DNA提取与纯化

20万元转让DNA抽提系列试剂盒本试剂盒是由复旦大学博士后研制。考虑到目前国内大多数实验室研究经费的实际情况，我们力求研制出性价比比较高的试剂盒。配方、生产工艺、生产材料经过一系列优化，操作方便、生产设备简单、生产材料价廉。生产成本是目前国内最低的。用该系列试剂盒分离、纯化的DNA纯度不亚于国外同类试剂盒，而且DNA的得率较高。经过三年的销售使用，客户反映该系列试剂盒质量可靠、价格低廉，是目前市场上性价比最高的D ...

关于真菌的DNA和RNA提取方法的总结！搞真菌基因功能研究的不可避免的总要涉及到DNA和RNA提取，由于真菌中有较多的多糖成分影响到所提DNA和RNA的质量和后续的分析。因此一个高质量的、实惠的提取方法是我们的优先选择，在此分享一下我一直在用的提取方法，供大家参考。真菌DNA的提取（方法一）1.取真菌菌丝0.5g, 在液氮中迅速研磨成粉2.加入4mL提取液，快速振荡混匀3.加入等体积的4mL的氯仿:异戊醇(24:1)，涡 ...

Chelex-100法提取微量DNA1. Add 1/50 volume of Proteinase K (10 mg/mL) and incubate the sample at 65°C for 2 hrs to overnight.2. 200 uL 5% Chexlex-100,add 10 uL proteinase K (20 mg/mL),inculate 2 hrs in 37 °C.3. 50ul Chelex液及lfl蛋白酶K水，56％温水浴消化2h后，煮沸8min，迅速放人冰盒冷却4min，以5000r／min速度离心lmin。吸取上清液 ...

1．溶液I—溶菌液：溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键，因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到抑制。葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解。EDTA：（1）螯合Mg2＋、Ca2＋等金属离子，抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用（DNase作用时需要一定的金属离子作辅基）;（2）EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因为溶菌酶的反应要求 ...

λ噬菌体是最早使用的克隆载体，λ噬菌体的基因组是一长度约为50kb的双链DNA分子，它在宿主细胞有两种生活途径，其一是裂解生长，环状DNA分子在细胞内多次复制，合成大量噬菌体基因产物，装配成噬菌体颗粒，裂解宿主菌再进行下一次感染；其二是溶源性生长，即感染细胞内λ噬菌体DNA整合到宿主菌染色体DNA中与之一起复制，并遗传给子代细胞，宿主细胞不裂解。平板培养时，裂解生长形成噬斑。液体培养时，裂解生长使菌液中宿主菌最 ...

质粒、噬菌体等经酶切，电泳；PCR产物经电泳后，常常需要对一些DNA电泳片段进行回收和纯化，用于亚克隆、探针标记等。DNA回收和纯化常用方法有压碎法、低融点琼脂糖法、冻融法等，也有现成的试剂盒供应。一、冻融法1. 紫外灯下仔细切下含待回收DNA的胶条，将切下的胶条（小于0.6g）捣碎，置于1.5ml离心管中；2. 加入等体积的Tris-HCl饱和酚（pH 7.6），振荡混匀；3. -20℃放置5-10min；4. 4℃离心10000g×5min，上层 ...

制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤，通常要求得到的片段的长度不小于100-200kb。在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素，以保证DNA的完整性，为后续的实验打下基础。一般真核细胞基因组DNA有107-9bp，可以从新鲜组织、培养细胞或低温保存的组织细胞中提取，常是采用在EDTA以及SDS等试剂存在下用蛋白酶K消化细胞，随后用酚抽提而实现的。这一方法获得的DNA不仅经酶切后 ...

通过本实验学习和掌握碱裂解法提取质粒碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状质粒DNA与线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离它们。在pH值介于12.0-12.5这个狭窄的范围内，线性的DNA双螺旋结构解开而被变性，尽管在这样的条件下，共价闭环质粒DNA的氢键会被断裂，但两条互补链彼此相互盘绕，仍会紧密地结合在一起。当加入Ph4.8的乙酸钾高盐缓冲液恢复pH至中性时，共价闭合环状的质粒DNA的两条互补链仍保持在一起 ...

