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传代细胞培养与观察

实验原理 传代培养是指细胞从一个培养瓶以1:2或1:2以上的比例转移,接种到另一培养瓶的培养。这种培养,第一步也是制备细胞悬液,当细胞长成致密单层时,它很容易被蛋白水解酶和EDTA)所破坏。所以—般采用胰蛋白酶和EDTA(乙二胺四乙酸盐)的混合物,做为消化液。细胞培养是一种操作繁琐而又要求十分严谨的实验技术。要使细胞能在体外长期生长,必须满足两个基本要求:一是供给细胞存活所必需的条件,如适量的水 ...

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连续梯度法纯化闭环DNA

实验原理 用含氯化铯和溴化乙锭的悬浮密度梯度离心法分离质粒和染色体 DNA 的方法,取决于线性 DNA 和闭环 DNA 结合的溴化乙锭的量的差异。许多年来,纯化大量质粒 DNA 的首选方法是 CsCl- 溴化乙锭梯度密度离心法.但由于这种方法耗时费钱,于是发展了许多其他方法,包括差异沉淀法和柱层析法.尽管如此,许多坚持传统的人仍然认为,用 CsCl- 溴化乙锭梯度密度离心法纯化的质粒 DNA 是 ...

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大鼠血清、血浆及相关液体样本中弓形虫IgG抗体含量的检测

实验试剂 1. 大鼠弓形虫IgG抗体定量检测试剂盒(ELISA)2. 蒸馏水 实验设备 1. 37℃恒温箱2. 标准规格酶标仪3. 精密移液器及一次性吸头4. 一次性试管5. 吸水纸 实验步骤 1. 准备:从冰箱取出试剂盒,室温复温平衡30分钟。2. 配液:用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。3. 加标准品和待测样本:取足够数量的酶标包被板,固定于框架上,分别设 ...

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Handling Fresh Hepatocytes in Suspension

实验试剂 Dexamethasone 10 mM in DMSO solution 1 x 250 μL (supplied in excess)Maintenance Cocktail solution 1 x 20 mL containing:2.5 mL penicillin-streptomycin 10000 U/mL5.0 mL ITS (insulin transferri ...

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CellTrace CFSE Cell Proliferation Kit

实验材料 Kit ContentsCellTrace™ CFSE (Component A) 10 vials each containing 50 μg of lyophilized powderDMSO (Component B) 1 vial containing 0.5 mL of high quality dimethylsulfoxideMaterials Needed bu ...

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紫外吸收法测定核酸浓度与纯度

实验原理 核酸分子中的碱基集团含有共轭双键,它们对紫外光有强烈的吸收。核酸的最大吸收波长在260 nm,吸收低峰在230 nm。可以利用核酸的这一特性对其浓度进行测定。在波长260 nm下,A260=1时,双链DNA的含量为50 µg/ml,单链DNA为 33 µg/ml ,RNA为 40 µg/ml,寡聚核苷酸为 20~30 µg/ml。测出核酸溶液在A260的值,即可得出浓度。根据经验数据 ...

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免疫传感器技术

实验原理 免疫传感器是应用固定有抗原或抗体的电极制造的一类生物传感器(biosensor)。创建于20世纪70年代,该免疫传感器巧妙地利用抗体与相应抗原间具有特异性识别和结合能力的原理设计而成。该传感器有两种,一是非标记光学免疫传感器,即直接用化学修饰法将抗原或抗体固定于金属电极表面,当电极上的固定化抗原与待测抗体相遇时,即于电极表面发生抗原抗体反应,因为抗体是带电荷的蛋白质,故能引起固定化抗原 ...

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体细胞克隆小鼠Oct-4相关基因的不完全再活化

实验步骤 1. UniGene 分析根据小鼠Unigene基因数据用电子分析法确定Oct4相关基因。UniGene是定时更新的从不同器官、组织获得的表达序列标签(ESTs)的基因片段集合。之前,UniGene电子分析用来确定生殖细胞中表达增加的基因。可以在ftp://ncbi.nlm.nih.gov/repository/UniGene 查找小鼠UniGene数据库。每个UniGene集合是序列 ...

