DNA原位杂交技术

流式细胞仪(FCM)是八十年代集单克隆抗体、荧光化学、激光、计算机等高技术发展起来的一种先进仪器，已广泛应用于免疫学、生物化学、生物学、肿瘤学以及血液学等方面的研究和临床常规工作。其中检测人白细胞表面标志可对白血病、淋巴瘤作用迅速正确的诊断，对淋巴细胞群和亚群进行精确分类，还能分离纯化某一群或亚群细胞。 活细胞免疫荧光技术是用于FCM检测的标本准备，染色后也能在荧光显微镜下进行观察，在某些实验 ...

膜的流动性是生物膜结构的基本特征之一，主要指膜脂肪酸链部分及膜蛋白的运动状态。膜脂类分子在相变温度以上条件下主要有侧向扩散、旋转、左右摇摆、伸缩振荡、翻转及异化运动等方式。膜蛋白的运动方式大体分为侧向及旋转运动，主要受脂质双分子层的影响。脂肪酸不饱和键含量和链的长度明显影响着膜脂流动性，不饱和键的存在会降低膜脂分子间排列的有序性，从而增加膜的流动性，短链能减低脂肪酸链尾部相互作用，在相变温度下， ...

一、目的 本实验的目的是学会原位杂交的使用方法。了解各种原位杂交的基本原理和优缺点。 二、原理 原位杂交组化（简称原位杂交，in situ hybridization histochemistry；ISHH）属于分子杂交的一种，是一种应用标记探针与组织细胞中的待测核酸杂交，再应用标记物相关的检测系统，在核酸原有的位置将其显示出来的一种检测技术。原位杂交的本质就是在一定的温度和离子浓度下，使具有特 ...

PCR产物的检测凝胶电泳分析法 用琼脂糖凝胶电泳来分辨和检测PCR产物是最简单，也是最常用的方法。根据寡核苷酸引物的位置可以预知产物的长度，所以在正确的位置上出现分离的条带通常表示反应是成功的。凝胶电泳不仅可以鉴定产物的大小，监测扩增的情况，还可以用来纯化产物。PCR产物电泳分析中琼脂糖浓度片段大小（bp） 琼脂糖浓度 50～500 ...

琼脂糖凝胶电泳检查PCR产物（1） 用0.5 X 或1 X TBE 制备2%（W/V）琼脂糖凝胶，加入适量的溴化乙锭；（2） 琼脂糖凝胶的长度与宽度应该与PCR扩增管数量相适应，每一扩增管应有相应的一个电泳泳道，凝胶厚度为3～5mm，一般用三只梳子形成三排加样孔；（3） 将PCR扩增管从PCR扩增仪中取出，用加样器吸取扩增后的反应液，加入相应的 ...

干细胞与组织工程 组织、器官的丧失或功能障碍是人类健康所面临的主要危害之一，也是人类疾病和死亡的最直接原因。据美国权威资料显示，每年有数以百万计的美国人患有各种组织、器官的丧失或功能障碍，每年需进行800万次手术进行修复，年耗资超过400亿美元。我国是一个人口大国，因创伤和疾病造成的组织丧失或功能障碍病例居世界各国之首。据不完全统计，国内每年的烧伤患者达数百万，骨损伤患者高达约千余万，需做 ...

艾滋病的基因治疗进展 艾滋病是最严重的感染性疾病。截至2004年，全球感染艾滋病病毒的总人数已高达6 000多万(其中2 000多万已死亡)。特别是非洲地区，艾滋病已成为头号杀手。艾滋病病毒主要破坏人体的免疫系统，由于目前缺乏有效的治疗方法或特效药物，危害十分严重。发展基因治疗艾滋病的新方法对于艾滋病的预防和治疗都十分重要。目前，艾滋病的基因治疗以对抗病毒感染、干扰病毒反转录、复制、包装， ...

胚胎干细胞的应用 胚胎干细胞是从着床前囊胚的内细胞团(innercellmass，ICM)经体外分离培养而建立的全能干细胞系。ES细胞具有三大特点：①体外未分化状态下大量繁殖，具有自我更新能力；②在一定条件下具有向3个胚层(内、中、外胚层)组织和细胞分化的全能性；③易于进行基因改造操作。自Evans及Martin等人成功地分离和体外培养了小鼠ES细胞(roES细胞)以来，人们对ES细胞的研 ...

骨髓基质干细胞的应用 研究表明，骨髓内含有多种干细胞，其中骨髓源的间充质干细胞又被称为骨髓基质干细胞(bone marrow stem cell，BMSC)。各国学者对动物来源的BMSC进行了大量的研究，结果证实可以在体内外定向分化为软骨细胞、成骨细胞及脂肪细胞等多种中胚层来源的细胞。BMSC是目前组织工程种子细胞研究的焦点。作为组织工程种子细胞具有以下优点：取材操作相对简单，对机体损伤小 ...

干细胞的基本特征(一)更新 干细胞能通过有丝分裂产生子代干细胞。干细胞的分裂过程与普通的体细胞有所不同。高等动物的成体干细胞通过不对称分裂产生非对称的细胞决定子分割，使得一部分子代获得维持干细胞状态所必需的信息而成为子代干细胞，另外一部分子代细胞则不得不走向分化。也就是说，一个干细胞的后代中，只有一部分子代细胞可能保持与父代细胞相同的干细胞特征，另外一部分则丧失了干细胞的功能。 干细 ...

