免疫细胞与组织染色实验

免疫组化问题及解决办法1、染色过强原因 解决办法抗体的浓度过高或抗体孵育时间过长降低抗体滴度（一般指浓缩性抗体），抗体孵育时间：室温1小时或4℃过夜孵育温度过高，孵育温度超过37℃一般室温20-28℃DAB显色时间过长或DAB浓度过高显色时间不能超过5-10分钟，以显微镜下观察为准2、非特异性背景染色原因 解决办法操作过程中冲洗不充分每步冲洗3×5组织中含过氧化物酶未阻断可再配置新鲜3%H2O2封闭，孵育时间延长组织中含 ...

二步法：EnVision SystemEnVision显色系统是将二抗和酶通过一个多聚葡聚糖骨架联接成一个多聚体（即EnVision）直接放大信号40-50倍，把传统的二抗、三抗分别孵育合为一次孵育。特点：敏感、省时、方便、背景低（避免了内源性生物素干扰）。EnVision工作程序：1） 脱蜡、水化组织切片。2） 预处理组织切片（据一抗具体说明而定）3） 蒸馏水漂洗，置于TBS中。4） 阻断内源性过氧化物酶（仅用于EnVisionTM/HRP） ...

一、非特异性染色的主要因素组织的非特异性染色的机理很复杂，其产生的原因主要可分为以下几点：（1）一部分荧光素未与蛋白质结合，形成了聚合物和衍化物，而不能被透析除去。（2）抗体以外的血清蛋白与荧光素结合形成荧光素脲蛋白，可与组织成分结合。（3）除去检查的抗原以外，组织中还可能存在类属抗原（如Forssman氏抗原），可与组织中特异性抗原以外之之相应抗体结合。（4）从组织中难于提纯抗原性物质，所以制备的免疫血清中往往混杂一 ...

一、核酸分子杂交技术1961年Hall开拓了液相核酸杂交技术的研究，其基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基顺序，通过碱基对之间非共价键的形成，出现稳定的双链区，形成杂交的双链。自此以后，由于分子生物学技术的迅猛发展，特别是70年代末到80年代初，分子克隆、质粒和噬菌体DNA的构建成功，核酸自动合成仪的诞生，大大丰富了核酸探针的来源，新的核酸分子杂交类型和方法不断涌现。按其作用方式可大致分为固相杂交和液相杂 ...

ELISA讨论区：【请教】关于测小分子抗原时c18柱纯化 【请教】一个辅助噬菌体Ｍ１３－ＫＯ７的问题【求助】如何降低Elisa检测中的交叉反应【求助】武汉意德生物公司elisa试剂盒如何【求助】ELISA试剂盒询问【请教】在直条图中如何作出P/N值的曲线图【求助】竞争ELISA抗原保护剂的选择其他试验讨论区：【请教】关于autologous MLR中，一个问题【请教】关节局部温度 【请教】关于噬菌体肽库试剂盒 【求助】哪里能做低温包埋 【请 ...

良好的免疫组化染色切片是正确判断染色结果的基础和前提。由于免疫组化染色过程中存在很多步骤或环节，每一个步骤或环节都可能影响到染色的最终结果，因此，要做好一张高质量的免疫组化切片并不是一件非常容易的事。需要病理技术员和病理医生密切配合、相互协调、共同努力才能保证做出合格的免疫组化切片。虽然免疫组化染色可以存在各种各样的问题，但从染色的结果看，一般可分为两类：无色片（即无阳性信号）和“杂音”染色片（有阳性信号）。一、 无色 ...

今天做了小鼠股骨的免疫荧光，好几张片子上出现这个东西，不知道是啥，请大侠指点下。还有下面这些片子为什么都是这样的，好像每个通道都有颜色，哪位大侠做过类似的么？

一、免疫荧光组织化学技术的发展史概述免疫荧光组织化学是现代生物学和医学中广泛应用的技术之一，是由Coons和他的同事(1941)建立，免疫荧光技术与形态学技术相结合发展成免疫荧光细胞(或组织)化学。它与葡萄球菌A蛋白(SPA)、生物素与卵白素、植物血凝素(ConA等)相结合拓宽了领域；与激光技术、电子计算机，扫描电视和双光子显微镜等技术结合发展为定量免疫荧光组织化学技术；荧光激活细胞分类器Fluorescin acti ...

常用抗体标记荧光染料的选择随着免疫荧光技术的不断发展，荧光染料及其标记的抗体偶联物也被广泛的应用于生物学实验中。目前，市场上抗体及蛋白标记的荧光染料主要有CFTM系列(BIOTIUM, USA); Alexa Fluor®系列 (Life technology, USA); DyLight系列;Cy系列; IR Dye系列等等。使用最多的为AlexaFluor®系列和CFTM系列。CFTM系列染料的核心对比AlexaFluor® ...

