感受态细胞的转化

1、 在冰上预冷2支14-ml BD Falcon聚丙烯圆底离心管。1支用来转化样品，1支做pUC18对照。同时将NZY+ broth培养基在42°C预热。 2、 冰上融化感受态细胞。融化时轻轻将细胞混匀并分装成100ul/管。 3、 每管中加入随试剂盒提供的4 ml b-ME（巯基乙醇）。 4、 温和转动试管，将细胞在冰上放置10分钟，每2分钟温和转动一下。 5、 每管细胞加入0.1&n ...

试验试剂： PLATE溶液： iZN ；40％聚乙二醇（PEG，分子量3350；Sigma P 3640）；0.1mol/L 醋酸锂 g；10 mmol/L Tris-HCl （pH7.5）；1 mmol/L EDTA； 实验步骤： 1、 用牙签从平板中挑取单菌落（直径2～3mm），转移到1.5ml的无菌离心管中。 2、 将10μl载体DNA（100μg）与10μl转化质粒DNA ...

实验原理： 体外通过基因工程手段所构建的含目的基因的重组质粒，选用转化和筛选技术， 可获得含重组的阳性克隆。在此阳性克隆中，DNA可在生物体系中大量扩增，繁殖， 保存以及表达目的基因的产物，这是ＰＣＲ体外扩增DNA所不能替代的。配合DNA重组技术，所获得的，不同目的需要的阳性菌株已广泛应用于科研，医药生产和生物发酵等领域。 质粒转化不同细菌有不同的转化效率，转化效率的高低与实验的成败直接相关， ...

（适用于 ...

用枪头挑取单克隆菌落，投入盛有10mlLB液体培养基的50ml离心管中。（同时做培养基和枪头的空白对照）

活体电穿孔法(in vivo electroporation) 是将外源基因通过电场作用，导入动物目标组织或器官。由于这种方法能有效导入外源基因，可在多种组织器官上应用,并且效率较高。活体电穿孔法的原理很简单,在直流电场作用的瞬间,细胞膜表面产生疏水或亲水的微小通道105～115μm ,这种通道能维持几毫秒到几秒,然后自行恢复。在此期间生物大分子如DNA 可通过这种微小的通道进入细胞。近年来活体电穿孔法用于转基因研究的报道不断增多,在基因治疗方面的优势也日趋显著,是一种很好的活体基因导入方法。

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PLATE 溶液： 40 ％聚乙二醇（ PEG ，分子量 3350 ； Sigma P 3640 ） 0.1mol/L 醋酸锂