经典遗传学实验

上个世纪 80 年代，随着基因重组技术的不断完善和小鼠胚胎干细胞（ES）体外培养技术的成熟，基于同源重组的 ES 打靶得以建立。ES 打靶基因敲除技术修饰准确、效果稳定、成功率极高，一直被认为是对模式动物进行特定基因修饰的金标准。但由于嵌合体阳性率低，且必须与工具鼠交配才能获得删除 Neo 的杂合子，使得构建周期长达 12-16 个月。20 世纪初，核酸酶基因编辑技术（TALEN、CRISPR/Cas9）出现，其周期短（6~8 个月）、无物种限制等优势迅速受到广 ...

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相关专题 转录因子结合位点(Transcription factor binding site，TFBS)是与转录因子结合的DNA片断，长度通常在5~20 bp范围内，一个转录因子往往同时调控若干个基因，而它在不同基因上的结合位点具有一定的保守性，又不完全相同。 在UCSC genEnome Browser 数据库里面Regulation调控卡ENCODE TBBS 里面有1000多套转录因子的数据。基本可以满足医学科研的需求。 标签: 广州赛诚生物 哺乳动物转录 ...

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相关专题 哺乳动物转录调控的试剂种类繁多，广州赛诚生物科技有限公司经多年科研经验积累，在阅读大量高分文献的基础上，从试剂质量、效果、价格等方面考虑，向您推荐以下试剂：

相关专题 DNA和蛋白序列序列比对 基因的识别和鉴定 基因识别的基本问题是给定基因组序列后，正确识别基因的范围和在基因组序列中的精确位置。非编码区由内含子组成(introns)，一般在形成蛋白质后被丢弃，但从实验中，如果去除非编码区，又不能完成基因的复制。显然，DNA序列作为一种遗传语言，既包含在编码区，又隐含在非编码序列中。分析非编码区 DNA序列没有一般性的指导方法。在人类基因组中，并非所有的序列均被编码，即是某种蛋白质的模 ...

相关专题 在调控位点分析中，Luciferase主要采用的方法为：片段缺失、定点突变，流程如下所示。 图1 片段缺失分析位点流程图 图2 定点突变分析位点流程图 荧光素酶报告基因检测法是转录调控研究中十分重要的实验手段。但其结果往往存在一定的误差。未解决这一问题，现普遍采用双荧光素酶报告基因检测法。在双荧光素酶报告基因测试中，将萤火虫荧光素酶作为实验报告基因，海肾荧光素酶作为对照报告基因。实验报告基因用于测试实验条件下基因的表达，而 ...

相关专题 荧光素酶(Luciferase)是自然界中能够产生生物发光的酶的统称，不同的能够控制发光的生物体用不同的荧光素酶来催化不同的发光反应。 萤光生成反应通常分为以下两步： 萤光素+ atp→萤光素化腺苷酸(luciferyladenylate)+ PPi 萤光素化腺苷酸+ O2→氧萤光素+ AMP +光 荧光素酶的基因可以被合成并插入到生物体中或转染到细胞中，将不同类型的细胞(骨髓干细胞、T细胞等)标记上(即表达)荧光素酶，就可以用高敏感度的CCD相 ...

相关专题 为取得最佳测定效果，在用单管的荧光测定仪测定时，样品和测定试剂混合后到测定前的时间应尽量控制在相同时间内，例如30秒内。 由于温度对酶反应有影响，所以测定时样品和试剂均需达到室温后再进行测定。 为保证荧光素酶检测试剂的稳定性，可以采取适当分装后避光保存的方法，以避免反复冻融和长时间暴露于室温。一般来说，如果不分装使用三次(期间冻融三次)，对测定结果无明显影响。 样品和测定试剂混合后，必须等待1-2秒，再进行测定。测定时间 ...

相关专题 Luciferase片段缺失实验 经检测发现多次裁切对荧光素酶表达量产生的影响相同(即检测组与空白组有明显差异，但各裁切的检测组间没有明显差异)，故可推断转录调控位点应位于-282~近启动子端区域。 Luciferase定点突变实验 对不同位点(生物信息学预测)分别进行点突变，LXRE2位点突变后的检测组与野生型的检测组间存在明显差异，而LXRE1位点突变后的检测组与野生型的检测组间没有明显差异，故可推断转录调控位 ...

相关专题 经生物信息学方法预测可能调控位点为LXRE1、LEXR2。 标签: 广州赛诚生物 转录调控 位点预测 作者：广州赛诚生物 点击：次

相关专题 不同细胞具有不同的表型，这是由于在这些细胞中基因的差异表达所导致的。因此，一定存在一些转录调控机制，去控制管理不同细胞各自所必需的转录方式。基因调控这一领域的研究正是迅速地揭示转录的机制。不过，我们也必须要同事意识到转录调控的无限的复杂性。 正常的细胞进行正常的转录。但由于转录是基因表达最基础的一级，所以当该转录调控出现异常时则很可能会出现不同的疾病。也正因如此，哺乳动物转录调控研究应用广泛于多种与人相关的 ...

相关专题 转录调控研究包括启动子、增强子的研究，具体内容如下。 1 启动子——基因序列中决定转录起始的部位 1)转录起始位点(TSS)的确定 a)生物信息学预测TSS ①预测转录起始位点和启动子区域 ②预测CpG岛 b)5’-RAce初步确定TSS的大概位置 5'RLM-RACE c)引物延伸、核酸酶保护或S1作图精确定位TSS 引物延伸及s1核酸酶保护 2)启动子区域(顺式作用元件)的确定 a)生物信息学预测启动子区域 b)克隆5’-flanking sequence，并连接到 ...

相关专题 目前，哺乳动物转录调控的机制主要有以下五种： 1 特异性因子：改变rna聚合酶对于特定启动子或一套启动子识别的特异性，使得RNA聚合酶更多或更少地结合到这些启动子上(如原核转录中用到的σ因子)。 2 阻遏因子：结合到DNA链上的靠近或覆盖启动子区域的那些非编码序列上，阻碍RNA聚合酶顺利进入此链，故阻碍了基因的表达。 3 通用转录因子：这些转录因子将RNA聚合酶安放至编码蛋白序列的起始位置，继而释放聚合酶以转录mRNA。 4 激活因子： ...

相关专题 在这里，我们对哺乳动物转录调控的激活方式进行讨论。以下为示意图 哺乳动物转录调控激活方式 • A factor is tissue-specific because it is synthesized only in a particular type of Cell. This is typical of factors that regulate development, such as homeodomain proteins. • The activity of a factor may be directly controlled by modif ...

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