DNA提取与纯化

1、植物基因组DNA的分离纯化一、实验原理核酸包括DNA、RNA两种分子，在细胞中都是以与蛋白质结合的状态存在。真核生物的染色体DNA是双链线性分子，原核生物的“染色体”、质粒及真核细胞器DNA为双链环状分子，有些噬菌体DNA有时为单链环状分子。95%的真核生物DNA主要存在于细胞核内，其它5%为细胞器DNA，如线粒体、叶绿体等。从细胞中分离得到的DNA是与蛋白质结合的DNA，其中还含有大量RNA ...

张宁，王凤山(山东大学药学院生化与生物技术药物研究所，山东济南250012《中国海洋药物》试验方案 51protocol.com杂志2004年第2期(总第98期)摘要:DNA的提取是分子生物学研究的基础技术，提取的DNA的纯度及结构完整性是进行基因工程各项研究所必需的条件。近年来一些新的或改进的DNA提取纯化方法不断出现，本文对从陆生动物、植物、微生物以及海洋生物提取DNA的方法进行综述。关键词: ...

实验目的：　　1．熟悉分子生物学实验的操作特点。　　2．掌握人类基因组DNA提取的基本原理。　　3．熟悉人类基因组DNA提取的基本方法。　　4．熟悉琼脂糖凝胶电泳的原理和操作。实验原理：　　用细胞裂解液裂解细胞膜，收集细胞核，加入SDS破裂核膜，用蛋白酶K使核蛋白降解成小片段并从DNA上解离下来，经苯酚�氯仿抽提去除蛋白质，无水乙醇沉淀DNA，75%乙醇洗涤DNA沉淀，真空干燥后，溶解于TE中即得 ...

目的意义DNA是遗传信息的载体和基本遗传物质，它在遗传变异、代谢调控等方面起着重要作用，是分子生物学和基因工程研究的对象，但无论是研究植物DNA的结构和功能，还是开展外源DNA的转化、转导的研究，首先要做的就是从植物组织中提取天然状态的高分子量的纯化DNA。因此，本实验的目的是学习植物基因组DNA提取方法、原理和DNA的鉴定技术。Ⅰ 植物基因组DNA 的提取（CTAB法）一、原理植物组织中绝大部分 ...

【实验目的】　　1．掌握碱裂解法小量提取质粒DNA的原理和方法。　　2．掌握琼脂糖凝胶电泳检测质粒DNA方法。　　3．熟悉质粒DNA提取与真核细胞核DNA提取的异同点。【实验原理】　　在pH值为12.0～12.6的碱性环境中，在去垢剂SDS的作用下，细菌的细胞壁与细胞膜均破裂，释放出大量的染色体DNA、RNA及质粒DNA。此时，所有双链DNA解聚成单链，但质粒DNA仍保持环状。当pH值恢复到中性时 ...

碱裂解法提取质粒利用的是共价闭合环状质粒DNA与线状的染色体DNA片段在拓扑学上的差异来分离它们。在pH值介于12.0-12.5这个狭窄的范围内，线状的DNA双螺旋结构解开变性，在这样的条件下，共价闭环质粒DNA的氢键虽然断裂，但两条互补链彼此依然相互盘绕而紧密地结合在一起。当加入pH4.8的醋酸钾高盐缓冲液使pH降低后，共价闭合环状的质粒DNA的两条互补链迅速而准确地复性，而线状的染色体 ...

李文强 张改生 汪奎 牛娜 潘栋梁西北农林科技大学 陕西省作物杂种优势研究与利用重点实验室 杨凌 7121 00摘要: 以小麦黄化苗为材料 通过简单差速离心、DNaseⅠ处理得到无核DNA 杂质的线粒体 用SDS 和蛋白酶K 裂解线粒体 经酚/氯仿抽提除去蛋白 并用RNase A 消化而得到单纯线粒体DNA(mtDNA)。对所提取的mtDNA 进行紫外吸收光度分析 A260/A280 平均为1.9 ...

