免疫检测分析

在现代生物医学研究及临床应用领域，酶联免疫吸附检测术（Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay，ELISA）的使用越来越广。在免疫学研究中，常见的ELISA应用包括检测体液或培养液中抗原（如细胞因子）或抗体的浓度。虽然ELISA技术的操作流程因具体实验目的不同而有差异，其基本思路均是先将已知抗体（或抗原）固定于酶联反应板上，利用抗原-抗体特异性结合的特点，使待检测样本中相应的抗原（或抗体）联结在酶 ...

作者：Nanci Donacki 转自www.bioon.comFormalin Fixed Cell Plates1. Trypsinize confluent flasks2. Pool and count cells3. Centrifuge at 1500 rpm for 10 minutes4. Resuspend to the appropriate concentration in complete medium4 x 105 cells/ml for epithelial cells2 x 105 cells/ml for fibrobl ...

ELISA中常见问题及解决方法ELISA试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用，但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大，如不注意，有可能导致显色不全、花板等结果。我将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下，以期给同行带来一些启发，提高试验质量。下面分析Elisa试验操作中可能影响结果的原因，并给出相应的解决办法1 选择试剂 选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将 ...

LISA技术的-操作要点 　优质的试剂，良好的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。ELISA的操作因固相载体的形成不同而有所差异，国内医学检验一般均用板式点。本文将叙述板式ELISA各个操作步骤的注意要点，珠式、管式及磁性球ELSIA，国外试剂均与特殊仪器配合应用，两者均有详细的使用说明，严格遵照规定操作，必能得出准确的结果。4.1 标本的采取和保存可用作ELISA测定的标本十分广泛，体液（如血清） ...

10月份ELISA讨论区http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=68&id=4630510&sty=1&tpg=5&age=0http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=68&id=4617276&sty=1&tpg=5&age=0http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=68&id=4605198&sty=1&tpg=5&age=0http://www.dxy.cn ...

Immunoassays: A Practical Approach (Practical Approach Series)Author: James P. Gosling (Editor)Publisher: Oxford University Press(UK)Publication Date: 2000-07-15Number Of Pages: 304Format: dvjuSize: 5.94MBSummary:Immunoassays is the first practical volume desi ...

第三节　ELISA的原理和类型　　一、基本原理　　1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。这一方法的基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标 ...

ELISA的原理和类型1.　ELISA的原理　　ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的 ...

Cellular ELISA ProtocolFormalin Fixed Cell Plates1. Trypsinize confluent flasks2. Pool and count cells3. Centrifuge at 1500 rpm for 10 minutes4. Resuspend to the appropriate concentration in complete medium4 x 105 cells/ml for epithelial cells2 x 105 cells/ml for fibroblast cells5. ...

ELISA技术中的抗原与抗体的反应抗体1.2.1　抗体的结构 抗体是能与抗原特异性结合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。Ig分五类，即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。与免疫测定有关的Ig主要为IgG和IgM。Ig由两个轻链（L）和两个重链（H）的单体组成。Ig的轻链是相同的，有κ（kappa）和λ（Lambda）两种型别。五类Ig的重链结构不同，这决定了它们的抗原性也不同。IgG和IgM的重链分别称为γ（ ...

cAMP/cGMP（环磷酸腺苷/环磷酸鸟苷）是一种环状核苷酸，以微量存在于动植物细胞和微生物中。有人称其为细胞内的第二信使，而称激素为“第一信使”。cAMP（或cGMP）由腺苷酸（或鸟苷酸）环化酶产生，而被磷酸二酯酶降解，因此激活腺苷酸（或鸟苷酸）环化酶或者抑制磷酸二酯酶可以提高细胞内cAMP（或cGMP）的含量。研究发现，cAMP（或cGMP）特异性磷酸二酯酶的抑制剂可用于人类疾病的治疗。如cAMP的封闭剂，增强β肾上腺 ...

http://www.3i.com.cn/article/09.htmTroubleshooting protein binding in nitrocellulose membranes(硝酸纤维素膜上蛋白质固定的问题解决)发布者：派坤学苑 （bbs.3i.com.cn）发布时间：2006-5-11--------------------------------------------------------------------------------Part 1: PrinciplesKevin D. JonesDevelop ...

