磁珠分选细胞注意事项

磁珠分选细胞注意事项

1、待分选细胞中如有贴壁细胞，建议在分选前先贴壁培养去除，或者提高EDTA浓度。

2、抗体包被磁珠对死细胞常有非特异性结合。因而分选前去除死细胞。

3、新鲜分离骨髓细胞，先用胶原酶、DNA酶、胰酶联合消化，可使细胞团块解聚，从而提高分离效率。

4、上分离柱前，充分振荡，混悬细胞，打散细胞团块。

5、用分离柱分选，应用真空抽滤水，减少水中气泡，使分离柱不被气泡阻滞。

6、细胞悬液加入分离柱中时，应将滴管伸至底壁后加入，避免将细悬液沿管壁流入，使管壁残流末分选细胞，以致后继洗柱过程中，因疏忽末被洗下，最后导致纯度不高。洗柱时，应在前次液体充分流尽后，再加洗液。

7、分选细胞量应根据说明书控制，不超量。

8、孵育时间和温度应按说明书进行，延长孵育时间、提高温度会增加非特异结合。

9、先用抗体阻断Fc受体，可降低非特异性结合。