感受态细胞的制备

一、材料与试剂 1. SOBor2xYT 2. MES 3. 足够80个管子的TFB（50 mL）/400转化DMSO 4. 5 M NaCl 二、仪器 1. 离心机 三、步骤 1. 室温下在5 ml SOB或2×YT中接种菌并且培养过夜。 2. 加过夜培养的菌到5 ...

1. 从37℃培养16~20 h 的新鲜平板中挑取一个单菌落（如大肠杆菌DH52），或1 ml 新鲜的16~20 h过夜培养物，转到一个含有100ml LB培养基的1 L 或500 ml 培养瓶中。于37℃振摇培养约2~3 h（旋转摇床200~300 r/min），每隔20~30 min测量OD600值≈0.4。 2. 在无菌条件下将细菌转移到一个，用冰预冷 ...

进口高压灭菌器因其使用的安全性和自动化程序高，深受实验室用户的喜爱。那么，怎么才能买到称心如意的产品呢？怎样区分哪些产品是原装进口？哪些是国内组装产品呢？下面将告诉您如何选择进口高压灭菌器： 在选购进口高压灭菌器之前，首先需要了解，进口高压灭菌器，尤其是50升以上的进口高压灭菌器，在中国属于特种设备，在使用前，用户需要向当地的特种设备检查机构（或是锅检所，或是技术监督局，按各地的实 ...

1. 挑取适当菌株的 E.coli 单菌落接种于 2mlSOB 培养液中，37℃摇床过夜。 2. 取 0.5-1ml 过夜培养的菌液 转种到 50ml SOB 中，18℃剧烈震荡，直到 A600达到 0.6。 3. 将培养物转移到 50ml 离心管中，4℃ 4000rpm/min离心 10min。同时在冰浴 上配置 TB 溶液。 4. 弃上清，将离心管倒置于滤纸上，使培养液被吸干。 5. 取 1 ...

电穿孔转化感受态E.coli TG1细胞的制备 【材料和试剂】 （1）恒温旋转式摇床 （2）三角烧瓶（容量为1或2L） （3）50ml灭菌离心管 （4）低温高速离心机 （5）SB培养基 细菌培养用胰化蛋白胨 20g 细菌培养用酵母提取物 5g NaCl&n

近日，Cell Research在线报道了生化与细胞所李劲松研究组建立的一种高效诱导体细胞重编程的研究系统。

・CaCl2感受态细胞的制备的实验步骤 1．前夜接种受体菌（ DH5α或 DH10B），挑取单菌落于LB培养基中37℃摇床培养过夜（约16小时）； 2．取 1ml过夜培养物转接于100ml LB培养基中，在37℃摇床上剧烈振荡培养约2.5-3小时（250-300rpm）； 3．将 0.1M CaCl2溶液置于冰上预冷； 以下步骤需在超净工作台和冰上操作 4．吸取 1.5ml培养好的菌液至1.5ml ...

1．前夜接种受体菌（ DH5α或 DH10B），挑取单菌落于LB培养基中37℃摇床培养过夜； 2．取 2ml过夜培养物转接于200ml LB培养基中，在37℃摇床上剧烈振荡培养至OD600=0.6（约2.5-3小时）；3．将菌液迅速置于冰上。以下步骤务必在超净工作台和冰上操作 4．吸取 1.5ml培养好的菌液至1.5ml离心管中，在冰上冷却10分钟； 5．4℃下3000g冷冻离心5分钟； 6．弃去 ...

报告基因(reporter gene)是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。把它的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因，或与其它目的基因相融合，在调控序列控制下进行表达，从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控，筛选得到转化体。

下面的简单方案是Clhen等（1972）所用方法的变通方案，常用于成批制备感受态细菌，这些细菌可使每微克螺旋质粒ＤＮＡ产生5x106-2x107个转化菌落，这样的转化效率足以满足所有在质粒中进行的常规克隆 的需要。该方法完全适用于大多数大肠杆菌菌株，并且比方案Ｉ快速，重复性更好。该法制备的感受态细胞 可贮存于-70℃，但保存时间过长会使转化效率在一定程度上受到影响。

在自然条件下,很多质粒都可通过细菌接合作用转移到新的宿主内,但在人工构建的质粒载体中,一般缺乏此种转移所必需的mob基因,因此不能自行完成从一个细胞到另一个细胞的接合转移。如需将质粒载体转移进受体细菌，需诱导受体细菌产生一种短暂的感受态以摄取外源DNA。

国外的同学说一般他们克隆都是直接购买感受态细胞 转化，实验效率很高的。我总是以为如果是一般的克隆实验，自己做感受态好像够用了－－如果是建库，购买现成的感受态细胞 就是非常必要的首选，因为转化效率确实比实际手工制备的高2－3个数量级以上，特别是建库，能实实在在地提高实验的效率。实际上，除了建库以外，Stratagene为更好的表达蛋白、以及转化效率较低的巨无霸质粒，而特别优化了一些感受态细胞 ，做表达的人其实可以参考一下，有点用处的。在这里借用Merck公司提供的资料供大家参考。

碧云天生产的超级感受态细菌制备试剂盒(Supercompetent Cell Preparation Kit)是一种用于快速制备高转化效率大肠杆菌感受态细菌的试剂盒。超级感受态细菌制备试剂盒是在传统超级感受态细菌制备方法的基础上进行适当改良而成，操作便捷，转化效率高。

本文介绍了几种不同感受态细胞的特征和用途。

本文介绍了感受态细胞的制备原理及方法

本文介绍了高效率感受态细胞的制备过程中的注意要点

本文介绍了大肠杆菌感受态细胞的制备和转化方法。

本文介绍了大肠杆菌电转化感受态细胞的制备及转化方法

国外的同学说一般他们克隆都是直接购买感受态细胞转化，实验效率很高的。我总是以为如果是一般的克隆实验，自己做感受态好像够用了－－如果是建库，购买现成的感受态细胞就是非常必要的首选，因为转化效率确实比实际手工制备的高2－3个数量级以上，特别是建库，能实实在在地提高实验的效率。实际上，除了建库以外，Stratagene为更好的表达蛋白、以及转化效率较低的巨无霸质粒，而特别优化了一些感受态细胞，做表达的人 ...

方法一： 效率非常高，一般可到1undefined8，好时可到1undefined9，特别适宜于大片段与文库构建及珍贵材料的连接转化。 实验试剂： A液：1M，MnCl2 B液：1M，HEPES，pH=6.2-6.8，用无菌水配，配后不需灭菌； C液 称取CaCl2 0.10g，KCl 1.18g，全部转入细口试剂瓶，然后加入46ml三蒸水，轻轻振荡使所有组分充分溶解。将瓶塞盖上并用牛皮纸、棉线包扎，然后放入灭菌锅121 ...