脂肪干细胞的应用 脂肪组织是人体内含量十分丰富的组织。随着肥胖症患者的增多，人类脂肪开始“富余”，并渐成为累赘。人们一直以为，脂肪仅仅只有储存热量作用，过量储存会导致脂肪肝、血管硬化。殊不知，脂肪还蕴藏有十分稀缺的干细胞资源。Zuk等人将脂肪抽吸术后的脂肪细胞(processed lipoaspirate cell，PLA)收集、消化后进行体外培养研究。经过不同的细胞因子的诱导，PLA能够 ...

真皮内干细胞的研究 皮肤可能也含有大量多潜能细胞。皮肤包含表皮层、真皮层及附属器等多种结构，表面积巨大，细胞资源丰富。而且，皮肤位置表浅、易于取材。近来研究表明，真皮内同样存在具有多向分化潜能的细胞。新生鼠真皮细胞经诱导后，不但能向多种中胚层细胞分化，甚至在特定条件下还能向内胚层细胞如胰岛细胞分化。从成年啮齿动物毛囊的真皮乳头(dermal papilla，DP)结构中可获得间充质来源的D ...

骨髓基质干细胞修复颅骨缺损 1.实验动物 毕格犬，平均1岁龄，雌雄不限。氯胺酮10mg/kg肌内注射诱导后，肌内注射速眠新o.1m1/kg全麻，常规消毒、铺巾。16号骨髓穿刺针于髂前上棘或股骨近端穿刺，抽取骨髓3-5ml，置于50m1离心管中(所用器械均事先肝素化)。 2.BMSC培养及成骨诱导 3.细胞-生物材料复合物制备pDBM(脱钙骨基质，上海市组织工程研究与开 ...

骨髓基质干细胞的诱导分化 1.成软骨诱导 骨髓基质干细胞培养7天后，加入软骨诱导液，诱导因子终浓度为TGF-p1 10ng/m1、IGFl00ng/m1、地塞米松0.1/1m01/L，转铁蛋白6.25ug/ml，诱导时间为2-4周。 2.成骨诱导 (1)骨髓基质干细胞培养7天后，加入成骨诱导液。诱导液成分为基础培养液加入10mmo/Lβ-磷酸甘油、10nmol/L维生素 ...

骨髓基质干细胞的分离与培养 骨髓基质干细胞(BMSC)是最常见的成体干细胞，其操作流程比较稳定和成熟。即以BMSC为例，初步阐述成体干细胞具体应用步骤与流程。 (一)骨髓基质干细胞分离培养的准备工作 1.配制DMEM培养液 取DMEM培养基10g，NaHC03 2.2g，L-谷氨酰胺300mg，维生素C 37.5mg，青霉素10万单位，链霉素10万单位，加适量三蒸水充分溶 ...

从头预测法预测蛋白质的结构 从理论上说，从头预测法是最为理想的蛋白质结构预测方法。它要求方法本身可以只根据蛋白质的氨基酸序列来预测蛋白质的二级结构和高级结构，但现在还不能完全达到这个要求。从头预测可以细分为以下几种类型。 (一)二级结构预测 首先从一级结构预测出二级结构，然后再把二级结构堆积成三维结构。由于目前对二级结构中氨基酸的中远程相互作用不完全清楚，因此预测准确率一般在6 ...

蛋白质工程在医学研究中的应用一、提高蛋白质的稳定性 葡萄糖异构酶(G1)在工业上应用广泛，为提高其热稳定性，朱国萍等人在确定第138位甘氨酸(Glyl38)为目标氨基酸后，用双引钩法对GI基因进行体外定点诱变，以脯氨酸(Pr0138)替代Glyl38，含突变体的重组质粒在大肠杆菌中表达。结果突变型GI比野生型的热半衰期长1倍，酶比活性相同。据分析，PM替代Glyl38后，可能由于引入了一个 ...

蛋白质从头设计 成功地从头设计一个蛋白质或活性位点必须正确理解所有相关问题，尤其是理论及设计相当关键。由于设计的蛋白质是由一个算法(algorithm)、采用一组描述相互作用的参数而产生，因此在设计参数和蛋白质特性之间可以建立直接的实验联系。 (一)设计策略 设计的一般策略是“设计循环”(designcycle)，就是理论设计和实验验证交互进行，逐步发展。首先由一个算法，基于某 ...

生物信息学与药物设计和新药开发 生物信息学与生物医学领域另一个重要应用是药物设计和新药研发。生物信息学所提供的数据和软件可以指导对药物作用靶位的选定和药物分子的设计。这种方法有快速、高效的特点，它的研究范围包括大分子结构功能的模拟和预报、药物分子与大分子结合的模拟、生物分子在指定细胞的分布和位点等。 新药研究和开发是一项耗资巨大的工程。过去，每一种新药从研发到投入市场平均需要10～ ...

比较基因组学，系统进化树 NCBI Entrez中的Blink(BLAS TLink)对寻找跨物种的蛋白质同源系和直系同源是一个很好的工具。Blink不是一个独立的工具，它是作为连接存在于NCBI Entrez的每一个蛋白质的记录中，Blink的词条(entries)是基于通过多对多的BLAST序列比对得到的结果，最好的前200个比对结果被呈现。在Blink的报告页面上，保守的蛋白质功能域 ...