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膜表面免疫球蛋白(SmIg)检测法

实验原理 膜表面免疫球蛋白(SmIg),是B细胞特有的表面标志,它既是B细胞识别抗原的受体,与相应抗原特异性结合;又是表面抗原,能与相应的抗Ig的抗体结合,故可用荧光标记的抗Ig抗体作免疫荧光镜检,以查出B淋巴细胞。由于B淋巴细胞在分化过程中最先出现SmIg,所以该法可以检出全部B淋巴细胞。B淋巴细胞表面最先出现IgM,以后相继出现IgG、IgD、IgA等表面免疫球蛋白。而金黄色葡萄球菌A蛋白( ...

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噬菌体抗体库的菌落筛选法

实验步骤 1. 将每轮筛选洗脱的噬菌体用来感染新鲜的XLIBlu菌,以10μl、20μl等不同量菌液涂于LB氨苄青霉素平皿,37℃ 4~5h。2. 事先将硝酸纤维素膜在5mmol/L的IPTG溶液中浸泡10min,在超净台中晾干后,铺在上述涂有细菌的平皿中,注意膜面与平皿中培养基界面应无气泡。3. 置30℃过夜培养,一般约15~16h。4. 作好标记,轻轻地将硝酸纤维素膜揭开,用氯仿 ...

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共生菌对黑豆蚜体内总蛋白和游离氨基酸代谢的影响

实验材料 黑豆蚜用盆栽蚕豆(Vicia faba L.)苗饲养,温度23-25℃,光周期16:8。 实验步骤 1. 脱共生蚜虫的培养将3周大的蚕豆苗根部冲洗干净后浸在200ug/ml的利福平溶液中,24小时后,接上成蚜使之产子,10小时后移去成蚜有,再过48小时后移入正常植株饲养。经过这种处理所获得的蚜虫即是脱共生蚜虫。未经抗生素处理的正常蚜虫称为共生蚜虫。2. 脱共生蚜虫发育和生殖观 ...

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RACE System for Rapid Amplification of cDNA Ends

实验原理 The 5' RACE System is a set of prequalified reagents intended for synthesis of first strand cDNA purification of first strand products homopolymeric tailing and preparation of target cDNA for su ...

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胶体金免疫层析法对抗幽门螺杆菌相关蛋白A抗体的检测

实验原理 胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下,可聚合成一定大小的金颗粒,并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态,形成带负电的疏水胶溶液,由于静电作用而成为稳定的胶体状态,故称胶体金。胶体金在弱碱环境下带负电荷,可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合,由于这种结合是静电结合,所以不影响蛋白质的生物特性。胶体金除了与蛋白质结合以外,还可以与许多其它生物大 ...

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Platinum® Taq Antibody

实验步骤 1. Measure out the amount of Taq DNA polymerase needed. When using a reaction cocktail determine the total number of units in the mix.2. Add an amount of “equivalent units” of Plat ...

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Dynabeads® Co-Immunoprecipitation Kit

实验原理 Antibodies (Ab) of your choice are covalently coupled to Dynabeads. Once antibodies have been coupled to the Dynabeads the bead-bound antibody may then be used for co-immunoprecipitation experim ...

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BACs, PACs, P1s and Plasmid Isolation Protocol (For low copy number)

实验试剂 1. Sterile Deionized Water (or TE Buffer)2. 70% Ethanol 3. 96%-100% Isopropanol 实验设备 1. Microcentrifuge capable of at least 18000 x g2. Sterile 1.5 ml Centrifuge Tubes 3. 10-15 ml Culture T ...

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General Stem Cell Protocols

实验试剂 1. Complete Culture Media Formulation for ES (Embryonic Stem) For 500 ml of ES complete media: • 100 ml fetal bovine serum (F2442) • 5 ml 100x non-essential amino acids NEAA (M7145) &b ...

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Agarose Gel Electrophoresis for the Separation of DNA Fragments

实验材料 NameCompanyCatalog NumberCommentsAgarose IAmresco0710Boric acidSigmaB7901Bromophenol blueSigmaB8026EDTASigmaE9884Ethidium bromideSigmaE7637Carcinogenic—needs to be disposed of as hazardous ...

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大肠杆菌重组蛋白复性

实验步骤 1. 制备包涵体1) 取上述含目的蛋白菌液,4℃,6500 rpm 离心 15 min,弃上清;2) 将沉淀完全重悬于 0.1 倍菌液体积的 1 × IB 洗涤液,反复混匀;3) 在细胞裂解的过程中将重悬的溶液置于冰上以防止蛋白受热裂解,可选择超声波裂解或 French Press 法裂解细胞。其中超声波裂解细胞是更广泛应 ...

