基础免疫实验

1. 家兔心脏穿刺采血法 （1）一个人固定兔子用两腿夹住兔子的两条后腿，两手握住两前腿，使家兔前胸尽量向前突。 （2）用剪刀去左前胸的毛，以碘酒消毒，再用酒精棉球擦去碘酒。 （3）先用手指按摸心脏搏动最强部位（约在左侧胸骨的第三肋间）将针头刺入，如已刺入心脏则可见针头随心脏搏动而上下跳动，此时轻轻抽动注射器，可见血液涌出。 （4）一般家兔抽取30~50毫升仍可生存，如不需保存动 ...

免疫血清的制备是一项常用的免疫学实验技术。高效价、高特异性的免疫血清可作为免疫学诊断的试剂(如用于制备免疫标记抗体等)，也可供特异性免疫治疗用。免疫血清的效价高低取决于实验动物的免疫反应性及抗原的免疫原性。如以免疫原性强的抗原刺激高应答性的机体，常可获得高效价的免疫血清。而使用免疫原性弱的抗原免疫时，则需同时加用佐剂以增强抗原的免疫原性。免疫血清的特异性主要取决于免疫用抗原的纯度。因此，如欲获得高特异性的免疫血清，必须予先纯化抗原。此外，抗原的剂量、免疫途径及注射抗原的时间间隔等，也是影响免疫血清效价的重要因素应予重视。

一、裂解细胞 1. 收集细胞。将培养瓶置于冰上，倒掉培养基，用PBS 或生理盐水漂洗两 次，留适量液体于瓶内，然后用特制的细胞刮棒朝一个方向刮取细胞。 将细胞悬液转移到离心管，离心取沉淀，-80℃ 保存。 （收集细胞要迅速， 低温下进行，以减弱蛋白酶的作用） 2. 裂解细胞。采用 RIPA裂解体系，使用前 4℃ 预冷，按 107 个细胞加入 1.0ml 裂解液，吹打混匀，加入适量的蛋 ...

和光纯药工业株式会社 基因研究所 西部隆宏、吉居华子 前言 免疫沉淀法，是利用固相化在磁珠上的抗体与抗原（目的蛋白质）发生沉淀反应原理使蛋白分离、纯化。此方法不仅用于抗原蛋白质的纯化，还可以与抗原蛋白质相互作用，令蛋白质、核酸共沉淀，可应用于蛋白质间的相互作用、染色质免疫沉淀（Chromatin Immunoprecipitation: ChIP）、RNA免疫沉淀（RNA Immunopreci ...

适应性免疫涉及的一些重要概念1．三个特点 (1)特异性：二次应答时能精细地区分致敏的抗原和其他无关的抗原；因而免疫应答的特异性指的是抗原特异性 (2)多样性：参与获得性免疫应答的淋巴细胞，其表面识别结构和相应分子(如抗体)所显示的高度异质性，赋予机体具有识别数量极大的抗原并与之起反应的能力。多样性是特异性产生的基础。 (3)记忆性：再次遇到同一抗原时，出现增强性应答。免疫记忆由记 ...

数量和浓度的度量是免疫系统感知的重要方面 有效的抗体应答很大程度上取决于抗原的剂量，过高或过低的抗原浓度不会产生相应的抗体，被称之为低带耐受和高带耐受，机制之一是免疫系统对抗原的感知具有量上的敏感性。在这个意义上，耐受的产生也是一种免疫调节。抗体应答的产生依赖于初次免疫时抗原的剂量过低高和过高剂量引起不应答状态，分别称为低带耐受和高带耐受。 剂量对免疫应答作用的例子很多， ...

网络平衡阈值的跨越及对增殖信号的感应 早在20世纪初，PaulEhrlich就在有关抗体产生的侧链理论中提出，抗体形成细胞可表达结构各异的多种受体，一旦抗原出现，结构与之互补的受体分子通过与该抗原的结合，可使相应细胞产生并大量分泌同样类型的抗体分子。在Ehrlich绘就的一张示意图中，生动地展示了抗体生成细胞如何“知道”其受体已与抗原结合，并迅速做出应答。该示意图的下半部可见，参与结合的受 ...

TCRα链前体(pTα)在TCR基因表达中的作用 T细胞分化、成熟的双阳性期中，随着TCRp链的表达，首先出现pTα。pTα的表达具有重要意义。研究发现，pTα是调控TCR基因表达及CD8和CD4表达的重要元件。 pTα的表达，可抑制另一β链基因的表达――等位排斥；刺激前T细胞的进一步分化、成熟；同时，pTα可促进TCR。链基因的重排；最终pTα可促进CD4和CD8分子的表达。【生 ...

