DNA基础知识

一、从在含20 mg/l Kanamycin和15 mg/l Gentamycin 6 ml的液体LB培养基中接种Agrobacterium 细胞，然后在28℃、200-220 rpm培养24 h。准备进行质粒提取。 质粒提取前，检查裂解液（Lysis Solution）是否有沉淀，如果有，要在65℃下溶解。对试剂盒中的稀释溶液（Elution Solution）（用Qiagen公司的EB（5 m ...

1实验原理 DNA重组分子在体外构建完成后，必须导入特定的受体细胞，使之无性繁殖并高效表达外源基因或直接改变其遗传性状，这个导入过程及操作统称为重组DNA分子的转化。对于不同的受体细胞，往往采取不同的转化战略。 1.1 DNA重组分子的常用转化方法 1.1.1 Ca 2 诱导转化 1970年Mandel和Higa发现用CaCl2处理过的大肠杆菌能够吸收l噬菌体DNA，此后不久，Cohen等 ...

磷酸钙-DNA 共沉淀法 核酸以磷酸钙-DNA 共沉淀物的形式出现时，可使DNA 附在细胞表面，利于细胞吞入摄取，或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进入细胞内，进入细胞的DNA 仅有1%～5%可以进入细胞核中，其中仅有不到1%的DNA 可以与细胞DNA 整合，在细胞中进行稳定表达，基因转导的频率大约为10-4，这项技术能用于任何DNA 导入哺乳类动物进行暂时性表达或长期转化的研究。此方法对于贴壁细胞 ...

基因打靶技术是一种定向改变生物活体遗传信息的实验手段，它的产生和发展建立在胚胎干(ES) 细胞技术和同源重组技术成就的基础之上，并促进了相关技术的进一步发展。基因打靶技术将广泛应用于基因功能研究、人类疾病动物模型的研制以及经济动物遗传物质的改良等方面。 1 ．原理 首先获得ES 细胞系，利用同源重组技术获得带有研究者预先设计突变的中靶ES 细胞。通过显微注射或者胚胎融合的方法将经过遗传修饰的ES ...

I usually use Linear polyacrylamide as a carrier for DNA precipitation by EtOH. I have read about using glycogen as a carrier I would like to know if anyone knows a method avoiding not to use acrylami ...

DNA重组技术包括载体及外源DNA片段的酶切消化、目的片段的获得及纯化、目的片段与克隆载体的体外连接、重组子的筛选和鉴定等内容。DNA片段的克隆技术是分子操作的核心部分。 实验目的：学习DNA的酶切、纯化及外源片段与载体的连接，将BAC克隆所携带的外源DNA酶切片段亚克隆到pUC18载体上。 实验材料：外源片段来自一个含有水稻DNA片段的BAC克隆的酶切片段；克隆载体为PUC18。 ...

I did stupid thing after cloning a sequence into a plasmid just find out not in frame with the following sequence. just need insert one single nucleoacid will be ok. Any method to insert only one nucl ...

一、大肠杆菌质粒DNA的提取 质粒DNA的提取是从事基因工程工作中的一项基本实验技术，但提取方法有很多种，以下介绍一种最常用的方法： 碱裂解法：此方法适用于小量质粒DNA的提取，提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析。方法如下： 1、接1%含质粒的大肠杆菌细胞于2ml LB培养基。 2、37℃振荡培养过夜。 3、取1.5ml菌体于Ep管，以4000rpm离心3min，弃上清液。 ...

Donis-Keller Lab Manual Department of Genetics in Washington University School of Medicine http://hg.wustl.edu/hdk_lab_manual/plasmid/plsmid08.html Purpose: To utilize competent E. coli bacteria to r ...

真核细胞的mRNA在加工过程中有一个比喻为“穿鞋戴帽”的过程，因此mRNA的3'末端都带有一段Poly A，这是利用逆转录酶制备cDNA文库的基础。但是由于cDNA的5'端的序列各不相同，如何获得全长的cDNA，如何扩增由微量的mRNA逆转录得到的cDNA文库、如何利用已知片断序列得到全长的cDNA（即RACE），曾经是一个令人困扰的问题。 常见的做法是在合成cDNA的双链 ...

Hancock Laboratory Methods. Department of Microbiology and Immunology University of British Columbia British Columbia Canada http://www.cmdr.ubc.ca/bobh/showmethod.php?methodid=67 METHOD: 1.Run gel a ...

I am working with very small amount human tissue. Is there anyone who had the experience of using glycogen with 100% ethanol in pheno/chloroform DNA extraction protocol ? Does it realy work to increas ...

根据载体的遗传特征筛选重组子，如α-互补、抗生素基因等。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。在这个编码区中插入了一个多克隆位点（MCS），它并不破坏读框，但可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影响功能，这种载体适用于可编码β-半乳糖苷酶C端部分序列的 ...

Hi all! We are trying to extract genomic DNA from the leaves of an Ericacea (we suppose it is rich in tanins and phenolics) and we can't do it! We have used two different kits which work OK for other ...

1.Vectorpedia： 输入质粒骨架，直接查询，非常方便; http://www.addgene.org/pgvec1?f=v&cmd=listvecinfo 2. google 检索式子：质粒名 ＋ map 质粒名 ＋sequence ＋filetype:txt or filetype:pdf 或者：进入google，点击"图片搜索"，直接查找图谱。 3.go ...

Does anyone have expereince of extracting DNA from urine? I am having problems with this. I have previously extracted the DNA but then it degraded very quickly and since then I havent even been able t ...

近年来抗性基因研究的突破性进展、抗性基因的克隆和序列分析所揭示的其编码蛋白的组成、拓扑学和亚细胞定位等特征为揭开抗性基因的作用特点提供了线索。一般来讲基因克隆的策略可分为两种:正向遗传学途径和反向遗传学途径。前者以欲克隆的基因所表现的功能为基础通过鉴定其产物或某种表型的突变进行如功能克隆( Functional Cloning) 和表型克隆( Phenotype Cloning) ;后者则着眼于基 ...

基因(gene)是遗传物质的最基本单位，也是所有生命活动的基础。不论要揭示某个基因的功能，还是要改变某个基因的功能，都必须首先将所要研究的基因克隆出来。特定基因的克隆是整个基因工程或分子生物学的起点。本文就基因克隆的几种常用方法介绍如下。 1　根据已知序列克隆基因 对已知序列的基因克隆是基因克隆方法中最为简便的一种。获取基因序列多从文献中查取，即将别人报道的基因序列直接作为自己克隆的依据。现在 ...

I tr ...

I have tried to purify my PCR products by using 3 different approaches: 1) QIAQuick PCR purification kit: but when I run the gel to see its efficacy there was simply nothing!! it cleaned everything in ...