从组织中获取DNA难吗？不难，真不难。高一就有开设的从鸡血中获取DNA的生物实验课，很简单的几步就可以得到DNA。但要想获取高质量的DNA，尤其是从一些富含多糖、多酚、淀粉、纤维和蛋白的组织，后面用于酶切、高通量测序大片段文库的构建还是有一定的难度的。 最近协助北京农业生物技术研究中心一个老师提取桃叶片DNA还是遇到了一些困难，因为老师要做桃的个体重测序，因此对DNA的要求还是非常高的。之前跟其 ...

做了好多DNA提取保存，吃了很多亏给大家点建议吧：（有疑问可以回帖，有时间我会回答如果我知道）。 血液保存：EDTA抗凝最好，肝素也可以不过经常会影响后续试验，一般可以保存在-20和-80保存3-5年没有问题——保存时间越长似乎dna提取越少，再长时间我也没有试过，注意解冻一次大概损失20%左右（提取感觉估计得到的可能不准），放的时间长也会降解一些。4°做好不要太 ...

这篇文章可以帮助纠正一些常见的关于DNA（以及RNA）定量、纯度方面错误的信条。尤其是提取像土壤这类的环境样品的情况下。 提取环境土壤获取大量高纯度DNA比提取其它类型样品难度都要大，因为环境样品微生物裂解的复杂性和抑制因子的去除问题。而要定量分析从中提取得到的核酸就相对比较容易。可是如果定量、定性分析不得要领，你可能会误读结果，导致无谓反复试验甚至错过实验中产生的关键信息。 &n ...

这周讨论一项常用的技术，即使常用但仍引起部分人核酸分离焦虑症。那就是基因组DNA的纯化去杂质。 场景是这样的：你有一份采自南太平洋中部一个偏僻小岛上首次发现的古老兰花品种根际土壤样品。你使用了非PowerSoil Kit法提取其中的微生物DNA。最终DNA含有太多杂质，无法PCR扩增。因此需要去除腐植酸等PCR抑制因子。你需要所有的核酸分子通过全基因组鸟枪测序…&he ...

一、实验试剂 1. 使用前，将RNase A全部加入Solution I中并于4度保存。 2. 按下表用无水乙醇稀释DNA Wash Buffer，并于室温保存。 D6948-00B: 加入8 ml无水乙醇。 D6948-01B: 加入80 ml无水乙醇。 D6848-02B: 加入80 ml无水乙醇。 二、实验步骤 1. 取1.5-5 ml 菌 ...

一、实验试剂 Absolute (96%-100%) ethanol 二、实验设备 1. Centrifuge with swinging-bucket rotor at room temperature capable of 3000 x g (such as Eppendorf 5810 with MTP rotor) 2. Adapter ...

1. Weigh 500 mg of glass beads in a 2 ml centrifuge tube add 0.2-0.5 g soil sample. Add 0.8 ml Buffer SLX Mlus. Vortex at maximum speed for 3-5 minute to lyse samples. For the best result A Mixer Mil ...

Note: The following protocol is based on using OBI’s vacuum manifold (Product No. VAC-03). 1. Set up vacuum manifold by following manufacturer’s instructions. 2. Place waste ...

材料和试剂 1. 乙醇 2. 异丙醇 3. 氯化钠 4. EDTA（乙二胺四乙酸） 5. SDS（十二烷基磺酸钠） 6. Tris，pH7.5 仪器 1. 研钵及研杵 2. 台式离心机（Eppendorf） 3. 振荡器（VWR） 步 ...

基因组DNA提取是最基本的分子生物学实验技术，是做各种核酸实验的基础。不同生物的基因组DNA提取方法也会有所不同。

生物技术的发展日新月异，随着PCR技术在各个领域的应用，包括医学方面疾病检测、农业方面转基因检测以及其他很多方面的应用等，高通量的样本核酸提取已经变得极为迫切，很多公司推出了全自动核酸提取的仪器，各种原理的都有，乱花渐欲迷人眼，有中看不中用的，贵还不好用的，如何选择一款合适的核酸自动提取仪，就得细细分析，免得花了冤枉钱，整一堆摆设回来。 从提取原理上来看，有离心柱法、磁珠法；离心柱 ...

一、培养细胞的 DNA 含量的测定 制备单细胞悬液于 200μ l 的 PBS 缓冲液中； 加入 2ml 预冷的 70%乙醇，4℃保存； 附：细胞固定的一般步骤 1. 取单细胞悬液 1～2×106 个细胞于 PBS（PH=7.2）缓冲液中； 2. 300g 离心 5 分钟，弃上清，反复两次； 3. 重悬细胞于 0.5ml PBS 缓冲液中； 4. 将细胞悬液放置于 2～3ml ...