DNA基础知识

1、哪种浓度的酒精消毒效果最好？－－－－70%酒精杀菌力最强，它能使蛋白质脱水和变性，在3～5分钟内杀死细菌。因此，它用于消毒和防腐，适用于皮肤和器械、塑料制品等的消毒。高浓度的酒精（95～100%）能引起菌体表层蛋白质凝固，形成保护层，使酒精分子不易透入，因此杀菌能力反而弱。2、试剂的等级有哪些？根据化学试剂的纯度，按杂质含量的多少可分为四级：一级试剂为优质纯试剂，通常用G·R表示；二级试剂为分析纯试剂，通常用A·R表示；三级 ...

这两年在美帝净做克隆实验了，以前读PHD时候还觉得自己分子克隆挺牛X的，来这边之后做了各种各样的构建才知道以前是坐井观天，刚才粗粗统计了一下，在美帝一年零八个月，我构建的质粒超过四百个，其中有很简单从PCR构建到拿WB结果的一共不到一周，也有巨难的花了四个月时间换了几次strategy才弄好激动得我半夜給老板发信的品种；有单片段酶切插入这种不用脑型的，也有九个片段逐一插入正反向还不同的。专家不敢说，但是熟能 ...

为了响应ftp资源讨论版不再处理站友的上传申请而由各专业讨论版的版主负责的举措，现做出以下说明：1.有关核酸基因技术的资源希望通过ftp共享，请在本版发新帖申请，一般有五人以上需要后即发给上传密码。是否加分鼓励，由本版的版主根据情况决定。对于不易界定专业的资源，以及部分比较难得的精品，仍然在ftp资源讨论版发帖申请。2.老赵一号ftp上实验技术专业组暂由lvzanlv协助版主管理。考虑到ftp的空间有限，所上传 ...

对于在本版出现的零回复求助帖，享有10天的置顶求助。站友回复这类帖子，加分从优！注意：被斑竹标为“★★★不规范发帖，请修改！！★★★★ ”的帖子，不在这个置顶处理之内。请站友们在原贴下回复，并在这个帖子下回帖给出链接，以便版主及时、区别加分。多谢合作！截至到2005-05-11【求助】合成c-myc、c-myb、pcna的as-odn求助 【求助】有关非变性聚丙烯凝胶回收ＤＮＡ！ 【求助】诸位战友,帮忙设计个"功能研究"的实验吧!谢谢 【求助】请问有谁 ...

基因工程所用的克隆载体常称之为分子克隆载体（molecular cloning vector），它是一类可供外源DNA插入并携带重组DNA分子进入适当宿主细胞的DNA分子。如果打一个十分浅显的比喻，分子克隆载体犹如航天技术中的运载火箭，外源DNA分子就如火箭上搭载的卫星，宿主细胞则如外部深邃的空间。分子克隆载体的主要功能就是将外源基因携带入宿主细胞，并在宿主细胞中进行DNA扩增和使外源基因得以高效表达。在这一点上又 ...

【CRISPR/Cas9系统的发现历史和应用-@华夏凯奇】-兼谈八卦。水平有限，不准确和班门弄斧之处，还望大家斧正。一、CRISPR系统的发现-从细菌的获得性免疫说起CRISPR系统实际是细菌的一种获得性免疫系统。细菌被phage侵染之后，可以获得phage的DNA片段整合进基因组形成记忆，当再次遭到入侵时，从对phage形成免疫。1） 早在1987年，日本人在大肠杆菌中发现有串联间隔重复序列。但一直不清楚功能。后来的研 ...

实验很早之前做完了，总结一下银染。希望对后人有些帮助。银染技术很容易掌握，做好却需要注意一些小细节。希望我犯得这些小错误你能避开，节省宝贵的时间。本方法适当的修改了文献中的一些方法。文献在文章末已附上。——————————————华丽分割线——————————————————————————————————一、银染前准备1. 银染水质很重要，最好全部双蒸水或去离子水。2. 装胶的器皿清晰干净，最后双蒸水多冲几遍。3. 操作时戴手套，不然gel上会有大手印。4. 跑胶时我采用大梳子 ...

水是实验室内一个常常被忽视但至关重要的试剂。实验室用水有那些种类？能达到什么级别？不同实验对水的要求有那些？这些问题以前对我来说具有一些模糊的概念，前几天参加学校的纯水装置的招标，阅读有关的一些资料，初步了解了相关的知识，现在拿来和大家分享，绝大多数都是本人从外文资料翻译过来的，不当之处还望各位批评。这些资料也包括freecell战友在该版块的精华贴，在此也表示感谢！实验室常见的水的种类：1、蒸馏水（Distil ...

分子生物学研究尤其是病毒研究的过程中，通常要构建cDNA文库。分子克隆（第二版，中文版）介绍的方法一般不能得到全长的cDNA文库；undefined***55i5Fu7Q44wd5J17Rk5zL4xB7xD4w64u04ug8lL5927RIFyC4z66Ol6Dk8ka4uw6L87E74uD6Ol5$89hOFy89TU6Si4ww8d272vFyC6Si4ww7Rk59D8@O6oX6S951Q8@7cDNA文库）。下面这篇文章讲的是一种新的技术，因此将之介绍给大家，但愿对各位有所帮助。首先声明的是，本人在这里不是为某些公司做广告，请勿误会！！！文章来源：www.ebiotrade.com 科研社区 ...

首先要感谢DXY上的neohjh等几位热心的战友，没有他们的经验我不会这么快做出该实验引物设计与说明书中不一致，我是参考“An efficient one-step site-directed and site-saturation mutagenesis protocol”这篇文献设计的。Site-directed Mutagenesis Method1. Primer designThe primer design was according to “QuikChang ...

