DNA基础知识

焦锋，楼程富 （浙江大学蚕学系，杭州310029） 摘要：综述了RAPD技术的一些理论性问题，包括RAPD与其它分子标记技术相比的优点，影响结果重复性的因素，显性标记产生的原因，条带取舍的标准等。提出在实验中解决这些问题的一些方法：严格控制反应条件，采用单倍体和单剂量标记，系统学研究中要结合其它方法进行分析，定位基因时要选用合适的群体等。 1.RAPD技术原理及特点 1．1原理RAPD（Rando ...

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Inoculate a 5ml overnight of E.coli in LB+20 mM MgSO4. Next morninginoculate 250 ml LB+20 mM Mg++ in a 2L flask with about 2ml overnight culture.Grow at room temp (23℃)with good aeration (250rpm)to an ...

真核生物中，从个体的生长、发育、衰老、死亡，到组织的得化、调亡以及细胞对各种生物、理化因子的应答，本质上都涉及基因的选择性表达。高等生物大约有30000个不同的基因，但在生物体内任意8细胞中只有10%的基因的以表达，而这些基因的表达按特定的时间和空间顺序有序地进行着，这种表达的方式即为基因的差异表达。其包括新出现的基因的表达与表达量有差异的基因的表达。生物体表现出的各种特性，主要是由于基因的差异表 ...

SOLUTIONS: Green and blue solutions from Clone Checker kit (cat. no. 11666-013). PROCEDURE: Place 3-6µl of an overnight culture in an Eppendorf tube (or spread part of a bacterial colony on the ...

试验原理： 碱裂解法是较常用的提取的方法。其优点是收获率高，适于多数的菌株，所得产物经纯化后可满足多数的DNA重组操作。十二烷基磺进行质粒的小量制备。十二烷基磺酸钠（SDS）是一种阴离子表面活性剂，它既能使细菌细胞裂解，又能使一些蛋白质变性。用SDS处理细菌后，会导致细菌细胞破裂，释放出质粒DNA和染色体DNA，两种DNA在强碱环境都会变性。由于质粒和主染色体的拓扑结构不同，变性时前者虽然两条链分 ...

1．感受态的制备 （1）接种单菌落于2ml LB培养液中，37℃过夜。 （2）取0.25ml过夜菌入25ml LB培养液中，37℃振摇4～6h至A590=0.4～0.6。 （3）倒入50ml管内，水浴10min，以2500～3000rpm离心5min，弃上清。 （4）缓慢加入75mmol/L预冷CaCl25ml悬浮菌体，冰浴20min，同上离心弃上清。 （5）缓慢加入75mmol/L预冷CaCl2 ...

酶切扩增多态性序列（C1eaved Amplified Polymorphic Sequences，CAPS）是一类以PCR为基础的共显性的分子标记，它的基本原理是先用已知位点的DNA 序列去设计一套特异性的PCR引物（19~27 bp）。然后应用这些去扩增该位点上的某一DNA 片段；接着用一种专一性的限制性内切酶切割所得的扩增带并进行RFLP分析。 1993年Konieczny和Ausubel首 ...

hieverybody. i want extract DNA from cryopreserved clotted human blood.the smaple has been storaged 5 years in -20 degree. who is an expert on this topic . i need your help.i need the details. my emai ...

Hi! Would anyone out there be able to tell as to why alchohols like isopropanol or ethanol are used to precipitate nucleic acidsand alsowhy is the precipitation done at low temperatures ramesh -rames ...

1. Pick pl ...

实验步骤： 1、Inoculate from an overnight grown in LB.从培养过夜的LB平板上挑取单菌落 。 2、Grow in 250 ml "SOB" at 18℃ until OD600 = 0.6.(0.3)接种于250ml SOB，18度培养至OD＝0.6。 3、On ice for 10 minutes.菌液置冰上10分钟。 4、Spin ...

1 导论 聚合酶链式反应（PCR）以其优越性极大地影响到了分子生物学的几乎所有领域，并以其基本程序和DGGE（denaturing gradient gel electrophoresis），开发出多种检测核苷酸变异的方法。RAPD（Random Amplifed Polymorphic DNA）就是其中的一种，它是1990年美国杜邦公司科学家J.G.K.Williams和加利福尼亚生物研究所J ...

Cepko/Tabin Lab Harvard University http://axon.med.harvard.edu/~cepko/protocol/mike/S6.html Superfrost plus slides and standard slides can be silinized but I have found that superfrost slides work be ...

对于神经科学中分子生物学部分，特别是相关疾病方面的研究手段并不是很多。特别是对于多个因素的作用，现在的研究手段还比较稚嫩，对于DNA 的初步大规模分型无疑是一种好的方法。AFFY用基因来检测SNP达到了高通量的目的，非常适合于第一步的筛查。 复杂DNA 的大规模基因分型 Nature Biotechnology Volume 21 Number 10 October 2003 以复杂的人类表型的 ...

原理 基因组步行技术是一种新发展的利用已知序列(cDNA或基因组DNA)从基因组中获得基因的上游(如启动子)或下游序列的方法。其原理如下：首先利用不同的具有平末端的 DNA 限制性内切酶消化基因组 DNA，然后将预先设计好的 DNA 接头连接在 DNA 的两端这样的一组两端带有接头的 DNA 片段就称为所谓的无载体的 DNA 文库；根据接头和目的基因的序列设计两组引物，以上述的DNA为模板，先以外 ...

实验目的 学习和掌握限制性内切酶的特性 掌握对重组质粒进行限制性内切酶酶切的原理和方法 并理解限制性内切酶是DNA重组技术的关键工具。 相关基础知识 限制性核酸内切酶：是一类能识别双链DNA分子特异性核酸序列的DNA水解酶。它是基因工程中用于体外剪切基因片段的重要工具酶。 上世纪七十年代，当人们在对噬菌体的宿主特异性的限制-修饰现象进行研究时，首次发现了限制性内切酶。首批被发现的限制性内切酶包 ...

酶 最适温度 37℃%活性 Apa I 25℃ 10undefined ApeK I 75℃ n ...

标记育种是利用与目标性状基因紧密连锁的遗传标记，对目标性状进行跟踪选择的一项育种技术。与育种有关的遗传标记主要有四种类型: 形态标记（morphological marker）、细胞标记（cytological markers）、生化标记（Biochemical marker）和分子标记（molecular marker）。早在1923年，Sax等就提出利用微效基因与主基因的紧密连锁，对微效基因进 ...

i want to know how can i extract DNA from water microbe? -tanklm- -------------------------------------------------------------------------------- Standard DNA extraction proceedures should work fine ...