抗体抗原实验

1.　ELISA的原理　　ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相 ...

基本原理　　1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。这一方法的基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原 ...

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第一抗体的染色： 1、将切片浸在3％H2O2甲醇溶液（新鲜配制）中10分钟，PBS冲洗2分钟×3次 2、加100ul（2滴）血清封闭溶液（试剂1）到切片上，室温孵育10分钟，倒掉（不能冲洗） 3、加入一抗（按照说明推荐浓度和孵育条件） 4、使用含有0.05％吐温20的PBS(TPBS)，冲洗2分钟×3次 5、加入100ul（2滴）生物素化的二抗（试剂2)，室温孵育10分钟 ...

免费提供实验代测服务网址:www.westang.com电话：021-65333639人细胞因子分装ELISA试剂盒货号品名方法规格价格备注F0001人血管紧张素转化酶(Human ACE)ELISA48T/96T2000/3000进口分装F0002激活素A(Activin A)ELISA48T/96T2000/3000进口分装F0003★人脂联素(human Adiponectin)ELISA ...

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一、脱蜡和水化方法同SP法。二、第一抗体的染色1、将切片浸在3%H2O2甲醇溶液（新鲜配制）中10 min，PBS冲洗3 min×3次；2、加100 ul（2滴）血清封闭溶液（试剂1）到切片上，室温孵育10 min，倒掉（不能冲洗）；3、加入一抗（按照说明书推荐浓度和孵育条件）；4、使用含有0.05%吐温20的PBS( TPBS)，冲洗5 min×3次；5、加入100 ul（2滴）生物素化的二抗（ ...

1、洗载玻片将载玻片置于重铬酸钾和浓H2SO4混合液中，目的是为了是载玻片上的硅胶等除去，同时使一些肉眼看不见的凹凸不平的表面变平整，便于组织吸附，然后置于清水中清洗，除去残余的重铬酸钾和浓H2SO4（大约冲一个小时左右），再将载玻片浸泡于酒精之中， 然后放到架子上，置于37 oC温箱中，将多聚赖氨酸涂布于玻片的表面，由于Lys带正电，而大多数的组织带负电荷，从而产生吸附作用。2、包埋组织先在铁模 ...

良好的免疫组化染色切片是正确判断染色结果的基础和前提。由于免疫组化染色过程中存在很多步骤或环节，每一个步骤或环节都可能影响到染色的最终结果，因此，要做好一张高质量的免疫组化切片并不是一件非常容易的事。需要病理技术员和病理医生密切配合、相互协调、共同努力才能保证做出合格的免疫组化切片。虽然免疫组化染色可以存在各种各样的问题，但从染色的结果看，一般可分为两类：无色片（即无阳性信号）和“ 杂音”染色片（ ...

1、 一抗从4度拿出后，为什么要进行37度复温？（1）一方面，防止切片从4度直接放入PBS易脱片；（2）另一方面，使抗原抗体结合更稳定。一般不需要，但对表达较弱的抗原可能有用，4度和37度时分子运动方式不同，前者分子碰撞机率和运动速度小于后者，后者结合更快，但敏感性也提高了并易造成非特异染色。（3）其实，我更赞同后一种说法，因为我尝试把肝脏或睾丸片子从4度过夜拿出后，直接用PBS洗没发生过脱片现象 ...

1、问：免疫荧光：用免疫荧光方法做同样的内容，组织切片和培养细胞，两者操作过程中有哪些不同？参考见解：只是固定方法不同，细胞固定用甲醇，切片固定用多聚甲醛，而染色方法是一样的。2、问：近期要做免疫荧光双标，不知哪位有免疫荧光双标技术的详细步骤以及注意事项？参考见解：我正在做冰冻组织切片的免疫荧光的双染。有些体会：（1）选取primary antibodies时要来源于两种不同的动物，我用的是来源于 ...