欢迎您到核酸基因技术讨论版！如果您是新手，在发贴前先明确目的！丁香园的原则是互相帮助，共同进取。如果觉得可以帮助他人，回帖即可。====1.我如何在这个版块得到我需要的信息？===如果你要在本版获取资料，请先检索本版，以节约您的时间和资源，不要盲目发帖，忽视【搜索本版】以及【精华区】的功能，另外请注意旧帖整理和FTP资源为你提供了便利，相信可以节省你的宝贵时间，上面可能有您急需的资料。如果你想了解其他地方你可以了解得更详细。== ...

祝贺gb2003、wh2008成为《实验技术中的惑与获》一书主编！期待他们的作品早日问世！*****************************************************************************主编征集活动回顾：全园征集主编：丁香园联手人民卫生出版社打造《实验技术中的惑与获》一书在实验过程中，你是否曾经有过诸多“困惑”？在消除困惑的过程中，你取得了哪些“收获”？和大家分享你在实验过程中的惑与获，启示后来人！ 实验技术的设计和操作是一个不断探索与 ...

摘要:腺相关病毒(AAV)是一种人细小病毒，目前因为能作为一种基因治疗载体而受到广泛关注。构建重组AAV(rAAV)涉及到用一个目的基因替换病毒基因组的大部分，然后将这个重组基因组包装到一个有感染性的病毒颗粒里。目前大多数生成rAAV的实验方案需要共转染一个载体质粒和一个表达病毒复制和结构基因的包装质粒到腺病毒(Ad)感染的培养细胞中。此方法的局限性包括(1) Ad辅助病毒污染rAAV，(2)rAAV的低产出，(3)生成 ...

原理： 如何获得高的大肠杆菌感受态——可算是【一块砖头】吧 感受超级感受态细胞的制备 感受超级感受态细胞的制备1 超级感受态制备2 E.coli感受态：一步法制备感受态： 一步法制感受态急－关于感受态细胞 关于一步法制感受态的疑问 我所用过的最简单的制备感受态的方法！CaCl2法： 感受态细胞的制备 【鸡毛蒜皮】之6 Ultra-感受态 交流：大肠杆菌感受态细胞的几种制备方法 因为最近数次制作感受态转染生长失败，求助精英们的标准制作方法。多谢！ 分子克隆第三版中感受态 ...

基因组编辑三大工具ZFN、TALEN、CRISPR/Cas9筛选基因敲除细胞系阳性克隆Protocol 上海南方模式生物研究中心 技术顾问 周效华从2011年科学家实现TALEN技术，2013年科学家实现CRISPR/Cas9技术，这些技术的迅速成熟都给基础生物学研究、临床医学研究提供了更为方便和快捷的分子生物学工具。技术进步必将在未来给科学研究及基因治疗研究带来更为广泛的发力！这在2014年以来的频频出现的Cas9 ...

玛丽和乔是一对孪生子，她们拥有相同的遗传学特征而且共同生活在一个幸福的家庭里。随着他们的不断成长，两个人都非常喜爱体育和艺术，同样学习成绩优良而且几乎在每一个方面哪怕是细节方面都显示出了惊人的相似。然而等到成年以后，她们的生活和个性却产生了明显的差异：在玛丽二十岁出头的时候，一件恶梦般的事情发生了，她被诊断患有精神分裂症。类似这样的例子长期以来一直使遗传学家们感到困惑：尽管拥有相同的DNA甚至常常是同样的成 ...

非常感谢lewis 1121！！！另外在论坛中找到部分关于滤纸上质粒溶解提纯保存的方法，贴在这里，供同道参考。（没有进行系统整理，也未按原发贴顺序，详情还请见原文）请问：如何从滤纸上洗涤下质粒DNA？(dxyshining )我是这样做的,加入PH8.0 TE,边加边用枪尖压实滤纸,直至确认能吸出一点液体,然后用这液体去做转化.记住要留出点呵.滤纸也不要马上扔掉. (楚风)4度下TE浸泡过夜,次日即可使用....(roger )１。滤纸有质粒部 ...

第一章 质粒DNA的分离、纯化和鉴定 第一节 概 述　　把一个有用的目的DNA片段通过重组DNA技术,送进受体细胞中去进行繁殖和表达的工具叫载体(Vector)。细菌质粒是重组DNA技术中常用的载体。 　　质粒(Plasmid)是一种染色体外的稳定遗传因子,大小从1-200kb不等,为双链、闭环的DNA分子,并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中，它具有自主复制和转录能力,能在子代细胞中保持恒定的拷贝数,并表达所 ...

目的:构建目的基因的真核表达载体 历时整整一学期,期间经历了很多挫折,遇到很多问题,也从中学到很多经验.借寒假的时间写了写我一学期构建的经历,把我的一点经验拿出来和大家分享讨论.分步来说:一.PCR扩增得到目的片段1.引物的设计与合成:这里有很多血与泪的教训。我前后一共送过九个载体测序，其中居然有五个是引物出错。最后一次挑的两个克隆都是上游引物出错（此上游引物40个碱基） ，后来和这家引物公司交涉，他们拿走了我的板子，一次 ...

《分子克隆参考》编写已经进入收稿阶段，请各位战友抓紧时间编写，计划在年底前出书，收稿截止至12月15日。已经PM给报名参加撰写的战友，请将文稿用word发送至我的邮件，或以附件形式贴在跟帖中。同时希望你们在以下贴中回帖，以便加分（初步定为5分）和核实内容，违期将示为自动放权，谢谢您的合作！请各位斑竹根据目前收稿情况选择几章较熟悉的，然后我再具体安排章节进行校正审稿，特殊章节（不属于实验技术范畴）再讨论，也请战友投稿 ...