这一方法简单, 省钱, 不用酚/氯仿, 可用于酶切鉴定和转染细胞测试表达情况(尤其是直接观察表达情况的荧光表达载体). 具体操作步骤如下:Miniprep Plasmid Extraction1. Grow bacteria O/N at 37°C with vigorous aeration in 3 ml LB or 2xYT with appropriate antibiotic.2. Harvest by micro-centrifugation at maximum rpm (16000g) for 1 min (keep the 1 ml left ...
本人正在从事TILLING的研究,希望大家参与讨论.以下是几篇关于该技术的文献.大家可以自己到网上找,都能找到.找不到可以MAIL我,我可以传给大家.因为这里附件不能装那么多文献,所以大家可以直接找我要.1.McCallum C.M., Comai L., Greene E.A., Henikoff S. 2000 Targeted screening for ind-uced mutations. Nature Biotechnol. 18:455-72.McCallum C.M., Comai ...
这种方法抽提的质粒质量和浓度都不错，是我们实验室根据标准方法改进后总结出来的，和大家共享，希望能加点分。1、前一天晚上将要抽提的菌种接种一单菌落到盛有100mL 液体培养基的500mL三角瓶中，于37℃，250rpm摇床培养过夜。2、将此培养液转移至2个50mL离心管中，5000rpm离心10分钟，弃上清液。3、向2个离心管中各加5mL SolI，剧烈振荡使菌体尽可能均匀重悬。4、向2个离心管中各加10mL SolII，轻轻颠 ...
链接如下。http://140.112.78.220/~brc/Research/Biomed/Biomed2-7.htm或许有朋友看不到。故再贴一遍。因微陣列之簡介及其應用 陳 健 尉 科學家預計於西元 2003 年，媲美 60 年代登月計劃的人類染色體組研究計劃將結束其長達約十五年的漫長發展過程 (1)。屆時，人類四十六條染色體九成五以上將定序完畢 (解開遺傳密碼)，大部分的模式生物 (model organisms) 亦可望完成定序工作，全球的生命科學家也隨著這一天 ...
此贴是本人在2008年的一篇原创帖子“连接经验分享”主体基础上更新、完善而来的版本。6年的时间让我从研究生变成了老师，一路走来，颇多感慨。丁香园一直是一个好伙伴，我也从新人变成了铁杆战友。前些天有人让我给学生讲讲分子克隆技术，就翻出这篇连接经验，完善后讲给学生，仍然很受欢迎。岁月改变了我们的生活和容颜，而不变的是那些历久弥新的经验之谈。讲完之后我就想，要把这篇新版“连接经验”重新发到丁香园上来，来帮助广大战友多获成果 ...
目前关于TILLING 技术炒得比较火，笔者正在从事这方面的工作，搜索论坛里对该技术讨论得不是很多，从目前形势看TILLING 技术技术将会广泛应用。于是就自己所了解的东西写出来供大家研究，同时也希望有兴趣者和我交流希望加分TILLING 技术原理及其在植物功能基因组中应用进展TILLING， 即Targeting Induced Local Lesions IN Genomes(定向诱导基因组局部突变技术)，是由美国Fred Hutchins ...
怎样选出最合适的Taq酶随着分子生物学研究发展的不断广泛和深入，PCR已成为一门相当成熟的常规技术，而热聚合酶（即Taq酶）的合理选择是PCR成败与否的一个关键因素。目前市面上有多种Taq酶，能够满足多方面的实验需要。那么，如何选择最合适的Taq酶？根据用户经常考虑的指标，如特异性、保真性、耐热性、扩增速率、扩增片段长度、能否进行复杂模板扩增以及优化条件难易等等，我们在这儿将主要的Taq酶归归类，其性质、用途也就一 ...
DNA上所携带的遗传信息，需要通过RNA为中介体，合成出组织和正常生理功能所需要的蛋白质，这个过程被称为基因的表达。在生物体中不同的组织和器官所表达的基因群是不一样的，我们把基因群的表达状况称为基因表达谱。目前，高通量地研究基因表达谱的方法主要有两种，即生物芯片和基因表达串联分析（serial analysis of gene expression, SAGE）。基因芯片所能检测的基因必须是已知的基因，放在芯片上几种基因的探针就 ...
分子杂交技术互补的核苷酸序列通过Walson-Crick碱基配对形成稳定的杂合双链分子DNA分子的过程称为杂交。杂交过程是高度特异性的,可以根据所使用的探针已知序列进行特异性的靶序列检测。 杂交的双方是所使用探针和要检测的核酸。该检测对象可以是克隆化的基因组DNA,也可以是细胞总DNA或总RNA。根据使用的方法被检测的核酸可以是提纯的，也可以在细胞内杂交, 即细胞原位杂交。探针必须经过标记，以便示踪和检测。使用最普遍 ...
TOP10 chemically competent cells( modified from http://openwetware.org/wiki/TOP10_chemically_competent_cells#CCMB80_buffer)I also use this protocol to make Ecoli compent cell. It is pretty good.You can start from the fresh clone on plate, but you need a big clone or several clone ...
