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测序过程常见问题分析与解答

DNA测序样品用什么溶液溶解比较好? 答:溶解DNA测序样品时用灭菌蒸馏水溶解最好。DNA的测序反应也是Taq酶的聚合反应需要一个最佳的酶反应条件.如果DNA用缓冲液溶解后在进行了测序反应时DNA溶液中的缓冲液组份会影响测序反应的体 系条件造成Taq酶的聚合性能下降。 有很多客户在溶解DNA测序样品时使用TE Buffer。的确,TE Buffer能增加DNA样品保存期间的稳定性, 但TE Buf ...

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大片段DNA测序(>50KB)

鸟枪法测序的操作方法 1、用限制酶切下目的片段的大片段Insert DNA 并用Agarose凝胶电泳进行回收。 2、对回收的大片段DNA用物理方法 (如超声波等) 进行切断处理,然后用T4 DNA Polymerase对小片段 DNA进行末端平滑化。 3、 进行Agarose电泳,切胶回收1 kbp ~ 2 kbp的小片段DNA。然后用BcaBest DNA Polymerase在DNA的 3' ...

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流式细胞仪主要技术指标

1、流式细胞仪的分析速度: 一般流式细胞仪每秒检测1000~5000个细胞,大型机可达每秒上万个细胞。 2、流式细胞仪的荧光检测灵敏度: 一般能测出单个细胞上<600个荧光分子,两个细胞间的荧光差>5%即可区分。 3、前向角散射(FSC)光检测灵敏度: 前向角散射(FSC)反映被测细胞的大小,一般流式细胞仪能够测量到0.2μm~0.5μm。 4、流式细胞仪的分辨率: 通常用变异系数CV ...

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流式细胞仪的应用体会

流式细胞仪(flow cytometry,FCM)是集激光技术、电子技术、光电测量技术、计算机技术以及细胞荧光技术、单克隆抗体技术为一体的新型高科技仪器,具有灵敏度高、重复性好、特异性强、方法灵活、分析速度快等优点。我院自2000~2002年用美国BD公司生产的FACSC-ALIBUR流式细胞仪,结合科研医疗开展了淋巴细胞亚群(CD3、CD4、CD8、CD19、CD56)分析、白血病免疫分型、DN ...

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流式细胞仪的保养和常见故障的排除

流式细胞术(flow cytometry,FCM)自70年代中期就成为研究细胞生物学的重要技术,至今己被广泛应用于肿瘤学、免疫学、血液学、药物学等领域。FCM能对大数量的单个细胞同时进行多个物理和化学参数检测,其中包括细胞的大小、细胞内颗粒、细胞复杂性和细胞的相对荧光强度等。 我科使用美国BD公司生产的FACSC-ALIBUR流式细胞仪已有1年多,我们认为该仪器的性能稳定,操作简便,电脑软件设计较 ...

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流式细胞仪研制的技术进展

流式细胞仪(flow cytometer,PCM)是一项集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、计算机技术以及细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的新型高科技仪器。概括来说,流式细胞术就是对处在快速直线流动状态中的细胞或生物颗粒进行多参数、快速的定量分析和分选的技术。从流式细胞术的发明、改进,流式细胞仪的研制、革新,到今天在众多应用领域的拓展,每一步都是诸如生物学、生物技术、计算机科学、电子工程 ...

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流式细胞技术与流式细胞仪

摘要: 流式细胞技术在细胞定量检测方面是最先进检测技术,流式细胞仪在临床和科研领域得到广泛运用。 概述: 分析细胞学是细胞定量分析的学科,流式细胞技术(Flow Cytometer ,FCM)是分析细胞中的一个重要领域,该技术为细胞学研究手段之一,能够对细胞和细胞器及生物大分子进行高达每秒上万个染色体的分析,而且一个细胞多参数分析并可分选细胞。这种以流动的方式(相对静态方式)测量细胞与传统的用荧光 ...

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流式细胞仪在生物学中的应用

摘要: 简要论述了流式细胞仪(flow cytometry ,FCM)的工作原理,并对其在生物学基础科学研究中的应用进行阐述,包括对细胞凋亡、细胞周期、免疫细胞、细胞受体的研究应用。 流式细胞仪(flow cytometry ,FCM)研制、发展、革新和应用领域的扩展,都是由生物学、生物技术、计算机科学、电子工程学、流体力学、激光技术、分子生物学、有机化学和物理学等多个学科综合发展和应用而实现的。 ...

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流式细胞仪构成与工作原理

摘要: 流式细胞仪是分选细胞结构与功能,准确迅速选标记细胞的仪器。本文讲述流式细胞仪的主要组件,工作原理及其实际应用。 流式细胞仪(flow cytometer)是采用流式细胞术的典型仪器,它能迅速的对单个细胞及其群体的化学物质的含量与种类作出分析,对含指定化学物质的细胞进行分选。 《流式细胞仪构成与工作原理》下载 点击这里下载 ...

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C6流式细胞仪

Accuri 的C6流式细胞仪系统是一种全功能、二激光、六探测器分析流式细胞仪系统,包括:C6流式细胞仪、CFlow 软件、电脑。C6的流式细胞仪系统提供最畅销的流式细胞仪,而且价格少几倍。C6流式细胞仪系统以敏感的探测器捕获和激发前散射光和旁散射光,以及4个荧光探测器的可调光学过滤器。CFlow软件使搜集数据和分析变得简单快速。CFlow软件如此直观,让您启动并运行一个小时内得到您的Accuri ...

