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"Glassing Out" DNA Using the Geneclean Kit

实验步骤 If you are purifying DNA that is already in aqueous solution then proceed directly to step 3. If the DNA is being gel purified then begin with step 1.1.Excise DNA band from ethidium bromide-sta ...

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昆虫体内酵母类共生菌的形态观察

实验试剂 1. 样品包埋剂选用Leica CM1900 冷冻切片机配套包埋剂(OCT-compound) 2. 结晶紫,组织染色选用常规染色剂3. 二甲苯(进行组织切片的脱水和透明处理) 4. 香柏油(油镜观察用) 实验设备 1. Leica CM1900 冷冻切片机(Leica Microsystems Nussloch GmbH, German) 切片厚度范围为0~50μm ...

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Fastfilter Plasmid Maxi Kit Spin Protocol

实验步骤 Growth of bacterial culture:1. Culture volume: Inoculate 200 ml LB/ampicillin (50 ug/ml) medium placed in a 1-4 liter culture flask with E.coli carrying desired plasmid and grow at 37°C with agi ...

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酵母DNA微量制备

实验步骤 1. 酵母DNA微量制备(40ml) 1) 在125ml三角瓶中用40ml YPD培养液在30℃条件下培养细胞达最大生长量(过夜)。 2) 将上述培养物移入螺盖离心管,用医用离心机或Sorvall SS-34转头以5000r/min离心5分钟,弃去上清液。 3) 将细胞悬浮在3ml的0.9mol/L山梨醇-0.1mol/L Na2EDTA(pH7.5)溶液中。 ...

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Real Time PCR

实验步骤 1.First Step: Find your DNA concentrations. The first person to nanodrop needs to get some water TE and a 2 ul pipette tips and your DNA samples completely mixed. If you had a large pellet you ...

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电穿孔和电融合技术

实验原理 当细胞置于非常高的电场中,细胞膜就变得具有通透性,能让外界的分子扩散进细胞内,这一现象称为电穿孔。运用这一技术,许多物质,包括DNA、 RNA、蛋白质、药物、抗体和荧光探针都能载入细胞。作为一种基因转导方法,电穿孔已被广泛用于各种细胞类型,包括细菌、酵母、植物和动物细胞;而且,它还能作为注射方法(称为电注射),把各种外源物质引入活细胞。与其他常用的导入外源物质的方法相比,电穿孔具有很多 ...

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E.Z.N.A.® HP Total RNA Kit Spin Protocol Eukaryotic Cells and Tissues

实验原理 The E.Z.N.A.® HP Total RNA Kit uses the reversible binding properties of HiBind® matrix a new silica-based material. This is combined with the speed of mini-column spin technology. A specificall ...

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E.Z.N.A.TM Fast Protocol For FFPE Tissue

实验原理 E.Z.N.A.TM FFPE RNA Kit uses the reversible binding properties of HiBind® matrix a new silica-based material combined with the speed of mini-column spin technology. A specifically formulated buf ...

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RNA Isolation from Arthropods

实验试剂 1. 2-mercaptoethanol2. Absolute (96%-100%) ethanol 3. Liquid nitrogen for freezing/disrupting samples 实验设备 1. Microcentrifuge capable of 10000 x g2. Nuclease-free microfuge tubes 3. Preheat ...

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Western印迹法检测蛋白

实验原理 该技术的原理及过程主要为转移到NC等膜上的蛋白带。用其它蛋白作为封闭液,将膜上余下的其它蛋白可结合点封闭。加入与待检测目标靶蛋白有特异性的第一抗体,经免疫反应,一抗将与目标蛋白结合,再经用洗膜液洗涤后,膜上仅在靶蛋白上结合有第一抗体。再加入与第一抗体有免疫特异性的二抗,使之与一抗反应,反应后,经洗膜液洗涤,二抗就仅存在于结合靶蛋白的一抗上。因为这种二抗都为酶标抗体,所以通过酶标反应,在 ...