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光敏生物素试剂盒杂交实验

实验试剂 硫酸葡聚糖钠盐(可不用)、聚乙烯吡赂啉酮(PVP)、聚蔗糖、牛血清白蛋白(BSA)、100mM EDTA、3MnaAC、无水乙醇、电泳缓冲液、切变性鲱鱼精DNA(100ug/ml)20×SSC溶液 氯化钠3M 预杂交液 6×SSC 柠檬酸三钠 0.3M (含100ug/ul变性鲱鱼精DNA) pH 7.0 ...

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Nuclear fractionation protocol

实验试剂 1. Buffer A 10 mM HEPES 1.5 mM MgCl2 10 mM KCl 0.5 mM DTT 0.05% NP40 (or 0.05% igepal or tergitol) pH 7.9 To prepare 250 ml stock of buffer A: HEPES: 1M = 238.3 g/L therefore 10 ...

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随机引物法标记探针

实验步骤 1.于1.5ml离心管中加入5μl H2O,2μl引物(N6),5μl DNA(0.1μg-1μg)。2.充分混匀,98°C 3分钟。3.离心1秒钟,将离心管盖上的汽化水甩下。4.加入2.5μl dNTPs(各2.5mM),3μl缓冲液,6μl H2O,1μl Klenow酶。充分混匀,置于冰上,拿到同位素室。5.加入1μl ...

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叶绿素a,b含量测定的原理及操作步骤

实验原理 根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收,利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度,即可用公式计算出提取液中各色素的含量。根据朗伯—比尔定律,某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比,即A=αCL式中:α比例常数。当溶液浓度以百分浓度为单位,液层厚度为1cm时,α为该物质的吸光系数。各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的 ...

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过碘酸-雪夫染色的原理及操作步骤

实验原理 胞浆内存在糖原或多糖类物质(如粘多糖、粘蛋白、糖蛋白、糖脂等)中的乙二醇基(CHOH-CHOH)经过碘酸(periodicacid)氧化,转变为二醛基(CHO-CHO),与雪夫(Schiff)试剂中的无色品红结合,形成紫红色染料而沉积于细胞内多糖所在处。该反应称为过碘酸-雪夫 (PAS)阳性反应,以前也称为糖原染色。 实验试剂 1. 高碘酸氧化液:HIO4·2H2O1g蒸馏水 ...

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Protocol For Isolation of Genomic DNA From Sperm

实验原理 E.Z.N.A.® Mag-Bind Forensic DNA Isolation Kits use the reversible binding properties of the Mag-Bind® paramagnetic particles to provide a fast and flexible method for isolating genomic DNA from ...

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yeast transformation

实验步骤 小剂量:1. 制作感受态。a. 在500ml锥形瓶中摇100ml 酵母菌种直到OD值达到0.4(30℃),然后分装为两个50ml离心3000g五分钟。b. 弃上清,用20mlddH2O 冲悬,离心3000g五分钟。c. 弃上清,用10ml 1XTE/LiAc冲悬,离心3000g五分钟。d. 小心弃上清,用175μl1XTE/LiAc冲悬。2. 转化a. 每个转化需要50&mu ...

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Extraction of RNA from Fibrous tissue

实验原理 The E.Z.N.A.® HP Total RNA Kit uses the reversible binding properties of HiBind® matrix a new silica-based material. This is combined with the speed of mini-column spin technology. A specificall ...

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Western blotting样品准备

实验步骤 1. Lysis buffersTo prepare samples for running on a gel cells and tissues need to be lysed to release the proteins of interest. This solubilizes the proteins so they can migrate individually thr ...

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MTT比色法实验原理、步骤及注意事项

实验原理 MTT检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性 ...

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Cell Surface Immunofluorescence Staining Protocol

实验试剂 Cell Staining Buffer Red Cell Lysis Buffer 7-AAD Viability Staining Solution TruStain FcX™ BioLegend Cat. #101319 实验步骤 1. Harvest Tissue or Cells:1) Obtain desired tissue ...

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胡萝卜根离体培养实验

实验试剂 1. MS 培养基 10 mg/L 24-D 2 mg/L 6-BA 2. 70% 乙醇3. 0.1% 升 实验设备 1. 超净工作台2. 灭菌锅3. 显微镜4. 接种器械5. 不锈钢打孔器6. 烧杯( 500ml )7. 培养皿( 9cm )8. 移液管 实验材料 市售大而新鲜的胡萝卜 实验步骤 1. 将胡萝卜用自来水冲洗干净,用刮皮刀除去表皮 ...

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