Q:用流式作细胞凋亡为什么跟tunel差别那么大啊？？tunel测出来的细胞凋亡率大概有30％而作流式测出来的凋亡率只有2％（阴性对照 0.5％）差别好大啊，用的是beckman公司的Annexin V /PI双染试剂盒，实验步骤如下：1，胰酶消化贴壁细胞，加培养基中止，离心1000转 5min2，吸去上清，PBS0.5ml 重悬细胞（因为要送到别处作流式，期间路程约1h，户外温度约37度）3，然 ...
上流式前细胞用75％乙醇固定行吗？Q:我养肿瘤细胞，测周期。看到帖子说70％乙醇必须用PBS和乙醇配，用水配细胞会碎裂，有帖子说PBS和乙醇配会出现絮状物。上流式前细胞用75％乙醇固定，就用买来的现成的瓶装75％乙醇，行吗？必须那么严格吗？A:先用冷PBS悬浮细胞，大约1-2ml，充分悬浮，使细胞充分分散成单细胞。之后缓慢加入无水乙醇，终浓度为70-75%乙醇。不直接加75%乙醇的原因是：直接加入 ...
一、实验目的 掌握流式细胞仪的工作原理 掌握用流式细胞仪测量细胞群体DNA含量分布的方法 了解流式细胞术在细胞生物学研究中的应用 二、实验原理 流式细胞仪的工作原理是将待测细胞放入样品管中，在气体的压力下进入充满鞘液的流动室。在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出，形成细胞柱。通过对流动液体中排列成单列的细胞进行逐个检测 ...
第一篇：流式细胞术的历史 概要说来，流式细胞术主要包括了样品的液流技术、细胞的分选和计数技术，以及数据的采集和分析技术等。FCM目前发展的水平凝聚了半个世纪以来人们在这方面的心血和成果。 1934年，Moldavan1首次提出了使悬浮的单个血红细胞等流过玻璃毛细管，在亮视野下用显微镜进行计数，并用光电记录装置计测的设想，在此之前，人们还习惯于测量静止的细胞，因为要使单个细胞顺次流过狭窄管道容易造成 ...
做免疫学特别是肿瘤学实验，总免不了要测淋巴细胞或其他细胞对肿瘤细胞的杀伤，老外最常用的是Cr51放射实验，但这个方法在国内的不少地方都不能做，而MTT这个方法又太老了，而且也不准确，那么替代方法就用流式细胞术，又方便，又准确，这也是偶参照老外的方法吧。 1、计数靶细胞，并加入CFSE，使CFSE终浓度达到2uM37度30分钟。 2、拿出后，1000rpm5min可隐约看到细胞染成黄色，PBS洗三次 ...
端粒是真核生物染色体末端的特异DNA-蛋白结构，端粒DNA是一系列重复的富含G的DNA序列，这一序列在生物进化中有高度的保守性（人重复序列为TTAGGG）。已确认端粒在保护基因组DNA不被降解、防止染色体有害的结合（如染色体末端融合、重排、染色体移位和染色体缺失）中起重要作用。 由于DNA聚合酶不能复制线性DNA的最末端，多数正常体细胞的端粒末端每经一个复制循环就进行性缩短。这一现象在体内和体外都 ...
一直有同学在尝试流式检测凋亡，一直有同学在问怎么分析大量似是而非或者一塌糊涂的流式“凋亡”数据，一直有同学指着荧光图里的各种各样的“AP”、“subG1”夸夸其谈。关键问题在哪里呢？我曾经不止一次跟帖阐述过流式检测凋亡的强限制性，但是效果很不好，所以单独开一个说明贴，以后我不再跟帖解释。版主可以考虑置顶，以后有新同学不知道就看 ...
【摘要】 目的 比较流式细胞仪、免疫磁珠及亲和板结合分离法分选肝癌亚群细胞的效果。方法 原代培养肝细胞癌细胞，分别以流式细胞仪、免疫磁珠及亲和板结合分离法分选ckit+肝癌细胞，然后使用流式细胞仪鉴定细胞纯度，计算回收率；以台盼蓝检测细胞活力，CCK8法检测细胞增殖能力，裸鼠移植测其成瘤率，并进行统计学分析。结果 流式细胞仪分选所得到的ckit+肝癌细胞纯度、回收率最高，与其他两 ...
【摘要】 目的 建立健康儿童T淋巴细胞亚群及其绝对计数的正常参考值。方法 采用流式细胞术，通过四色荧光标记，在绝对计数管（TruCount tube）内进行T淋巴细胞亚群的检测及绝对计数分析。结果 健康儿童T淋巴细胞（CD3+细胞群体）占淋巴群体的百分率为(65.16±7.05)%，绝对计数为(2029.75±718.85 ...