背景知识:核酸的存在形式：脱氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA) 与蛋白质结合在一起以核蛋白（DNP）的形式存在。在制备核酸时通常破坏细胞壁及细胞膜来使核蛋白释放出来。植物总DNA包括细胞核DNA和细胞核外DNA前者存在于细胞核内，后者存在于细胞质中有半自主性复制活性的细胞器内，例如线粒体DNA(mtDNA)和叶绿体DNA(ctDNA)。核酸的理化性质：DNA为白色类似石棉样的纤维状物， RN ...

复旦大学某教授写的有关质粒的好文，贴在这里与大家共享 碱裂解法从大肠杆菌制备质粒，是从事分子生物学研究的实验室每天都要用的常规技术。可以我收研究生十几年了，几乎毫无例外的是我那些给人感觉什么都知道的优秀学生却对碱法质粒抽提的原理知之甚少。追其原因，我想大概是因为《分子克隆》试验方案 51protocol.com里面只讲实验操作步骤，而没有对原理进行详细的论述。这是导致我的学生误入歧途的主要原因。后 ...

(adapted from Bruce A. Roe Department of Chemistry and Biochemistry The University of Oklahoma Norman Oklahoma 73019 broe@ou.edu)Typically 2.5 - 3 volumes of an ethanol/acetate solution is added to th ...

This protocol yields plasmid DNA that is suitable for restriction digests and cloning purposes. This preparation method works well on all E. coli strains and also exponentially growing Rhizobium melil ...

(adapted from Bruce A. Roe Department of Chemistry and Biochemistry The University of Oklahoma Norman Oklahoma 73019 broe@ou.edu)Phenol extraction is a common technique used to purify a DNA sample (1) ...

【实验目的】 1．掌握核酸提取的基本原理和基本方法 2．掌握检测核酸浓度及纯度的原理及方法 【实验原理】 DNA是遗传信息的载体是最重要的生物信息分子是分子生物学研究的主要对象因此DNA的提取也应是分子生物学实验技术中最重要、最基本的操作。如不能有效的完成DNA提取方面的工作，那就根本谈不上进行分子生物学方面的实验。在DNA提取过程中应做到：1、根据不同研究需要，保证结构的相应完整性；2、尽量 ...

质粒DNA的提取是从事基因工程工作中的一项基本实验技术，但提取方法有很多种，以下介绍一种最常用的方法： 碱裂解法：此方法适用于小量质粒DNA的提取，提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析。方法如下： 1、接1%含质粒的大肠杆菌细胞于2ml LB培养基。 2、37℃振荡培养过夜。 3、取1.5ml菌体于Ep管，以4000rpm离心3min，弃上清液。 4、加0.lml溶液I(1％葡 ...

细菌基因组DNA的提取方法综述，提供了5种方法。 1 快速微量提取法A.取1.5ml菌体培养物于一灭菌Ep管中，12000rpm离心1min 丢去上清夜，收集菌体。B.加入400ul裂解液（40mMTris-醋酸，20mM醋酸钠1mMEDTA1%SDSpH7.8）混匀置于37oC水浴1hr。C.然后加入200ul5mol/L的氯化钠溶液，混匀后于13000rpm离心15min。D.取上清液，用苯酚 ...

DNA Extraction from Archival Formalin-fixed Paraffin-embedded Tissue SectionsAuthor: Shi et al. Source: Contributed by APostodoc Abstract: Describes two methods of extracting DNA from archived paraffi ...

TA CloningI. Initial mixture5 μl dd H2O1 μl PCR product1 μl ligation buffer2 μl TA vector (add second to last)1 μl ligase (add last)Incubate overnight at 15℃.II. Electroporation1. Chill ...

1.Grind in mortar and pestle or Waring blender with 5-7 volumes buffer A per g tissue. Use MCE at 350 l/L and if necessary with 5 ml 1 M DIECA/L. 2.Squeeze through cheesecloth two layers of Miracloth. ...

PurposeDNA extraction without phenol extraction and centrifugation.Procedure1. Lysis: the lysis buffer (usually 0.5ml) is added to the tissue or cell ( for a 75cm2 flask add 5ml directly to the cell). ...

This method is derived from a procedure developed by Toby Bradshaw and the Poplar Molecular Genetics Cooperative. We have tested the procedure with a variety of Populus species as well as tobacco and ...