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共生菌在黑豆蚜生长和繁殖中的作用

实验试剂 金霉素(Chlortetracycline HCl),BIB分装;氯霉素(Chloraomycetin),Amresco分装;盐酸土霉素(Oxytetracycline HCl),BIB分装;青霉素G钾盐(Penicillin-GK Salt),BIB分装;硫酸链霉素(Streptomycin sulfate ),BIB分装。以上抗生素均为化学纯研究专用抗生素。 实验材料 ...

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单头昆虫基因组DNA的提取

实验试剂 1. 蛋白酶K2. 三羟甲基氨基甲烷(Tris)3. Taq DNA聚合酶及dNTP4. 琼脂糖及溴化乙锭(EB)5. 乙二胺四乙酸钠(Na2EDTA)6. 电泳缓冲液TBE:浓贮存液5×TBE:54.0 g Tris碱,57.1 g硼酸,20 ml 0.5 M EDTA,pH=8.0,加蒸馏水定容至1 L,工作液为稀释的0.5×TBE7. 裂解液成分:50 mM KCl,10 mM ...

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心律失常模型的复制方法

实验步骤 1.心房扑动和颤动性心律失常选用狗、猫等动物,麻醉后开胸,暴露心脏,在人工呼吸下进行实验。可用高频率电直接刺激心房壁,使每次刺激落心房肌复极时R或S波间隔;乌头硷溶液涂抹心房外面局部;挤压动物上下腔静脉间的部位,同时给予电刺激;窦房结动脉内注入乙酰胆硷或甲状腺素制剂。或采用动物整体闭胸条件下,阻塞呼吸道或吸入低氧气体。也可采用离体心房组织块作实验,将含有窦房结的哺乳动物的离体心房组织块 ...

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流式细胞仪对疟疾入侵的分型检测

实验步骤 标记目标红细胞:根据选择的DNA染料选择对目标红细胞的荧光标记,这本身就取决于流式细胞仪在入侵检测分析结束时获得的数据,CFDA SE的荧光发射峰约为517nm,接近520nm处SYBR Green I的荧光。CFDASE可以与Hoechst 33342组合使用,DDAO SE 的荧光发射峰接近657nm。因此,它可以与Hoechst 33342或SYBR Green I组合使用。1. ...

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比较详细的PCR 技术

实验原理 1.TaqDNA聚合酶在早期进行的PCR反应中,使用的是大肠杆菌DNA聚合酶1的大片段,即Klenow片段。也曾有人用噬菌体T4 DNA聚合酶。这两种酶的共同弱点是对热不稳定性,DNA合成反应只能在37°C进行。PCR时每一循环的解链温度都在90°C以上进行,故在每两个循环之间要加入新的DNA聚合酶,使得整过程整个实验过程很繁琐和昂贵。同时在37°C,引物与DNA模板之间会发生分子非 ...

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动物染色体标本的制备与观察

实验原理 凡细胞处于活跃增殖状态,或者经过各种处理后,细胞就可进入分裂的任何动物组织,均可用于染色体分析。在正常动物体内,骨髓是处于不断分裂的组织之一。给动物注射一定剂量的秋水仙碱即可使许多处于分裂的细胞停滞于中期,然后采用常规空气干燥法制备染色体,即可得到大量可分析的染色体标本。本方法简便、可靠,不需要经体外培养和无菌操作,易于推广。所以,骨髓细胞是用于动物细胞遗传学研究很好的材料。 ...

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E.Z.N.A.® Mag-Bind® Viral DNA/RNA Spin Protocol

实验原理 If using the E.Z.N.A.™ Mag-Bind® Viral DNA/RNA Kit for the first time please read this booklet to become familiar with the procedure and its various modification. Samples are lysed in a speciall ...

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植物培养与转化

实验试剂 LB培养基,5%蔗糖溶液,0.02% Silwet L-77,含0.8%琼脂的1/2 MS (Hygromycin)固体培养基,30uMDex,50uM雌激素 实验设备 人工气候室,4℃冰箱,22℃光照培养箱 实验材料 农杆菌,植物 实验步骤 1. 植物培养植物生长环境为20-23℃,14小时光照、10小时黑暗的人工气候室。取5-6周大的植物进行各种实验。 ...

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紫外吸收法对过氧化氢酶活性的测定

实验原理 H2O2在240nm波长下有强烈吸收,过氧化氢酶能分解过氧化氢,使反应溶液吸光度(A240)随反应时间而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。 实验试剂 0.2mol/L pH7.8磷酸缓冲液(内含1%聚乙烯吡咯烷酮);0.1mol/L H2O2(用0.1mol/L高锰酸钾标定)。 实验设备 紫外分光光度计;离心机;研钵;250ml容量瓶1个;0. ...

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