，然后再提取，按trizol说明书进行。或者可以用提取血液RNA的试剂盒来提取。qiagen有。ffly 可以用qiagen的RNeasy Kit系列来做 ...

微笑刺客521 我是想提取RNA，然后在反转录，最后做荧光定量PCR。我用的标本是Hep-2喉癌细胞株，试剂盒是Biomiga_EZgeneTM Biozol RNA kit，每次收集50ml培养瓶里面的细胞，但是总是提取不出来RNA，条带上面也没有，郁闷之极，求解~athena王 难道降解了？biolinkphilic 尝试用其它提取方法，不妨用传统的提取法或许有意想不到的效果。微笑刺客521 我感觉是不是我收集细胞的时候有问题啊~或者我 ...

赵东生 各位老师师兄、师姐们！我用的是mirVana? PARIS? Kit 提取血清MicroRNA，提了半个月，OD值总在1.3左右。我是严格按照说明书来的，而且酚氯仿抽提那步，我也很小心确保不会吸到蛋白质。大家帮我分析一下，问题会出在哪里啊？zhujoker 使用是mirVana? PARIS? Kit 提取血清MicroRNA的260/280就是在1.3到1.4左右，这个不奇怪！赵东生 谢谢斑竹！它protocol上说纯化的RNA，OD在1.8-2 ...

陈蛋蛋1号 本人想从石蜡切片中提取RNA，希望有经验的高手指点下迷津呀！lmnsmu 石蜡组织中RNA降解很多，不是很好做。我没有做过，在查资料时看到promega有个试剂盒可以从石蜡里提取RNA，具体编号不清楚。陈蛋蛋1号 lmnsmu wrote:石蜡组织中RNA降解很多，不是很好做。我没有做过，在查资料时看到promega有个试剂盒可以从石蜡里提取RNA，具体编号不清楚。好的！谢谢~本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、 ...

lilinling203 我正在做烟草总RNA提取的实验，osmotin的基因克隆实验，已经做了一部分了，现在正在做绿色荧光蛋白的构建，然后转染进细胞中，观察它的功能，，不知道有没有宁 ，做过这方面的实验，，请多多指点的woxingwosu 请说具体要问什么东西？lilinling203 woxingwosu wrote:请说具体要问什么东西？osmotin 与 pEGFP-C1构建时需要的酶切位点，自己设计了很多次都出现了问题的woxi ...

xcydcg 我现在搜集全血标本，想要提取RNA，但是由于临床标本搜集较难，所以想要先保存然后一起提。请教各位高手应该怎么保存血标本呢？如果标本放在4°后多长时间就必须放在零下八十保存。如果我先前用triton处理过细胞，是不是就提不出RNA了？谢谢各位指导。zhujoker 首先请你珍惜你的标本，还有就是一个问题，一般我们所谓的血指的是血清样本，建议血液立即处理，因为不处理的话会出现以下几种情况：1，溶血；2，RNA的降 ...

myskite 如何提取血清中的miR？提取前血清如何保存？freecell http://www.google.com/#sclient=psy&num=10&hl=en&q=serum+microrna&aq=f&aqi=g2&aql=&oq=serum+microrna&gs_rfai=&pbx=1&fp=280187d6f0589da0happyli85 做测序的话建议TRIZOL，做PCR的话建议用过滤柱的方法。TRIZOL 用INVI ...

cpubio 如题。当时把器官取了放在-20度，由于有别的事情，一直没有做，不知现在处理还行不行？谢谢！song333 of coursemaomao030119 应该没得问题的cpubio 谢谢楼上两位回答。我赶紧开展工作，争取俩星期内完成这个工作。maomao030119 看来你又拖了一天jerryri -20度RNA一般能稳定1个月,现在放了3个月了,降解比较严重zhcosa 够呛了吧。。。。。lim1896 RNA不好说！！！本文由丁香园论坛提 ...