NK细胞识别的丧失自我和压力诱导模式 1986年Karre提出“丧失自我”(missingself)假说，认为NK细胞是搜寻、攻击缺乏“自我”(absence。fself)的细范：此处的自我。主要指自身MHCI类分子。由于后者在体内绝大多数细胞表达，抑制性受体KIR和KLR的存在，有效地阻止了NK细胞对正常自身组织细胞的攻击。而对同种异型或异种细胞(KIR具个体特异性和种族特异性)的MHC ...

TCR复合物识别APC表面的pMHC之后，使一些受体及其相连的胞内信号转导分子迅速被动员到T-APC的接触部位。首先是TCR复合物(TCR+CD3)，也包括CD4或CD8辅助受体、CD28协同刺激受体，以及与跨膜受体相连的蛋白激酶等，它们从原先自由浮动的状态进入两细胞接触部分的中间地带成为cMASC。而辅佐分子LFA-1及其配体ICAM-1仍留在周边，发挥使T-APC ...

病原体通过各种途径进入人体后，就开始了感染过程。病原体的致病力和机体的免疫功能决定病原体是否被清除，或是定植下来，并繁殖复制，进而引起组织损伤、炎症过程和各种病理学改变。感染过程可有下列几种不同的表现。 一、病原体被清除 病原体进人人体后，可被处于机体防御第1线的非特异性免疫屏障(如胃酸)清除(霍乱弧菌)，也可以由事先存在于体内的特异性被动免疫(来自母体或 ...

免疫亲和层析的操作方案一、免疫亲和层析程序方案概述 免疫亲和层析可分为三个步骤：（1）将抗体与基质（微珠）共价交联并制备抗体亲和层析柱。（2）将抗原结合到抗体-微珠基质上。（3）抗原的洗脱。 第一步，先将单克隆抗体或经过亲和层析纯化的多克隆抗体以共价方式交联到固相基质（微珠）上。除特殊情况外，一般不使用未经纯化的多抗，因为从多抗层析柱上洗脱抗原非常困难，通常需要以适当的条件先使抗原变 ...

从免疫亲和层析柱上洗脱抗原类型 实际上，从免疫亲和层析柱上洗脱抗原的操作比较简单，而且也比较迅速。主要工作是设计和摸索各种有效的洗脱条件。可以采用三种类型的方法进行洗脱，使抗原抗体复合物解离：①使用较苛刻的条件；②加入模拟结合位点的饱和量小分子化合物，和／或③使用一种能引起构象改变而使抗原释放的试剂。 最常用的洗脱方法是基于破坏抗体与抗原之间的结合键。洗脱条件可以较为强烈，使抗体和 ...

印迹膜蛋白染色【所需试剂】（1）2%丽春红S浓贮存液（3-羟基-4--2，7-萘二磺酸）：溶于30%三氯醋酸和30%磺基水杨酸中。贮存液可在室温下稳定存放1年以上。（2） PBS。【操作步骤】（1）在染色之前，先配制丽春红S的应用液。即将2%的丽春红S浓贮存液用1%醋酸1:10稀释即成为应用液（注意：如果使用硝酸纤维膜，须将丽春红S应用液更换为用水1:10稀释）；（2）用丽春红 ...

《每日科学》2010年6月29日报道 —— 科学家向治愈糖尿病的最终目标又迈出了一大步：来自华盛顿大学医学院圣路易斯分院的研究人员将来自猪胚胎的胰腺细胞与成年猪的胰岛细胞移植给大白鼠，成功地减轻了大白鼠的糖尿病症状。

本文主要介绍了造血干细胞的不同保存方法

小鼠组织切片免疫组化实验步骤

将放射性元素标记的抗体（或抗原）与相应的抗原（或抗体）沉淀时，沉淀线通过自显影而证实。所谓自显影，就是通过复合物中的标记同位素在蜕变过程中放出的射线，作用于感光材料的卤化银晶体而产生潜影，再经过显影把“像”显示出来。这样，能检出肉眼看不见的沉淀线，从而提高反应的敏感性，这种方法可应用于凝胶中的所有反应。

1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。

单克隆抗体由可以制造这种抗体的免疫B细胞与骨髓瘤细胞融合后的细胞产生的，这种融合细胞即具有瘤细胞不断分裂的能力，又具有免疫细胞能产生抗体的能力。