【摘要】 目的 探讨应用流式细胞术(FCM)检测恶性肿瘤病人外周血淋巴细胞多项免疫指标的变化及该指标对恶性肿瘤免疫治疗前后的临床价值。方法 采用流式细胞术检测50例恶性肿瘤病人和31例健康人的外周血CD3、CD4、CD8等八项免疫指标变化，并且对其中10例病人应用免疫制剂治疗前后对抗原表达的结果进行比较。结果 恶性肿瘤病人免疫功能紊乱：(1)细胞免疫 ...
细胞凋亡的检测方法众多，流式细胞仪检测凋亡，是常用的方法。由于流式细胞仪固有的特点――可以准确的进行凋亡细胞的计数。因此，具有其它方法无可比拟的优越性。下面我们就简单明了地介绍流式在检测凋亡方面的应用。 下面是一幅凋亡过程图。在凋亡诱导剂的作用下，首先是细胞色素C和apa f－1形成复合体，线粒体的功能发生衰退；后是caspase家族激活，磷脂酰丝氨酸外翻，这时细胞的形态已经发生了改变，可以看到细 ...
准备使用回收的柱子时，抗体孵育始，即将柱子置于新鲜的75%酒精中，柱的容器内盛满酒精，自动流下，既消毒，又de-gas，去除气泡十分关键。洗抗体时，即开始洗柱子，将回收柱架于消毒过的长试管口上。换新的酒精自然滴下，换PBS+0.1%FBS冲洗之，最后用MACS Buffer冲洗。柱子准备完毕，准备上柱的细胞也就同时准备好了。回收方法：将长试管注满PBS，回抽柱子的活塞，倒出回抽液。倒入新的PBS， ...
■ 磁性微球在核酸纯化上的应用 核 ...
（主要针对Miltenyi产品）一、标记策略用MACS进行磁分离，最重要的参数就是高质量的标记。对阳性细胞的标记应尽可能强，而背景要尽可能低，才能获得对磁标记的阳性细胞和未标记的阴性细胞的最好分辨。有多种不同的标记策略可供参考：（1）直接标记：直接标记是最快速和最特异的磁标记方法。（2）间接标记：几乎所有的单克隆抗体或多克隆抗体都可以用于间接标记。用无标记的、生物素化的或FITC、PE或APC结合 ...
磁珠分选细胞注意事项：1.待分选细胞中如有贴壁细胞，建议在分选前先贴壁培养去除，或者提高EDTA浓度； 2.抗体包被磁珠对死细胞常有非特异性结合。因而分选前去除死细胞； 3.新鲜分离骨髓细胞，先用胶原酶、DNA酶、胰酶联合消化，可使细胞团块解聚，从而提高分离效率。 4.上分离柱前，充分振荡，混悬细胞，打散细胞团块； 5.用分离柱分选，应用真空抽滤水，减少水中气泡，使分离柱不被气泡阻滞； 6.细胞悬 ...
核酸研究是现代生物学、医学研究中的重要课题。核酸作为遗传信息的携带者，是基因表达的物质基础，除了在生物体正常的生长、发育、和繁殖等生命活动中具有十分重要的作用外，它与生命的异常情况，如肿瘤发生、放射损伤、遗传疾病等也有密切关系。因此核酸是现代生物学、医学研究中的重要课题。无论是进行核酸结构与功能的研究，还是进行基因工程、蛋白质工程等的研究，首先都需要对核酸进行分离纯化。传统的核酸分离技术包含沉淀， ...
免疫磁性微球在生物医学方面的应用（1）免疫磁性微球在自身骨髓移植中的应用 在过去10多年中，高剂量化疗后给予自身骨髓移植（ABMT）已经成为某些患有急性白血病、何杰金氏淋巴瘤（NHL）、神经母细胞瘤及wilms肿瘤的可选疗法。最近，ABMT用于小细胞肺癌、睾丸癌和乳腺癌也取得了饿令人鼓舞的结果。但是，ABMT也有限制条件，那就是肿瘤转移细胞有可能累及骨髓。因此，在体外清除骨髓中的癌细胞是保证ABM ...
目前磁性微球在生物医药方面的应用以免疫磁性微球为代表，发展较快，已有产品上市，而且有很多成功的应用。磁性纳米材料是构成磁性微球的重要组成部分，因此磁性微球的应用也就是磁性纳米材料的应用。1 磁性纳米材料的制备与性能常用的磁性材料为三氧化二铁、四氧化三铁、铁钴合金等。这些磁性材料具有较好的磁响应性，采用适当的方式可以方便地得到这些大小在纳米尺度的磁性材料。例如：取一定量的磁性材料分别溶于适量的蒸馏水 ...
免疫磁性微球(Immunomagnctic beadsIMB) 是免疫学和磁载体技术结合而发展起来的一类新型材料。IMB是包被有单克隆抗体的磁性微球，可与含有相应抗原的靶物质特异性地结合形成新的复合物。通过磁场时，这种复合物可被滞留，与其它组分相分离该过程称为免疫磁性分离法(Immunomagnctic Separation)。免疫磁性分离简便易行，分离纯度高，保留靶物质活性，且高效、快速、低毒， ...
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