微生物学技术

实验十六 霉菌的形态观察 　　一、目的要求 　　掌握观察霉菌形态的基本方法，并观察其形态特征。 　　二、基本原理 　　霉菌菌丝较粗大，细胞易收缩变形，而且孢子很容易飞散，所以制标本时常用乳酸石炭酸棉蓝染色液。此染色液制成的霉菌标本片其特点是：(a)细胞不变形；(b)具有杀菌防腐作用，且不易干燥，能保持较长时间；(c)溶液本身呈蓝色，有一定染色效果。 　　霉菌自 ...

实验十五 酵母菌子囊孢子的观察 　　一、目的要求　　学习并掌握酵母菌子囊孢子（ascospore）的观察方法。　　二、基本原理　　酵母菌的子囊孢子生成与否及其形状，是酵母分类上的重要依据。一部分酵母菌只有当它在最适条件下，才能观察到形成的子囊孢子，不同种属的酵母菌，形成子囊孢子的条件不同。葡萄糖-醋酸盐培养基特别有利于酿酒酵母子囊孢子的形成。本实验用生长在此培养基上的酿酒酵母为材料，进行子 ...

实验十四 酵母菌的形态观察及死、活细胞的鉴别 　　一、目的要求　　1．观察酵母菌的细胞形态及出芽生殖方式。　　2．学习掌握区分酵母菌死、活细胞的染色方法。　　二、基本原理　　酵母菌是多形的、不运动的单细胞微生物，细胞核与细胞质已有明显的分化，菌体比细菌大。繁殖方式也较复杂，无性繁殖主要是出芽生殖，仅裂殖酵母属是以分裂方式繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。本实验通过用美蓝染色制成水浸片， ...

实验十三 放线菌形态的观察 　　一、目的要求 　　掌握观察放线菌形态的基本方法，并观察放线菌的形态特征。 　　二、基本原理 　　和细菌的单染色一样，放线菌也可用石炭酸复红或吕氏碱性美蓝等染料着色后，在显微镜下观察其形态。玻璃纸具有半透膜特性，其透光性与载玻片基本相同，使放线菌生长在玻璃纸琼脂平皿上，然后将长菌的玻璃纸剪取一小片，贴放在载玻片上，用显微镜即可观察到放线菌 ...

实验十二 细菌细胞壁的染色法和细胞质膜的观察 　　一、目的要求 　　1．学习掌握细菌细胞壁的染色法。 　　2．利用质壁分离法观察细菌的细胞壁和细胞质膜。 　　二、基本原理 　　细菌细胞壁很薄，革兰氏阳性菌的细胞壁为20—30nm，革兰氏阴性菌的细胞壁为10—13nm。组成细菌细胞壁的主要化学成分是肽聚糖，它与染料结合的能力差，不易着色，在细菌的染色过程中，一般情况 ...

实验十一 富尔根氏核染色法 　　一、目的要求 　　学习并掌握富尔根氏（Feulgen）核染色的原理及方法。 　　二、基本原理 　　富尔根氏核染色法是根据席夫氏（Schiff）试剂进行的反应而建立的。席夫氏试剂含有碱性复红和亚硫酸，碱性复红与亚硫酸结合后，失去醌式结构而变为无色，当DNA经酸作用后生成的醛化合物与席夫氏试剂结合后，使醌式结构恢复，合成一种带紫红色的碱性 ...

实验十 鞭毛染色法及活细菌运动性的观察 　　一、目的要求 　　1．学习并掌握细菌鞭毛染色的基本方法及观察细菌鞭毛的着生情况。 　　2．学习用压滴法和悬滴法观察细菌的运动性。 　　二、基本原理 　　鞭毛是细菌的运动“器官”，一般细菌的鞭毛都非常纤细，其直径为0．01—0．02μm，在普通光学显微镜的分辨力限度以外，故需要用特殊的鞭毛染色法，才能看到。鞭毛染色 ...

实验九 荚膜染色法 　　一、目的要求　　学习并掌握荚膜染色的基本方法。　　二、基本原理　　荚膜是包围在细菌细胞外面的一层粘液性物质，其主要成分是多糖类，不易被染色，故常用衬托染色法，即将菌体和背景着色，而把不着色且透明的荚膜衬托出来。荚膜很薄，易变形，因此，制片时一般不用热固定。　　三、器材　　圆褐固氮菌（Azotobacter chroococcum）；　　荚膜染色液，纯甲醇等。　　四、 ...

实验八 细菌芽孢染色法 　　一、目的要求 　　学习并掌握芽孢染色法。 　　二、基本原理 　　芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲合力不同的原理，用不同染料进行着色，使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别。芽孢壁厚、透性低，着色、脱色均较困难，因此，当先用一弱碱性染料，如孔雀绿（malachite green）或碱性品红（basicfuchsin）在加 ...

