病毒

痛、痒觉均为负面躯体感觉，有利于机体规避利器、高温、过敏原等刺激引起的进一步伤害。不同的是，痛觉刺激会引起即时的疼痛感以及反射性躲避行为，而痒觉刺激会引起诸如月之盈虚的消长感觉以及无时间精确性的抓挠行为。神经生物学相关研究表明，外周神经系统中痛、痒觉感受器的激活可将痛、痒觉信息传递至脊髓背角。其中急性痛刺激的反应主要依赖于脊髓谷氨酸能神经元的快速兴奋，而痒觉信号传递主要依赖于神经肽释放，如：痒觉感受器表达的B型 ...

“脑卒中”（cerebral stroke）又称“中风”、“脑血管意外”（cerebralvascular accident，CVA）。是一种急性脑血管疾病，是由于脑部血管突然破裂或因血管阻塞导致血液不能流入大脑而引起脑组织损伤的一组疾病。脑卒中具有发病率高、死亡率高和致残率高的特点，其症状表现为视觉障碍、语言障碍、运动障碍、感觉运动障碍、记忆障碍、意识障碍等。脑卒中包括缺血性和出血性卒中。缺血性卒中的发病率高于出血性卒中，占脑 ...

CRlSPR/Cas9是细菌和古生物菌用来抵抗外来质粒或噬菌体等遗传物质入侵的一种获得性免疫系统。利用CRlSPR/Cas9技术建立哺乳动物全基因组突变库或者与某类功能相关的基因突变体库，通过功能性筛选和富集以及随后的PCR扩增和深度测序分析，发掘与筛选表型相关的基因，称为CRlSPR/Cas9 gRNA文库筛选。gRNA文库是药物筛选或靶向筛选特定通路的理想工具，gRNA文库的建立将在功能基因筛选、疾病机制研 ...

1.常用载体分类：2,常用载体元件介绍：(1) 启动子：启动子是位于结构基因5'端上游的DNA序列，能活化RNA聚合酶，使之与模板DNA准确的结合并具有转录起始的特异性。启动子主要分为广谱启动子和特异性启动子。广谱启动子为在各种组织、细胞上广泛表达的启动子；特异性启动子为在特异性组织或者细胞类型上表达的启动子。常用广谱启动子有CAG，CMV，EF1a，PGK等，还包含启动RNA的III型启动子U6和H1启动子；常用特异性 ...

1.病毒载体可以进行哪些方面的基因操作？基因功能研究主要涉及功能获得和功能缺失，功能获得主要包括外源的过表达，内源性激活，功能缺失主要包括基因干扰和敲除等。借助病毒载体可以进行基因过表达、干扰、敲除和内源性激活等操作，其中基因包括编码基因和非编码基因。2 .不同基因调控方式的原理外源过表达：基因功能研究中通常需要上调目的基因的表达来观察表型的变化。过表达是将目的基因在宿主细胞大量表达的过程，其基本原理是将目的基因 ...

1. 病毒载体可以进行哪些方面的基因操作？基因功能研究主要涉及功能获得和功能缺失，功能获得主要包括外源的过表达，内源性激活，功能缺失主要包括基因干扰和敲除等。借助病毒载体可以进行基因过表达、干扰、敲除和内源性激活等操作，其中基因包括编码基因和非编码基因。2 不同基因调控方式的原理外源过表达：基因功能研究中通常需要上调目的基因的表达来观察表型的变化。过表达是将目的基因在宿主细胞大量表达的过程，其基本原理是将目的基因构建 ...

传染性皮下及造血组织坏死病毒（Infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus，IHHNV）属细小病毒科，病毒粒子直径约20纳米，单链DNA，该病毒感染外胚层组织，如鳃、表皮、前后肠上皮细胞、神经索和神经节，以及中胚层器官，如造血组织、触角腺、性腺、淋巴器官、结缔组织和横纹肌，在宿主细胞核内形成包涵体。对虾传染性皮下及造血组织坏死病，又名慢性矮小残缺综合征（runt-defor ...

实验简介自然水体中病毒、细菌的含量通常可作为水质的评判指标。近年来，借助流式细胞仪对自然水样进行病毒、细菌的鉴别与计数已经成为很多科研工作者研究的热点。本实验用核酸染料 SYBR green I 对自然水样进行染色，借助 CytoFLEX 流式细胞仪检测，区分水体中所含的病毒与细菌，与传统的显微镜计数及平板菌落计数法等相比，具有速度快，操作简便，结果准确的优点。材料与方法▶ 试剂▶ 样品制备Sample Type自然水体SpeciesAge of spe ...

jinpeng120 请教各位朋友，如何将慢病毒转染至海马神经元细胞，需要的海马神经元的细胞接种密度多少是为最佳呢？慢病毒的滴度为多少是转染率最高呢？如何控制整个的转染过程呢，而又保存最佳的细胞存活数量呢？请各位朋友，抛砖引玉，指点疑惑，借鉴经验，不胜感激，谢谢！小竹子青青 你好，请问你的问题现在解决了吗？我最近也要做慢病毒感染原代神经元的实验，所以急需这方面的信息，非常感谢啊！另外你之前咨询的问题都解决了吗？（比如：接种的 ...

