DNA基础知识

1 如果是染色体畸变，你可以用正常细胞的染色体与药物处理过的细胞的染色体对照进行检查，大致确定好事那个染色体后用FISH技术来检测染色体2 如果是基因发生了点突变，首先要明确是那个基因会有发生突变的趋势，采用SSCP（单链构象多态性）确定是否发生有突变，然后用测序法验证3 如果已知该药物所导致的突变，就可以采用测序，单碱基延伸法等方法进行检测 ...

T-RFLP的主要原理与步骤大体如下：1.提取DNA；2.设计1-2对通用引物(主要根据16S rRNA基因)进行PCR扩增，（每对引物的1条5'端标记荧光);3.产物纯化后酶切.每组酶切产物中只有一条片段末端标记了荧光.4.酶切产物通过毛细管电泳或测序胶电泳荧光扫描.5.结果分析:每1个荧光峰至少代表1个细菌或几个近缘的细菌峰面积可粗略认为与细菌在某一部位的微生态群落中的数量. ...

T-RFLP中文可翻译为：末端限制性片段长度多样性，又可以称为16sRNA基因的末端限制性片段分析技术。是一种新兴的研究微生物多态性的分子生物学方法，日亦受到研究人员的重视。该技术已经成功应用于各种微生物群落的分析比较、研究微生物群落多样性及结构特征等多方面。T-RFLP的技术原理是根据的保守区设计通用引物，其中一个引物的5‘末端用荧光物质标记，常用荧光物质有HEXTET6-FAM等。提取待分析样 ...

一、核酸的纯化　　在分子克隆的所有操作中，最基本的操作是核酸的纯化。其关键步骤是去蛋白质，通常只要用酚/氯仿。氯仿抽提核酸的溶液即可。每当需要把克隆有某一些所用的酶灭活或去除以便进行下一步时，可进行这种抽提。然而，如要从细胞裂解液等复杂的分子混合物中纯化核酸，则要先用某些蛋白水解酶消化大部分蛋白质后，再用有机溶剂抽提。这些广谱的蛋白酶包括链霉蛋白酶及蛋白酶K等，它们对多种天然蛋白均有活性，（1）用 ...

该技术在应用的过程中，肯定需要在实验条件上不断进行改进，而这种改进的好坏自然而然需要实验结果的验证。。V. Grüntzig在2002年做了该工作的一部分，结果认为，在限制性酶切时，很有必要去除其中影响DNA的酶切过程，并且实验证明了具体的酶切时间。具有说服力的结果如下： 1，T-RFLP出数据的速度快，不过只是具有半定量性；2，DNA片断的分离有两种常用的方法：1。1 凝胶电泳，近来使用的比较 ...

DNA电泳（主要内容如下） Preparation of Agarose Gel and Electrophoresis Extraction of DNA From Agarose Gel Extraction of DNA from Acrylamide Gels DNA Marker Denaturing Gradient Gel Electrophoresis Two ...

Southern杂交One important thing for transfer:the weight of the object resting on top of the blotting apparatus should not exceed the weight equal to a 500 mL half full bottle for it will give your (nitr ...

DNA转染・ Transfection of Mammalian Cells Using Lipofectamine (LTI) ・ Guide to Eukaryotic Transfections with Cationic Lipid Reagents (PDF) (LTI) ・ Transfection of Mammalian Cell ( ...

DNA标记（主要内容如下） DNA Labeling by Nick Translation Random Primed Labeling End-Labeling Purification of Labeled DNA Non-isotopic Labeling Others DNA Labeling by Nick Translation§ DNA Lab ...

DNA克隆（主要内容如下）・ General Procedure ・ PCR Cloning ・ Subcloning ・ ET Cloning ・ Vector Preparation ・ Ligation Reaction ・ Colony Screening General Pro ...

DNA测序（主要内容如下）・ Sequencing Gel Preparation ・ Preparation of Templates ・ DNA Sequencing by the Dideoxy Method ・ DNA Sequencing by the Chemical Method ・ Dye Termi ...

RNA labeling (Amersham Pharmacia)For the generation of radiolabelled single stranded RNA for use as hybridization probes 32P-pCp 3' End-labeling RNA (Jim Brown Lab)This procedure includes two metho ...

・ RNA Gel (Crawford Lab)・ Gel Electrophoresis of RNA (Beverly Faulkner-Jones)great tips on RNA gel electrophoresis.・ Northern Gel and Transfer (gopher://iubio.bio.indiana.edu ...

・ cDNA Synthesis (Crawford Lab)mRNA can be converted into DNA (copy DNA cDNA) by annealing oligo-dT to the 3' poly-A tail that occurs on all eukaryotic mRNA. After the dTs bind to the As we wi ...

Primer extension analysis is used to determine the location and quantitate the amount of the 5´-end of specific RNAs. An end-labeled oligonucleotide is hybridized to RNA and is utilized as a primer b ...

mRNA末端快速扩增（RACE）Rapid Amplification of mRNA Ends by PCR (RACE) (PMCI Research) ...

Quantitative Determination of Peptides by Sulfhydryl (-SH) Groups New (Contributed by David Van Horn Dept. of Chemistry UC Berkeley Greg Bulaj Dept. of Biology University of Utah)This is the standard ...

蛋白质电泳（主要内容如下）One-Dimensional SDS-PAGE Two-Demensional SDS-PAGE Protein Electrophoresis in Agarose Gel Gel Staining Recipes One-Dimensional SDS-PAGE ・ Protein Gel and Staining (Gottschling Lab ...

Gene Mapping (Amersham)DNA extraction PCR amplification and gel resolution. ...

A Simplified System for Rapid Generation of Recombinant AdenovirusesGive detailed guide to the construction of recombinant adenoviruses. ...