DNA提取与纯化

Materials: 1.TE solution o10 mM Tris (pH to 7.5) o1 mM EDTA (pH to 8.0 to dissolve) 2.Frozen agarose gel piece containing the desired DNA fragment Supplies: 1.Micropipetter and tips 2.Microcentrifuge ...

Use from 0.01 - 0.1 gram plant material. Grind the plant material with liq.N2 in a mortar.We normally use some alumina to crush hard tissue. Transfer the ground tissue to a eppendorf tube. Add 1 ml ex ...

实验步骤： 1、待回收的DNA段经电泳分离后，从琼脂糖凝胶上切下所需DNA段，放在1.5ml EP管中； 2、加入3 倍（请准确估量凝胶的体积）体积的溶胶液（以100μl 体积胶加入300μl 溶胶液为一次标准反应），室温下放置5分钟或50℃ 保温3分钟，其间轻摇EP管几次使胶完全融化； 3、加入10μl玻璃奶（玻璃奶使用前请充分摇匀），颠倒混匀，冰浴下放置10分钟。每隔2~3分 ...

Isolation of DNA from Agarose Gels (Paper Slurry Method) This procedure isolates DNA from agarose gels by filtration through a filter-paper column.The column is made in a 500 µL tube from a slur ...

1.Add an equal volume (equal to sample volume)of P/C to sample. 2.Mix (shakedon't vortex). 3.Take aqueous (upper)layer.(If dirty samplerepeat Ph/Chl step until interface is fairly clean). 4.Add equal ...

Preparation of linear polyacrylamide used as carrier in ethanol precipitation of nucleic acids Linear polyacrylamide can be used as an efficient neutral carrier for precipitating nucleic acids with et ...

1.Crash Individual sand flies in 0.5 ml lysis buffer (50 mM NaCl 10 mM EDTA50 mM Tris-HCl pH 8).2.Incubate The sand fly homogenates with 100 ng/ml Rnase at 37 ℃ for 30 minutes. 3.Incubate The cell lys ...

目的 ： 采用碱变性法，学习小规模制备质粒DNA的技术 原理 ： 碱变性抽提质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH值高达12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离，当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH值至中性时，变性的质粒DNA又恢复原来的构型，保 ...

Deproteination using phenol/chloroform (Maniatis et al.1982) 'Phenol' as used is Analar grade.Phenol should be melted at 65℃ 8-hydroxyquinoline added to a final concentration of 0.1%and equilibrated t ...

Isolation of Mouse genomic DNA 1.Kill mouse by cervical luxation and dissect liver.Add to a 50ml tube and place on liquid nitrogen.Grind to a powder under liquid nitrogen using a mortar and pestle. 2. ...

本法用含EDTA的溶液洗涤细胞，SDS（十二烷基硫酸钠）破碎、裂解细胞，消化蛋白质，使核蛋白解聚并使细胞内的DNA酶失活，用酚、氯仿变性蛋白质并去除杂质，最后用乙醇沉淀得到纯化的DNA。 1.裂解缓冲液 2.苯酚-氯仿溶液 3.氯仿-异戊醇溶液 4.冰无水乙醇及70%乙醇 5.TE缓冲液 6.5mol/L NaCl 1.处死小白鼠一只，取新鲜肝脏，用生理盐水清洗去血水。 2. ...

1.Excise band of interest from a TAE gel; estimate volume by weighing the gel slice. 2.Dissolve the gel slice in 3 volumes of NaI (from Geneclean kit)at 55E C for 5 min or until the gel dissolves. 3.A ...

Important : Extract the DNA within one week of receiving samples.Samples that have been processed should be frozen to prevent degradation.Freeze samples between use each day. 1.Add 600 ml of 50 mM NaO ...

目的： 1.从人或动物血液中抽提DNA 。 2.从体液，唾液，尿液中抽提DNA 。 3.从人体组织，切片和各种临床样品中抽提DNA 。 4.抽提出的DNA 可以用于PCR及相关诊断。 原理： 临床常常需要从各种生物组织或细胞中抽提基因组DNA ，用于病症的辅助性分析和诊断。样品根据试剂盒（SK1341试剂盒，上海生工）提供的方法进行处理，然后在特定的DCL Buffer中用Protenase K ...

Section of Cancer GenomicsGenetics BranchNCI National Institutes of Health Reagents Chloroform Mallinckrodtcat.4440 EDTA0.5 M Ethanol100% Ethanol70% Isoamyl Alcohol Sigmacat.I-3643 Phenol Gibco BRLCat ...

按照RNA 分离操作方案在完全移去水样层后，匀浆中的DNA 存在于中间层和苯酚层中也可以被分离出来。在沉淀和多次洗脱后，DNA 溶解在8 mM NaOH中。用TRIZOL试剂从组织和培养细胞中完全回收的DNA 可以用来做样品中DNA 含量的测定。同时抽提的基因组DNA 可以用于对Northern analysis的结果进行标准化，因为DNA 变异程度比总RNA 或组织重量要小。 实验所需但试剂未提 ...

1.对于微量DNA样品溶液（如100ml以下），应预先将DNA溶液以TE或无菌水稀释至一定体积。以减少第5步中的DNA损失。 2.加入等体积的酚:氯仿:异戊醇（25:24:1）。 3.剧烈振荡管中内容物，将水相和有机相充分混匀，使之成为乳浊液。 4.室温下静置以初步分层。再用离心机于室温以10000rpm离心至少5分钟以上，使无机相与有机相充分分开。 5.用剪去尖头的微量移液器枪头小心移出 ...

Section of Cancer GenomicsGenetics BranchNCI National Institutes of Health Reagents Chloroform EDTA0.5 M Ethanolabsolute Isoamyl alcohol SigmaCat.I-3643 Phenol Phosphate Buffered Saline (PBS)1X Protei ...

【目的和要求】 1.学会CTAB法提取细菌总DNA。 2.掌握DNA的琼脂糖凝胶电泳法。 【实验原理】 DNA在生物体内是与蛋白质形成复合物的形式存在的，因此提取出脱氧核糖核蛋白复合物后，必须将其中蛋白质去除。CTAB（溴代十六烷基三甲胺）是一种去污剂，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中可溶并且稳定存在，若降低盐浓度，CTAB与核酸的复合物会沉淀出来，而大部分蛋白和多糖仍溶于溶液中。 DNA的电泳 ...

Abstract: The protocol is simple and fairly rapid.It does not require the use of organic solvents but rather utilizes salt extraction to precipitate contaminating proteins.High quality DNA is obtained ...