一、免疫荧光的标本制作的基本程序同DAB显色的免疫组化，不同点如下：1、免疫荧光不需要使用双氧水处理，封闭和一抗孵育与其它相同。2、免疫荧光的二抗使用不同荧光标记的二抗孵育，孵育时间根据抗体的工作浓度确定。3、二抗孵育之后充分洗片后即可贴片、封片和观察。4、免疫荧光在封片使用专用封片剂或甘油：0.01MPBS （1：1）。5、条件许可可以购买防淬灭的试剂加入封片剂中，标本可以保存更久。6、荧光抗体 ...

实验动物免疫方案1、抗原: 蛋白质、多肽、细胞器、细胞、组织等。2、免疫方式：皮下注射、腹腔注射、静脉注射、肌肉注射等。3、不同动物免疫所需抗原量（以蛋白免疫为例）18-20kDa 动物 抗原量 最佳抗原量 抗原量 最佳抗原量兔子 20-200 100 50-400 200小鼠

ELISPOT1. PBS溶解抗原为30 μg/ml，加100 μl/孔于PVDF膜铺底的96孔灭菌板过夜；2. 第二天吸去包被液后，加5％FCS的PRMI 1640培养基100 μl封闭1小时，37 oC；3. 准备脾细胞悬液（用氯化铵去除红细胞，制备成单个脾淋巴细胞悬液）；4. 从1 × 106/孔开始，按1:3的稀释度开始逐孔稀释做不同浓度梯度，并做3 ...

藻酸盐包裹实验1. 将藻酸钠溶于无菌生理盐水，终浓度为1.5%；2. 收集培养的肿瘤细胞，用无血清的培养基洗涤1次，将细胞沉淀重悬于1.5%藻酸钠溶液中；3. 将上述肿瘤细胞悬浮液用1 ml加样枪缓慢滴入磁力搅拌的250 mM CaCl2溶液中，形成乳白色的藻酸盐小珠。继续静置于250 mM CaCl2中30 min即可使用。以上操作步骤均在无菌条件下进行；4. ...

A. Plating:To sterilize glass coverslips dip in ethanol and flame. We use 22x22x1 mm3 coverslips and put them in 6-well plates.Seed 100000 cells per well overnight and fix the next day.B. Fixatio ...

Methanol fixation works by precipitating proteins and as such it is a quick method (2-5)minutes is enough time for most antibodies/proteins). Diffuse proteins may be losthowever in which case PFA fixa ...

石蜡切片免疫组化染色步骤1、载玻片的处理： 抗原修复过程中，由于高温、高压、辐射等诸多因素的影响，极易造成脱片。为保证试验的正常进行，可选用我公司提供的ZLI-9001 APES、ZLI-9003 HistogripTM或ZLI-9005 Poly-L-Lysine 等几种试剂，对已清洗的载玻片进行处理。具体方法如下：1.1 APES：现用现配。将洗净的玻片放入以1:50 比例丙酮稀释的AP ...

一 、石蜡切片方法步骤： 在每次操作切片刀和标本，或更换标本前一定要锁定手轮，并用护刀罩将刀 刃遮住！ 锁定手轮， 应先夹紧标本再装切片刀！ 将预先休整好的石蜡块装在标本夹上， 在使用切片刀和一次性切片刀时，一定要十分小心，其刀刃锋利无比，误操作后会导致严重伤害！ 转动粗转轮，将标本退到后面的极限位置。 将护刀罩移向刀架中间。 将切片刀插入刀架，夹紧。 调节切削角度。 将基体 ...

包埋剂embeddingagent　　在制作切片或超薄切片时，由于组织是柔软的，或局部的软硬不均，这样制作厚薄均匀的切片是困难的。所以有必要用一定物质浸透组织内部，整个组织一样硬化，以利于切成薄片，这种物质叫做包埋剂。一股用光学显微镜观察的切片，用石蜡、火棉胶、炭蜡、明胶等作包埋剂；电子显微镜则用环氧树脂、聚苯乙烯树脂、异丁烯树脂及水溶性树脂。 石蜡制片法是将材料经固定、脱水、透明、浸蜡后包埋 ...