maria55432 请教诸位是否有人同时提取rna和蛋白，是用什么方法提取的？或者有较好的试剂盒可以推荐吗？多谢！freecell http://www.ambion.com/catalog/CatNum.php?1921maria55432 谢谢，有使用过的人介绍一下经验吗？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

paper1983_1983 哪位前辈能告诉我用液氮研磨小球藻，提取RNA的具体步骤？军人的炮 1.准备新鲜的小球藻，必须是新鲜的，否则RNA会降解；2.准备小的研钵，每次到一点液氮，快速研磨；3.每次不要等液氮完全没有，大约研磨3-5次；4.最后专用的RNA提取试剂盒按步骤提取就可以了。5.最重要是时间短，快，低温，不要污染。cffhappy 小球藻是单细胞的，不用研磨液可以吧？好好 cffhappy wrote:小球藻是单细胞的，不用研磨 ...

bbg966 请问Trizol 和β-actin的中文是什么呀？英文缩写呢？谢谢吴兴 Trizol是mRNA提取时的试剂名字，另一个我在查better8392 Trizol是一种提取总RNA的试剂名称。一般的生物公司都有卖，不过属invitrogen公司的产品用户较广，但是价格也较高。国内的也有，价格较低。也可以自己配制，配方是公开的。actin是肌动蛋白的意思，所以β-actin是一种肌动蛋白。因为β-actin基因是看家基因 ...

战友们，这个东东是我从网上搜来的，感觉不错！与大家分享！第一部分RNA 提取策略一、提取原理1、RNA降解的原因：内源性RNAase是造成RNA降解的最重要原因，因为人体细胞自身就是几十分钟（20min？）mRNA被降解一轮，所以不管是组织还是细胞还是液体状样本在离开其中细胞的最佳生活状态后都应该尽快的被妥善的方法保存起来。外源性RNA酶也是一个需要注意的因素，最常见的就是毛发尤其头发，灰尘，唾液，塑料手套这四个兄弟。 ...

Trizol 法提取RNA实验步骤需要的试剂：氯仿异丙醇75%乙醇（in DEPC-treated water)RNase free水或者0.5% SDS溶液 1、组织匀浆(1)取出高温高压消毒后研钵，切取50-100mg冰冻组织置于研钵内，倒入液氮，研碎。(2)每50-100mg均浆组织标本中加入1ml的TRIZOL，标本的量不能超过TRIZOL体积的10%，否则会出现DNA污染。(3)将以上匀浆标本转移到1.5ml的EP管中，在15- 30°C放置 ...

刚才看到一个老兄讲到提高RNA浓度的方法,认为与离心的速度有关,其实不然.本人提的组织RNA的浓度,OD260/280值都在1.8-1.95之间,其中在相分离时上清吸取时不要吸到下一层很重要.本人现贴上TRIZOL说明书的RNA操作步骤,其中本人根据实验室的经验加以补充,供各位参考.Trizol 法提取RNA实验步骤需要的试剂：氯仿异丙醇75%乙醇（in DEPC-treated water)RNase free水或者0.5% SDS溶液 ...

RNA抽提一，准备工作1，实验器具与材料：（1）移液枪：1ml、200ul、10ul（2）吸头：1ml、200ul、20ul（3）吸头台：放置1ml吸头的一个，放置200ul和20ul的吸头一个（4）EP管1.5ml、100ul（5）玻璃研磨器（6）容量瓶：1000ml（7）盐水瓶：100ml（8）15ml塑料管一个（配75％乙醇用）2，实验器具的处理与准备（1）塑料制品：（包括吸头、EP管等）将塑料制品逐个浸泡于1‰DEPC水中（必要时 ...

玻璃器具、研钵处理方法：洗洁精洗后自来水冲7遍，双蒸水冲3次，60℃烤干，泡酸过夜后自来水冲7遍，双蒸水冲3次。烤干，150℃烤4小时。枪头、EP管等处理方法：0.1%DEPC溶液浸泡过夜，取出高压灭活DEPC 15分钟。实验用水：均用0.02%DEPC处理水配制。0.02%DEPC处理水配制方法：配0.02%DEPC水溶液，15Psi高压15分钟。组织处理：迅速取出称取100mg，放入1.5 ml EP管中（未处理），置-70℃保存。提取方法： ...

1。提取RNA的原理http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/2476706_0.html2。细胞RNA的提取（1）提取RNA要求的细胞数http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/72002_0.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/2860126_0.htmlhttp://www.dxy.cn/bb ...