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脂质体介导的细胞转染实验

实验原理 外源基因进入细胞主要有四种方法:电击法、磷酸钙法和脂质体介导法和病毒介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入;磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入细胞;病毒法是利用包装了外源基因的病毒感染细胞的方法使得其进入细胞。但是由于电击法和磷酸钙法的实验条件控制较严、难度较大;病毒法的前期准备较复杂、而且可能对于细胞有较大影响 ...

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Total RNA Isolation From Laser dissected samples

实验原理 The E.Z.N.A.™ MicroElute® Total RNA Kits combine the reversible binding properties of HiBind® matrix a new silica-based material with the speed of mini-column spin technology. A specifically for ...

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地高辛对探针的标记

实验原理 带有地高辛标记的dUTP(图1)通过缺口翻译、随机翻译或PCR等反应而使探针核酸片段带有地高辛,进一步可与带有AP、CSP等各种抗地高辛抗体复合物发生免疫反应,使探针上带有AP等分钟,进一步能催化化学或发光反应。图2为各种DIG标记探针及检测类型汇总;图3为DIG标记探针的方法;图5为标记探针应用;图4为DIG标记探针的检测方法。 图1图2 图3 图4 图5 实验步 ...

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Optimization of Antibiotic Selection Using a Cytotoxicity Profile

实验试剂 1.Cell Culture Media 2.Antibiotics puromycin (P9620) or G418 (A1720) 实验设备 1.Tissue culture incubator—37 °C 5% CO2 100% relative humidity 实验材料 1.Cells- inlog growth and at 50% con ...

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Blood & Body Fluid DNA Protocol

实验试剂 Materials provided by user1. Tabletop microcentrifuge2. Sterile 1.5ml centrifuge tubes3. Waterbath4. RNase stock solution5. Absolute ethanol6. OB Protease stock solution 7. PBS Buffer 实验 ...

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SILEC: a protocol for generating and using isotopically labeled coenzyme A mass spectrometry standards

实验步骤 Generating labeled coa standards(1) Thaw frozen cells directly into the SILEC expansion medium.(2) For Hepa 1c1c7 (adherent) cells allow cells to reach confluence (3–4 d) wash two times with PBS ...

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24cm IPG胶条二维电泳

实验步骤 1. 清洗器具用品:清洗所有的干胶条套件,包括胶条槽、盖片、托盘等。用Ettan IPGphor胶条槽清洗剂(Amersham Biosciences.),并用大量去离子水冲洗,自然干燥备用。2. 第一向等电聚焦电泳 1) 加样和IPG干胶条再水化:采用样品加在再水化液中方法进行加样。24cm IPG胶条(PH3 -10Non-line )。银染蛋白质上样量为40ug-50ug。 ...

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线粒体和细胞核的制备与观察

实验原理 利用细胞核与线粒体在一定介质中的沉降速度的差异,可采取分级差速离心的方法,将细胞核与线粒体逐级分离出来(差速离心技术)。线粒体是真核细胞特有的进行能量转换的重要细胞器。将动植物组织制成匀浆,在适当的悬浮介质中差速离心法可以分离细胞线粒体。在一定的离心场中(选用离心机的一定转速),球心颗粒的沉降速度取决于它的密度、半径和悬浮介质的黏度。在一均匀的悬浮介质中离心一定时间,组织匀浆中的各种细 ...

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SQ Blood DNA Maxi Protocol for 4-10 ml whole blood

实验试剂 1. Isopropanol (100%)2. 70% ethanol3. Using different volume of Solution according blood volume as following: 实验设备 1. Centrifuge capable of 2000 x g2. Nuclease-free 15 ml microcentrifuge t ...

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质粒DNA提取技术

实验原理 质粒是基因工程中常用的载体之一。质粒是染色体外小型双链环状的DNA,大小在1~200kb之间。碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状DNA与线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离它们的。在pH值介于12.0~12.5这个狭窄的范围内,线性的DNA双螺旋结构解开而被变性,尽管在这样的条件下,共价闭合环状质粒DNA的氢键会断裂,但两条互补链彼此缠绕,仍会紧密的结合在一起。当加入 pH4.8的乙 ...

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