66xiaogai 求教：我要构建一个逆转录病毒载体，不知道在插入外源基因（shRNA）时需不需要考虑像一般的载体表达时考虑基因错配的问题，如果加入的外源基因上带有启动子，那逆转录病毒载体上的启动子要切掉么？谢谢。破茧的蝶 楼主问题解决了吗？现在遇到同样的困惑~~shylook 最好用shRNA的vector吧比如PLKO等等不是的话 你要看载体自身带不带ATG 带的话 需要考虑不带的话 自己加上去即可本文由丁香园论坛提供，想了解更多有 ...

hellosdd 我最近正在做单负链RNA病毒（狂犬病毒）的rna提取，逆转录及目的基因的扩增，可是结果是 目的基因没有出现，引物是在比对后在保守处设计的，但是产物除了引物条带和一非特异条带（30个循环，不是很亮）外，再无其它条带，尝试提高退火温度 但是结果仍不好，合成cDNA的时候，使用的是以ATG（应该是上游引物吧）开头的引物。我不知道哪里出错了，希望能得到大家的建议。目的条带大概在1500bp附近，P出来的条带在500~7 ...

gaodong1234567 各位前辈：我刚进入实验室不久，最近有项研究需要国外某著名实验室的腺病毒做研究，不知能都索要，还是索要质粒，自己构建，哪位有经验的同道请赐教，谢谢！woxingwosu 主要还是质粒吧，其他的东西别人即时要给你，也不好寄过来呀，只有质粒最方便，滴在纸上就过来了。西厢蔷薇 好像还要个什么承诺书，需要所在学院领导签字woxingwosu 那就签呗。或者换一家看看本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意 ...

xieguozhu 在下欲构建两个含GFP的慢病毒过表达载体，但是有一个关键问题就是我构建的这两个目的基因是要导入同一个细胞的，我要表达的目的基因是miR-141, miR-200c. 要感染的细胞是MDA-MB-231， 这两种表达载体都是GFP标记的，我不知道在最后怎样判断两个基因都导入细胞了，后来我在想可不可以在同一个病毒上同时插入两个目的基因，比如miR-200c/miR-141(因为这两个基因在同一条染色体上，且靠的很近 ...

minnie_pumc 各位战友，大家好，我想请教个问题，在构建重组腺病毒载体时是不是必须先构进T载体中呢？谢谢！westernblotx 不是一定非要克隆到T载体，你也可以选择直接进行PCR产物酶切（注意引物设计两端的酶切位点选择和保护碱基），然后连接到你需要的目的骨架上。个人认为，我们用T载体主要是因为它作为中间克隆载体，相对比较容易操作，尽管想起来会觉得多了中间步骤，但是每一步都容易验证（比如克隆的片段需要测序是否 ...

xinlongrui 哪位大侠知道腺相关病毒如何纯化呀？先透析然后冻干，再用PBS溶解行吗？谢谢了zhujoker 买个试剂盒不就搞定了吗？或者参考这篇文献：HSP70腺相关病毒的制备、表达及纯化xinlongrui 谢谢zhujoker.本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

dongxiao1214 各位大虾们，我现在急需慢病毒载体和他的包装载体，谁有的可以卖给我一套吗？我研二了，老板让做这些东西，还只能自己想办法，谁能帮帮我，不胜感激！！dongxiao1214 自己先顶一下，愿意帮忙的可以加我qq 315915365dongxiao1214 对了，过表达的和RNAi的都可以，如果都有更好，不过我现在希望做的是过表达。kinguangjun 你好！我这里有clontech的慢病毒包装系统质粒，滴度可以 ...

dongxiao1214 我是研二的学生，打算构建过表达载体和RNAi载体，想用慢病毒载体，但是慢病毒载体有好多，怎么选择一种最合适的呢？而且现在也没有慢病毒载体，公司都不卖的，我想问问，有慢病毒载体系统的可否卖给我一套，不胜感激。老板让我3月份就开始做实验，但是现在还没有材料，很着急，希望各位行行好，让我怎么感谢都可以。沈玉琳 1，如果什么材料都没有的话老板还让做，说明这个老板很水，鄙视2，建议找公司做，这样很快，而且现在 ...

kakaxuan1984 寻找掌握microRNA慢病毒包装技术的科研人员合作，由于本人课题需要，需要构建microRNA慢病毒载体，因为是大鼠系统性用药，所以用量较大，您只需提供病毒包装即可，其他由我们来做，研究成果分享形式，有意者可邮件交流kakaxuan1984@126.comdujinghua 请问楼主慢病毒让公司包装的话，大鼠系统用药需要很大的病毒量，所有都让公司包装的吗？shylook dujinghua wro ...

genechip 我跟一个英国科学家要了腺病毒，对方答应给了，但不知道是否可以通过Fedex邮寄，海关那边会不会查，要不要申报？另外由于是我这边付费，邮寄过来大概要多少钱？genechip 有人知道吗？思路迪腺病毒 如果通过Fedex寄，那就得碰运气，海关是抽查的，抽到了，你就要官方证明等文件。另外，对方寄的时候也要官方证明，但不知对方国家是否同意邮寄这类病毒性玩意？好在腺病毒比细胞运输好，不容易死，拿来后可以立即扩增，然后重 ...

boboshining 慢病毒转染人间充质干细胞的效率是多少啊？谢谢kinguangjun 我做过用慢病毒感染人脐带血间充质干细胞和人脂肪间充质干细胞,其感染效率大概在50%～80%之间,人脐带血间充质干细胞比人脂肪间充质干细胞的感染效率要高一些.易冰 我现在也很想知道，慢病毒是不是转染有种属性质，我用构建好的慢病毒转染大鼠骨髓间充质干细胞，基本上没有多少转染成功的。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资 ...