我现在做elisa，目的是利用此法来检测我样品中蛋白的浓度，我用的是改良的双抗体夹心法，就是包被鼠单抗，加标准品和待测样品，再加兔多抗，再加山羊抗兔的酶标二抗，TMB显色。我现在的问题是摸索单抗和多抗的稀释度，所以就将多抗稀释了三个浓度1:5000,1:10000,1:15000,1:20000，单抗 包被稀释度是1:15000，标准品都是五倍稀释即：25μg/mL , 5μg/mL , 1μg/mL , 0.2μg/mL , 0.04μg/mL 酶标二抗是1:5 ...

液相芯片技术及在中国的应用前景讨论！Lumniex™100 Liquid Array液相芯片分析平台Luminex™100是一个多功能的液相芯片分析平台，通常用于免疫分析、核酸研究、酶学分析、受体和配体识别分析等研究。Luminex™100有机地整和了有色微球（color-coded microsphere or bead）、激光技术、应用流体学、最新的高速数字信号处理器和计算机运算法则，造就了Luminex™100无与伦比的检测特 ...

【分享】柱层析极性小的用乙酸乙酯：石油醚系统极性较大的用甲醇：氯仿系统极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系统拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸硅胶柱层析下面介绍我现在惯用的方法：匀浆法。1。称量。200-300目硅胶，称30-70倍于上样量；如果极难分，也可以用100倍量的硅胶H。干硅胶的视密度在0.4左右，所以要称40g硅胶，用烧杯量100ml也可以。2。搅成匀浆。加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。如果洗脱剂是石油醚/ ...

1. ELISPOT包被抗体：1. 按1：200比例稀释，将包被抗体加入到4℃储存的1×PBS中，在ELISPOT平板每孔中加入100μl稀释后的包被抗体；2. 置于4℃冰箱封闭过夜（16小时）；封闭：3. 弃去包被抗体稀释液。每孔加入200μl含10%牛血清的RPMI1640培养基清洗，放置2分钟；4. 每孔加入200μl的含10%牛血清的RPMI1640培养基，室温放置2小时；刺激细胞：5. 弃去每孔中的200μl的含10%牛血清的RPMI 16 ...

ELISA实验质量控制问题BIOX.CN 2004-9-7 14:52:52来源：生命经纬　　从1949年美国College of American Pathologists（简称CAP）首先开始研究临床实验室室内质量控制（简称质控）问题，美国学者Levery和Jenning于1950年发表第一篇关于使用质控图的实验室室内质控，临床检验实验室的室内质控工作正式拉序幕。　　到70年代，实验室质量控制进入一个新的阶段--全面质量管理，推行GoodL ...

　　完整的ELISA试剂盒包含以下各组分：（1）已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；（2）酶标记的抗原或抗体（结合物）；（3）酶的底物；（4）阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），参考标准品和控制血清（定量测定　　　中）；（5）结合物及标本的稀释液；（6）洗涤液；（7）酶反应终止液。3.1　免疫吸附剂　　已包被抗原或抗体的固相载体在低温（2~8℃）干燥的条件下一般可保存6个月。有些不完整的试盒，仅供应包被用抗原或抗体，检测人员需自行包被。以下简述固相载 ...

北京基谱生物科技有限公司技术服务SOP文件ELISA取样及运输注意事项一、血清提取方法：1.全血促凝管取血，轻轻颠倒两三次，放置片刻让全血凝固，凝固后3000转15-30min离心取上清。2.全血普通EP管取血，室温放置2h左右，让其凝固，凝固后3000转15-30min离心取上清。特别注意：取血清避免震荡，以防止溶血，溶血会对结果有影响。二、样本取量及运输每个指标做单孔检测，一个样本需取血清30ul，3个复孔需90 ul ...

免疫胶体金稀释液的配伍原则（前面我一个回帖成此文，发现太长了，不发新帖可惜，呵呵）制备好免疫胶体金后，还需要将其稀释到一定浓度，并吸附于特殊的惰性介质中才能够最终制成产品。一般来说，特殊的介质常用的是玻璃纤维或无纺布。玻璃纤维和无纺布本身一般是疏水的，胶体金产业一般采用表面活性剂预处理过的玻璃纤维或无纺布，通常配方为1%Tween20+适量PVA。介质处理完成后，免疫胶体金稀释液的配伍才是最关键的。现总结原则如下， ...