Cytonacx： RNTein Biotech Lab.生物高科技领域内分子医学治疗的最新应用产品RNTein Biotech Lab.郑重宣布Cytonacx的诞生。该产品是一种新型的非病毒纳米颗粒，其大小在80-200 nm。这种新型颗粒对细胞或组织具有很高的亲合性，但没有病毒基因成份所存在的潜在危害。Cytonacx最基本的功能就是高效率地对细胞实施基因转导（Transduction）这样的分子生物学改造。可以想象，这种具有 ...
:)Genes and DiseaseBethesda (MD)本书汇编了关于基因与疾病关系方面内容的文章。基因疾病是由他们造成的人体的异常组成。同时，这种疾病影响身体的各个系统，可出现在不只一个章节Genes and Disease is a collection of articles that discuss genes and the diseases that they cause. These genetic disorders are organized by the parts of the body that ...
转帖自生物谷2011年中国工程院院士增选进入第二轮评审的候选人名单2011-7-1 11:32:14来源：中国工程院 作者：中国工程院 【大 中 小】药厂的竞争合并与并购？大鱼吃小鱼还是合并？医药巨头面临巨大的选择更多专题...相关阅读葛兰素史克16.5亿美元收购Reliant药业英国最大的制药企业葛兰素史克公司（NYSE: GSK）完成收购Reliant药业公司，收购价为16.5亿美元更多阅读--（各学部名单按照姓名拼音排序）中国工程院20 ...
核酸疫苗（ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｖａｃｃｉｎｅ），也叫基因疫苗（ｇｅｎｅｔｉｃ ｖａｃｃｉｎｅ）、核酸免疫（ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ）、ＤＮＡ免疫（ＤＮＡ ｂａｓｅｄ ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ），它是利用基因重组技术直接将编码某种抗原蛋白的外源基因（ＤＮＡ）与质粒重组后，直接导入动物细胞内，并通过宿主细胞的转录系统合成抗原蛋白，诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答，以达到预防和治疗疾病的目的。核酸疫苗包括ＤＮＡ疫苗（ ...
最近在做质粒提取方面的实验，搜集了相关资料与大家分享，这是传统提质粒的方法，与试剂盒提质粒不同，通过这个过程大家可以更好的明白实验原理。1．目的学会最常用的小量制备质粒DNA的碱裂解方法。2．原理根据共价闭合环状质粒DNA与线性DNA在拓扑学上的差异来分离。在pH12.0~12.5这个狭窄的范围内，线性DNA双螺旋结构解开而被变性。尽管在这项的条件下共价闭合环状质粒DNA也会变性，但两条互补链彼此互相盘绕，仍会紧 ...
最近看了一篇关于碱法抽提质粒的文章，觉得很好，特拿出来和各位分享。碱裂解法从大肠杆菌制备质粒，是从事分子生物学研究的实验室每天都要用的常规技术。可以我收研究生十几年了，几乎毫无例外的是我那些给人感觉什么都知道的优秀学生却对碱法质粒抽提的原理知之甚少。追其原因，我想大概是因为《分子克隆》里面只讲实验操作步骤，而没有对原理进行详细的论述。这是导致我的学生误入歧途的主要原因。后来我发现其实是整个中国的相关领域的研究 ...
不知道那些大侠做过,可以一起讨论一下.我试了几种转染试剂 ( JetpET, Lipofectine), 转染效率都极低 .只有电转的时候,转染效率也至多达到5%.不知道怎么拿这个细胞做luciferase.筛选浓度我已经用到1mg/ml了,不知道大家都用的多少?常规用FUGEGE6效果好点, 想效率高用逆转录病毒!"筛选浓度"你指什么? G418 我用过1200ug/ml, 1500ug/ml.对，就是指的G418.大侠你用过Fugene6吗?转染效率有 ...
碱法质粒抽提用到三种溶液：溶液I，50 mM葡萄糖 / 25 mM Tris-Cl / 10 mM EDTA，pH 8.0；溶液II，0.2 N NaOH / 1% SDS；溶液III，3 M 醋酸钾 / 2 M 醋酸。具体分析及原理:1，25 mM Tris-Cl。控制溶液的pH。2，50 mM葡萄糖。悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部。3，10 mM EDTA，pH 8.0。EDTA是Ca2+和Mg2+等二价金属离子的螯合剂，抑制DNase的活性，和抑制微生物生长。在溶液I中加入高达 10 mM 的EDTA，是要把大肠杆菌细胞中的所有 ...
Ethanol Precipitation of DNAEthanol precipitation is frequently used for concentration of DNA solutions and for removal of protein, salt, and unincorporated nucleotides. The two most common protocols use either 0.3 M sodium acetate (0.1 volume of 3 M) or 2.5 M ammonium acetate (0.5 volume of 7.5 M), ...
A腺苷脱氨酶缺乏症 adenosine deaminase deficiency (ADA)腺病毒 adenovirusAlagille综合征 Alagille syndrome等位基因 allele氨基酸 amino acids动物模型 animal model抗体 antibody凋亡 apoptosis路-巴综合征 ataxia-telangiectasia常染色体显性 autosomal dominant常染色体 autosomeB细菌人工染色体 bacterial a ...
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