经典遗传学实验

相关专题 我给你介绍两个必叫简单点的酵母破壁方法，非常实用，我作过很多实验，这两个方法是我自己总结出来的，希望对你有用! 酵母的细胞壁比较厚不易破，而且细胞壁中含有的一些成分容易影响以后的实验，所以破壁的步骤非常关键!其他步骤只要你按照说明就可以了。 1. 酚氯仿剧烈振荡方法破壁：培养好的1ml酵母细胞在STE溶液中洗涤两次后，用70ulT ...

相关专题 完美酵母质粒提取实验Protocol 问1:在提取酵母质粒的时候有一步用到玻璃珠谁能告诉我玻璃珠的作用而且在哪能买到玻璃珠贵不贵?谢谢! 答1:在高盐浓度条件下DNA吸附于玻璃珠上吸附了DNA的玻璃珠经离心、洗涤去掉盐和杂物后进行洗脱重悬于水或TE缓冲液中.DNA回收率高而无降解操作简单、快速、方便. 答2:玻璃珠Sigma有可以问 ...

相关专题 完美酵母质粒提取实验Protocol 问：请教如何从酿酒酵母抽提质粒? 用胞壁松解酶处理以后，再用SDS处理，是否就可以破碎酵母了，因为是抽提质粒，不是抽基因组DNA，可以不用蛋白酶K处理吗?请各位朋友提宝贵建议(不用玻璃珠破细胞)。我要尽可能把样品中的质粒都抽提出来，然后 REAL TIME PCR定量，好计算每个酵母细胞中的质粒 ...

相关专题 完美酵母质粒提取实验Protocol 问: 想从酵母提取质粒转化大肠杆菌按分子克隆的方法可能都线性化了转化率为0请问有什么好的办法? 答: 以下是我的方法曾提过数百个好像转化效率还可以基本上都提出来了. 个人体会是Lyticase的活性要好而且涡流混匀这一步好像要尽量充分吧u see酵母质粒所以不好提就是因为酵母细胞有很厚的细胞壁再 ...

相关专题 完美酵母质粒提取实验Protocol 问: 求教酵母破壁的液氮研磨方法的详细步骤需要什么试剂? 答: 取1L酵母诱导完后离心(centrifugation)收菌体称湿重用蛋白(protein)纯化buffer悬浮菌体重量(g):buffer体积(毫升)=1:1--1:2.用注射器将菌液加入液氮中控制加入速度使得菌液进入液氮中后形成小 ...

相关专题 那些实验室常用的克隆载体 pUC18 和 pUC19质粒图谱 pUC18 和 pUC19 大小只有 2686bp ，是最常用的质粒载体，其结构组成紧凑，几乎不含多余的 DNA 片段，GenBank注册号为 L08752(pUC18)和 X02514(pUC19)。由 pBR322 改造而来，其中 lacZ (MSC)来自 M13mp ...

相关专题 那些实验室常用的克隆载体 pUC质粒载体是重要的大肠杆菌质粒载体之一，一起看下pUCm-T质粒图谱和序列吧。 pUCm-T质粒图谱 pUCm-t载体序列 ...

相关专题 那些实验室常用的克隆载体 这两年在美帝净做克隆实验了，以前读PHD时候还觉得自己分子克隆挺牛X的，来这边之后做了各种各样的构建才知道以前是坐井观天，刚才粗粗统计了一下，在美帝一年零八个月，我构建的质粒超过四百个，其中有很简单从PCR构建到拿WB结果的一共不到一周，也有巨难的花了四个月时间换了几次strategy才弄好激动得我半夜給老 ...

相关专题 这几天实验需要做多序列比对，很久不做了，一时之间不知道如何使用clustal这个工具了。在网上搜集了一些资料，做个整理，总结了Clustalx和Clustalw的使用，省得以后久不使用又生疏了，又要去整理了，在此分享给大家，希望有所帮助。 1.先提供下载地址： 官方下载地址：http://www.clustal.org/downl ...

相关专题 向NCBI提交序列常用的方法有两种，其一是在线提交的BankIt，其二是用软件Sequin。在此结合网络牛人实际操作经验来总结下如何通过BankIt在线提交DNA或RNA序列，供参考。 1.整理序列信息：包括病原采集地、病原的寄主、寄主症状、采集人等基本信息;还有序列分析结果，包括序列全长大小，开放阅读框(ORF)的长度、位置及特 ...

相关专题 基因组DNA文库有十分广泛的用途，如用于分析、分离特定的基因片段，用以基因表达调控、人类及动植物基因组工程的研究。通常情况下，基因组文库构建的基本流程可以归为4大步骤：分离基因组DNA、对基因组DNA作相关的处理、将基因组DNA片段连接入载体、将重组载体转入宿主细胞。 一、分离基因组DNA(gDNA) 毫无疑问，优质的基因组DNA ...

相关专题 最近需要做几个菌的16srDNA PCR，也用了变性梯度凝胶电泳（DGGE），由于新手初来乍到，请教了几个师兄，现将有关16srDNA的提取以及DGGE检测实验操作步骤总结下。 一 样品总DNA的提取 1 实验器材：玻璃器材，铝盖，1.5mL离心管，螺口管，锆珠，搅拌器，4℃离心机。 2 实验试剂：PBS(0.05M，pH=7)， ...

相关专题 一、简介 X-Gal在β-半乳糖苷酶的催化下水解后呈蓝色，因此常用于转基因筛选试验中，如蓝白斑筛选或β-半乳糖苷酶的原位染色检测实验。蓝白斑试验中主要根据菌落呈现的颜色即可简单的挑选出哪些是转化子。 分子式为C14H15BrClNO6，分子量为408.63，CAS Number 7240-90-6。 X–Ga ...

相关专题 成功走出第一步：DNA提取 λ噬菌体是最早使用的克隆载体，λ噬菌体的基因组是一长度约为50kb的双链DNA分子，它在宿主细胞有两种生活途径，其一是裂解生长，环状DNA分子在细胞内多次复制，合成大量噬菌体基因产物，装配成噬菌体颗粒，裂解宿主菌再进行下一次感染;其二是溶源性生长，即感染细胞内λ噬 ...

相关专题 基因组数据显示软件Cisgenome功能强大，是个免费的分析数据库。最近要做预测调控元件相关的毕业设计，需要做个Motif分析，选择了CisGenome，但是CisGenome挖掘Motif又只接受Sequence输入，于是又利用了Galaxy，在此记录下我是如何利用Galaxy和CisGenome做Motif分析的。 如果你现在 ...

相关专题 基因敲除可以说是基因组学、细胞分离培养以及转基因技术的组合。那么基因敲除的原理是什么呢？基因敲除的方法有哪些呢？在此，做个小结，以供大家学习。 一.概述： 基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术，是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA 同源重组原理，用设计的同源片 ...

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