实验七 革兰氏染色法 　　一、目的要求 　　了解革兰氏染色的原理，学习并掌握革兰氏染色的方法。 　　二、基本原理 　　革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。它是1884年由丹麦医师Gram创立的。革兰氏染色法（Gram stain）不仅能观察到细菌的形态而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G 表示；染色反应呈红色 ...

实验六 细菌的单染色法 　　一、目的要求 　　1．学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的单染色方法及无菌操作技术。 　　2．巩固显微镜的使用方法。 　　二、基本原理 　　所谓单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。此法操作简便，适用于菌体一般形态的观察。 　　在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，所以常用碱性染料进行染色。碱 ...

Ⅳ．微生物的染色与形态结构观察 　　虽然各种类型的显微镜能够观察到微生物的各种形态结构，但一般实验室常用的是普通光学显微镜。由于细菌体积小且透明，在活体细胞内又含有大量的水分，因此，对光线的吸收和反射与水溶液相差不大。当把细菌悬浮在水滴内，放在显微镜下观察时，由于与周围背景没有显著的明暗差，难于看清它们的形状，更谈不上识别其细微结构。而经过染色，就可借助颜色的反衬作用比较清楚地看到菌体形态， ...

实验五 电子显微镜 　　一、目的要求 　　1．了解电子显微镜的工作原理。 　　2．学习并掌握制备电镜标本的方法。 　　二、基本原理 　　1．电子显微镜的分辨力和放大率 　　电子显微镜是利用电子流代替光学显微镜的光束使物体放大成像而由此得名的。发射电子流的电子源部分称为电子枪，电子枪由发射电子的“V”形钨丝及阳极板组成，在高真空中，钨丝被加热到白炽程度，其 ...

实验四 相差显微镜 　　一、目的要求 　　1．了解相差显微镜的基本原理和用途。 　　2．学习掌握相差显微镜的操作技术。 　　二、基本原理 　　暗视野显微镜可以看到活细胞的外部形态，但是看不清内部结构。相差显微镜不仅能观察活细胞的形态，而且还能看到细胞内部结构以及细胞分裂的连续过程。 　　光线通过透明物体如活细菌细胞后，由于受透明物体中密度和折射率不 ...

Ⅲ．显微镜的构造、性能和使用方法 　　由于微生物个体细小，因此我们必须用显微镜来研究它们的个体形态和细胞结构。熟悉显微镜和掌握显微镜的操作技术是研究微生物不可缺少的手段。 　　现代显微镜一般可以分为两大类，一类是光学显微镜，另一类是非光学显微镜。这两类显微镜又可根据不同的情况分成若干类型，现列表如下： 　　本部分包括普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜和电子显微镜 ...

实验二 普通光学显微镜 　　一、目的要求 　　1．熟悉普通光学显微镜的构造及各部分的功能。2．学习并掌握油镜的原理和使用方法。 　　二、显微镜的基本构造 　　显微镜由机械装置和光学系统两大部分组成（图Ⅲ-1）。 　　1．机械装置 　　镜座（base）和镜臂（arm）镜座位于显微镜底部，呈马蹄形，它支持全镜。镜臂有固定式和活动式两种，活动式的镜臂可改变角度。 ...

实验三 暗视野光学显微镜 　　一、目的要求 　　1．了解暗视野显微镜的基本原理及用途。 　　2．学习并掌握使用暗视野显微镜观察微生物样品的基本技术。 　　二、基本原理 　　生活的细菌在明视野显微镜下观察是透明的，不易看清。暗视野显微镜的原理与来自缝隙的一束强光通过暗室时，可清楚地看到其中细微灰尘的现象是一样的，即给样品照明的光不直接穿过物镜，而是由样品上反 ...

实验一 实验室环境和人体表面微生物的检查 　　一、目的要求 　　1．证明实验室环境与体表存在微生物。 　　2．比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量和类型。 　　3．体会无菌操作的重要性。 　　二、基本原理 　　平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分，当取自不同来源的样品接种于培养基上，在37℃温度下培养，1—2天内每一菌体即能通过很多次细胞分裂而进行繁 ...

实验五十一 昆虫病毒的培养 　　一、目的要求 　　1．学习用感染宿主的方式培养昆虫病毒的基本方法。 　　2．观察核型多角体的形态。 　　二、基本原理 　　昆虫病毒是以昆虫为宿主的病毒，与宿主的特异性高。研究昆虫病毒的重要目的是保护益虫和杀灭害虫。例如蚕遭到病毒的侵害会造成巨大的经济损失，因此，研究与杀灭这些病毒，对防治与控制蚕病从而达到保护蚕业生产有重要价值；另方 ...

实验十七 细菌、放线菌、酵母菌、霉菌的菌落观察和细菌菌落制片 　　一、目的要求 　　1．观察细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的代表种类的菌落形态特征。 　　2．学习细菌菌落制片的方法。 　　二、墓本原理 　　菌落形态是指某种微生物在一定的培养基上由单个菌体形成的群体形态。细菌、放线菌、酵母菌和霉菌，每一类微生物在一定培养条件下形成的菌落各具有某些相对的特征，利用 ...