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流式细胞仪入门

目录 前言 第1章 综述 第2章 液流系统 第3章 散射光信号及荧光信号   3.1 散射光信号   3.2 荧光信号 第4章 光电系统   4.1 光平台   4.2 光学滤片   4.3 信号探测器   4.4 阀值 第5 章 数据分析   5.1 数据采集及显示   5.2 设门   5.3&nb ...

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流式细胞仪的技术指标与主要构造(图)

流式细胞仪主要由以下五部分构成:①流动室及液流驱动系统②激光光源及光束形成系统③光学系统④信号检测与存储、显示、分析系统⑤细胞分选系统。 一、主要技术指标 1.流式细胞仪的分析速度:一般流式细胞仪每秒检测1000~5000个细胞,大型机可达每秒上万个细胞。 2.流式细胞仪的荧光检测灵敏度:一般能测出单个细胞上<600个荧光分子,两个细胞间的荧光差>5%即可区分。 3.前向角散射(FSC)光检 ...

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FACS Analysis for TRUS patients

Specimen collection: Whole blood is collected in Vacutainer CPT (Becton-Dickinson) or 9 ml EDTA vials. Isolation of peripheral mononuclear cells: If CPT Vacutainer are used, we follow in principle the ...

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实验动物设施之空调系统简介

一般而言,所谓标准化的实验动物设施,即一能够在人道的原则下,提供动物“持恒(homeostasis)”的饲养环境,并以恰当预防医学(preventive medicine)、无公害(合乎环保与公卫考量的设备与方法),使动物试验能顺利进行的共用实验室及/或生产实验动物的房舍。藉复杂的空调系统作严谨地人工环境控制则似乎是必要的。然实验动物学相关参考文献与书籍,多仅对这个部份作概 ...

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动物房温度湿度控制系统

1、环境参数数据采集及报警: 利用飞天通用智能自动化系统进行数据采集。其特点是通用性、开放性、易学性;性价比高。 控制系统示意图见图1。由PC机、打印机、控制柜、检测仪表组成。 图1 控制系统示意图 2.系统功能: (1)数据采集与控制:温度、湿度各31个数据  共31个动物房,温度湿度需要控制。每间温湿度要求不一样。其中一层有狗房、猴房、猫房、豚鼠、家兔,二层有繁殖房、实验室若干。  ...

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常用消毒剂的分类

一、通过与菌体的蛋白质结合,使蛋白质变性、沉淀而达到抑菌或杀菌作用的有:来苏尔、乙醇、福尔马林、红汞、苯酚等。 1.来苏尔,即煤酚皂溶液(含煤酚47%~53%,其余是肥皂和水;煤酚是邻、间、对甲酚的混合物)。将来苏尔用水稀释成5%~10%的水溶液,用作病人用具、排泄物及环境消毒。 2.乙醇,俗称酒精。主要用于皮肤和医疗器械消毒。其75%的水溶液消毒作用最强。浓度过高可使菌体表层蛋白质迅速凝固而妨碍 ...

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甲醛和高锰酸钾的使用方法

1.消毒液: 甲醛和高锰酸钾。 2.灭菌原理: 灭菌(Sterilization)是指杀灭档案上所含微主物(包括霉菌、细菌、繁殖体和芽胞)的方法。消毒(Disinfections)是指杀死霉菌,病原微生物的方法。一般消毒剂在常用的浓度下,只对细菌、霉菌的繁殖体有效,对于芽胞则需要提高消毒剂的浓度和延长消毒时间。 甲醛灭菌原理:甲醛与霉菌、细菌蛋白质结合,可使之变性致死。 高锰酸钾灭菌原理:能使菌体 ...

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电泳技术简介

电泳法,是指带电荷的供试品(蛋白质、核苷酸等)在惰性支持介质(如纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等)中,于电场的作用下,向其对应的电极方向按各自的速度进行泳动,使组分分离成狭窄的区带,用适宜的检测方法记录其电泳区带图谱或计算其百分含量的方法。 电泳技术的基本原理和分类 在电场中,推动带电质点运动的力(F)等于质点所带净电荷量(Q)与电场强度(E)的乘积 ...

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凝胶电泳

以淀粉胶、琼脂或琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等作为支持介质的区带电泳法称为凝胶电泳。其中聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)普遍用于分离蛋白质及较小分子的核酸。琼脂糖凝胶孔径较大,对一般蛋白质不起分子筛作用,但适用于分离同工酶及其亚型,大分子核酸等应用较广,介绍如下: ⒈琼脂糖凝胶电泳的原理概述 琼脂糖是由琼脂 ...

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凝胶电泳操作注意事项

1.缓冲系统:在没有离子存在时,电导率最小,DNA不迁移,或迁移极慢,在高离子强度的缓冲液中,电导很高并产热,可能导致DNA变性,因此应注意缓冲液的使用是否正确。长时间高压电泳时,常更新缓冲液或在两槽间进行缓冲液的循环是可取的。 2.琼脂糖:不同厂家、不同批号的琼脂糖,其杂质含量不同,影响DNA的迁移及荧光背景的强度,应有选择地使用。 3.凝胶的制备:凝胶中所加缓冲液应与电泳槽中的相一致,溶解的凝 ...

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