感受态细胞的转化

通过本实验学习PCR反应的基本原理与实验技术。通过本实验学习重组质粒的检测技术。聚合酶链反应（polymerasechainreaction，PCR）是体外酶促合成特异DNA片段的一种技术。在待扩增的DNA片段两侧和与其两侧互补的两个寡核苷酸引物，经变性、退火和延伸若干个循环后，DNA扩增2n倍。PCR进行的基本条件是：（1）以DNA为模板（在RT－PCR中模板是RNA）；（2）以寡核苷酸为引物；（3）需要4种dNTP ...

将质粒DNA导入细菌的过程称为转化（Transformation）。此感受态细菌细胞在CaCl2低渗溶液中膨胀为球状（感受态细菌的制备，见前）。质粒DNA与CaCl2形成抗DNase羟基-磷酸钙复合物黏附于细菌表面，经42℃短时间热冲击处理，促进细胞吸收DNA复合物。在丰富培养基上生长数小时后，球状细胞复原并分裂增殖。被转化的细菌中，外源基因得到表达。在选择性培养平板上，可选出所需的转化子（即含有质粒DNA的细菌）。 ...

方法一：使用Vector NT 软件做分子实验，经常和不同的质粒打交道，了解各种质粒的图谱信息是必需的，invitrogen公司的这款软件绝对是分子生物学虫子们的福音，要想对质粒图谱了解更直观，安装这款软件是非常必要的。这款软件的软件包里面会包括invitrogen公司的所有质粒图谱信息和其他比较常见和经典的质粒图谱。方法二：查找质粒图谱的网站1. Vector Database（addgene）地址：http://www.ad ...

在一个下着雪的圣诞节前夜，一个饥寒交迫的小男孩，手里拿着一个破旧的三角瓶，在大街上走着。他敲开一家大门：“先生，你有板子要倒么？”结果给踹了出去：“没有！扫兴。”再一次：“女士，你有不愿做的板子要我帮忙么？一美分2板。”“谁还倒板子啊，都在做液体培养基。”可怜的小男孩就这样不断的被拒绝。他实在走不动了，疲乏地缩在一个墙角里。他不敢回家，因为他没有倒掉一个板子。家里而且也很冷，风可以从许多地方刮进屋 子里来。他冻得发抖，需要温暖。哪怕 ...

摘要： 转化是将外源DNA分子通过物理或化学的方法导入基因工程细菌中的过程是基因工程等研究领域的基本实验技术之一. 外源质粒DNA转化大肠杆菌1实验简介 转化是将外源DNA分子通过物理或化学的方法导入基因工程细菌中的过程是基 ...

摘要： 下文介绍大肠杆菌感受态细胞的制备和转化. 摘要: 1、感受态细胞的概念重组DNA分子体外构建完成后必须导入特定的宿主(受体)细胞使之无性繁殖并高效表达外源基因或直接改变其遗传性状这个导入过程及操作统称为重组DNA分子的转化. ...

摘要： 有人提出 冻存后转化效率降低且这种方法不适合大质粒.以下转贴为coli感受态细胞制备方法具体方法请最好查阅文献. 摘要: 但有人提出 冻存后转化效率降低 且这种方法不适合大质粒.以下为转贴具体方法请最好查阅文献E.c ...

摘要： 美国佛罗里达大学科学家使用纳米粒子技术开发出一种新的大肠杆菌检测法即使样本里只有一个大肠杆菌也能检测出来整个过程只需要20分钟. 摘要: 美国佛罗里达大学科学家使用纳米粒子技术开发出一种新的大肠杆菌检测法即使样本里只 ...

摘要： 下文教大家用CaCl2处理制备新鲜的大肠杆菌感受态细胞. 摘要: 1 从37℃培养16～20h的新鲜平板中挑取一个单菌落(如大肠杆菌DH52)或1ml新鲜的16～20h过夜培养物转到一个含有100mlLB培养基的1L或500 ...

摘要： 酵母高效转化的实验方法. 1、接种5ml液体YPAD或10ml SC30℃下振荡培养过夜.2、计数过夜培养物细胞密度以最终5×106个/ml的细胞密度接种50ml YPAD培养液.3、置30℃200r/min振荡培养至2×1 ...

摘要： 可以在蛋白质水平和目的基因功能水平等各个层次鉴定重组子。 可以在蛋白质水平和目的基因功能水平等各个层次鉴定重组子.基因水平的鉴定有酶切鉴定、 PCR 鉴定、核酸杂交和基因序列分析等.蛋白质水平鉴定有插入失活双抗生素对 ...

摘要： 学习克隆工作中最常用的双酶切将外源基因与质粒连接方法及操作技术. 一、实验目的：1、学习克隆工作中最常用的双酶切；2、学习将外源基因与质粒连接方法及操作技术；3、学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞的技术；4、了解细胞转化的概 ...

摘要： 下文总结了转化的要点及疑难解析. 1、存放:超级感受态细胞必须从干冰运送包装箱取出直接放入�80°C冰箱的底部.一定不要用液氮来存感受态细胞. 1)存放条件:超级感受态细胞对微小的温度改变也极度敏感因此必须存放在�80°C ...

摘要： 下文介绍几种常用转化细胞和转化技术. 致癌化学物转化细胞:转化叙利亚地鼠胚胎细胞实验实验步骤:1、取材:妊娠后第13天取材取数个同窝胚胎去头和内脏在无菌条件下剪碎至米粒大小再用0.25％胰蛋白酶(含0.01％EDTA)37℃ ...

摘要： 下文是感受态细胞转化操作流程及提高转化效率的建议. 1、在冰上预冷2支14-ml BD Falcon聚丙烯圆底离心管.1支用来转化样品1支做pUC18对照.同时将NZY+ broth培养基在42°C预热.2、冰上融化感受态细 ...

摘要： 下文为大家介绍质粒的酵母直接转化的方法. 试验试剂: PLATE溶液: iZN ;40％聚乙二醇(PEG分子量3350;Sigma P 3640);0.1mol/L 醋酸锂 g;10 mmol/L Tris-HCl ( ...

摘要： 体外通过基因工程手段所构建的含目的基因的重组质粒选用转化和筛选技术可获得含重组的阳性克隆. 实验原理： 体外通过基因工程手段所构建的含目的基因的重组质粒选用转化和筛选技术可获得含重组的阳性克隆.在此阳性克隆中DNA可 ...

摘要： 质粒DNA粘附在细菌细胞表面经过热击处理促进吸收DNA.然后在非选择培养基中培养一代再在含抗菌素的培养基中生长. 一、原理 质粒DNA粘附在细菌细胞表面经过42°C短时间的热击处理促进吸收DNA.然后在非选择培养基中培 ...

摘要： 活体电穿孔法是将外源基因通过电场作用导入动物目标组织或器官.大量的研究表明活体电穿孔法在基因治疗方面有非常好的应用前景. 1、什么是活体电穿孔 活体电穿孔法(in vivo electroporation) 是将外源基 ...

摘要： 体细胞重编程具有重要的理论和实践意义目前能诱导体细胞重编程的方法效率低限制了对重编程机制的研究.一种高效诱导体细胞重编程近日出现. 体细胞重编程具有重要的理论和实践意义目前能诱导体细胞重编程的方法主要有核移植（nuc ...