关于荧光三标如何选择抗体？做免疫荧光实验中，经常要进行免疫荧光的双标记实验，也就是在同一个样本上同时进行两种蛋白的免疫荧光检测。具体的实验时，可以选择不同来源的一抗，然后再选择分别针对一抗的二抗，同时二抗上标记有不同的荧光团。一般的双标记实验里，都会选择一个绿色的（如FITC、Cy2、Dylight 488等）荧光标记，一个红色的（如Rhodamin、Cy3、TRITC、Texas Rad、Dylight 539等）的荧光标记。 ...

、非特异性染色的主要因素　　组织的非特异性染色的机理很复杂，其产生的原因主要可分为以下几点：　　（1）一部分荧光素未与蛋白质结合，形成了聚合物和衍化物，而不能被透析除去。　　（2）抗体以外的血清蛋白与荧光素结合形成荧光素脲蛋白，可与组织成分结合。　　（3）除去检查的抗原以外，组织中还可能存在类属抗原（如Forssman氏抗原），可与组织中特异性抗原以外之之相应抗体结合。　　（4）从组织中难于提纯抗原性物质，所以制备的免疫血清中往往混杂一些抗其 ...

（一）、仪器设备1）18cm不锈钢高压锅或电炉或医用微波炉；2）水浴锅（二）、试剂1）PBS缓冲液（pH7.2～7.4）：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L，KH2PO4 1.4mmol/L。2）0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液（CB，pH6.0，1000ml）：柠檬酸三钠 3g，柠檬酸 0.4g。3）0.5mol/L EDTA缓冲液（pH8.0）：700ml水中溶解186.1gEDTA·2H2O，用10 mmol/L N ...

免疫组化常见问题的处理免疫组化常见问题的处理当免疫组化染色没有出现预期结果时，应系统地查找原因，而每一次只能排除一种可能的原因。对照/标本无染色① 确认是否忽略了应该加的某种试剂，包括一抗、二抗、三抗及底物等。② 确认所有的试剂是否按正确的顺序加入，是否孵育了足够的时间。③ 对照抗体的标签确认是否使用了正确的抗体，以及所用的检测系统是否和一抗匹配，这一点是非常重要的。比如，如果一抗是兔来源的抗体，二抗一定要用抗兔的二抗来匹配； ...

免疫组织化学的概念：免疫组化是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学。免疫组化实验所用的抗体有哪些？免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体。单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体，应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后，从动 ...

【资料】荧光物质波长Fluorochrome Excitation Wavelength Emission WavelengthAcid Fuchsin 540 630Acridine Orange(Bound to DNA) 502 526Acridine Red 455-600 560-680Acridine Yellow 470 550Acriflavin 436 520AFA (AcriflavinFeulgen SITSA) 355-425 460Alizarin Complexon 530-560 ...

1. 新鲜组织立即在恒冷冰冻切片机内切片( 也可- 80℃保存)，厚度为 5～6m。 2. 载玻片可不打底，裱片后，立即用电吹风吹干。 3. 如不马上染色，可密封后- 20℃保存。 4. 染色前用冷丙酮在 4℃固定 10-20 分钟。 5. PBS 洗 2 次，每次 5 分钟，( 必要时应用 0.1%柠檬酸钠+0.1%triton打孔)1. 新鲜组织立即在恒冷冰冻切片机内切片( 也可- 80℃保存)，厚度为 5～6μm。2. 载玻片可不打底，裱片后，立即用电吹风吹干。3. 如不马上染色，可密封后- 20℃保存。4. 染色前用冷丙酮在 4℃固定 10-20 分钟。5. PPS洗 2 次，每次 5 分钟，( 必要 ...

石蜡切片免疫组化染色步骤1、载玻片的处理：抗原修复过程中，由于高温、高压、辐射等诸多因素的影响，极易造成脱片。为保证试验的正常进行，可选用我公司提供的ZLI-9001 APES、ZLI-9003 HistogripTM或ZLI-9005 Poly-L-Lysine等几种试剂，对已清洗的载玻片进行处理。具体方法如下：1.1 APES：现用现配。将洗净的玻片放入以1:50比例丙酮稀释的APES中，停留20~30秒钟，取出稍停片刻，再入纯丙酮 ...

12月份ELISA讨论区http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=68&id=4999919&sty=1&tpg=7&age=0http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=68&id=5004878&sty=1&tpg=7&age=0http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=68&id=5016009&sty=1&tpg=6&age=0http://www.dxy.cn ...

为了保持细胞结构的自然状态和组织性形式，通常要经过化学固定来中止细胞中的酶及其他的代谢活动，使其尽可能的保持原有状态。而有些常用的固定剂用得不恰当，往往会造成假象或信号丧失，非特异性信号增高等。我总结了一下常见几种固定剂的特点与各位战友分享常见固定剂的特点比较---------------------------------------------------------------------------------------------------戊二醛 甲醛 冷甲醇/丙酮------------------------------- ...

Immunofluorescence MethodThe purpose of immunofluorescence is to detect the location and relative abundance of any protein for which you have an antibody. Once you have antibodies to your favorite protein, you can use them to indicate where the protein is located. In this example, we will use an ...