哺乳动物转录调控研究内容与方法

相关专题

 

转录调控研究包括启动子、增强子的研究，具体内容如下。

1 启动子——基因序列 中决定转录起始的部位

1)转录起始位点(TSS)的确定

a)生物信息学 预测TSS

①预测转录起始位点和启动子区域

②预测CpG岛

b)5’-RAce 初步确定TSS的大概位置

5'RLM-RACE

c)引物延伸、核酸酶 保护或S1作图精确定位TSS

引物延伸及s1核酸酶 保护

2)启动子区域(顺式作用元件)的确定

a)生物信息 学预测启动子区域

b)克隆5’-flanking sequence，并连接到报告基因 载体中

c)缺失、突变

d)荧光素酶活性分析

e)确定转录调控区域(启动子区域)

3)转录因子(反式作用元件)结合位点的确定

a)生物信息学预测转录因子结合位点

b)实验证实转录因子结合位点：EMSA，ChIP，DNase I足迹分析

DNase I足迹分析

4)反式作用元件和顺式作用元件相互作用对基因转录的影响

a)定点突变：荧光素酶活性分析

b)过表达转录因子：测定目的基因的表达

c)干扰转录因子的表达：测定目的基因的表达

d)转基因动物

2 增强子——基因组中能增强邻近基因启动转录的序列

1)瞬时转染——Luciferase萤光素酶法

2)DNAase I hypersensitivity

3)DNAase I footprinting/mutation analysis

4)转基因动物

标签: 广州赛诚生物 哺乳动物转录调控

作者：Snail 点击： 次