微生物学技术

菌种活化：干粉标准菌株 标准贮备菌株 工作菌株；1.1 金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌标准菌株：挑取部分干粉溶解于0.9% 无菌氯化钠溶液中，划线接种于营养琼脂平板上，36℃±1℃ 培养18-24 小时。并观察菌落形态。a. 金黄色葡萄球菌：菌落凸起，圆形，不透明；b. 大肠埃希氏菌：菌落稍凸，圆形，湿润，乳白色；c. 铜绿假单胞菌：菌落扁平，圆形，边缘不整齐，光滑湿润，可产生蓝绿或黄绿色素；d. 枯草芽孢杆菌: 表面粗糙不透明，镜检菌体有芽孢。1.2 白色 ...

厌氧消化被认为是一种最重要、有效稳定的处理和回收污染的活性污泥，牲畜粪以及其他有机废水和固体废物的方法。有机物质可以通过厌氧消化过程被最大程度的转化成沼气，但是，剩余在沼渣沼液或发酵液中的矿物质和其他的中间产物比如挥发性脂肪酸却很难得到妥善处理。

土壤，是由一层层厚度各异的矿物质成分所组成大自然主体。土壤和母质层的区别表现在于形态、物理特性、化学特性以及矿物学特性等方面。由于地壳、水蒸气、大气和生物圈的相互作用，土层有别于母质层。它是矿物和有机物的混合组成部分，存在着固体，气体和液体状态。疏松的土壤微粒组合起来，形成充满间隙的土壤的形式。这些孔隙中含有溶解溶液（液体）和空气（气体），因此，土壤通常被视为有多种状态。提取土壤中微生物、动植物遗体等的DNA是在分子水 ...

jinpeng120 请教各位朋友，如何将慢病毒转染至海马神经元细胞，需要的海马神经元的细胞接种密度多少是为最佳呢？慢病毒的滴度为多少是转染率最高呢？如何控制整个的转染过程呢，而又保存最佳的细胞存活数量呢？请各位朋友，抛砖引玉，指点疑惑，借鉴经验，不胜感激，谢谢！小竹子青青 你好，请问你的问题现在解决了吗？我最近也要做慢病毒感染原代神经元的实验，所以急需这方面的信息，非常感谢啊！另外你之前咨询的问题都解决了吗？（比如：接种的 ...

66xiaogai 求教：我要构建一个逆转录病毒载体，不知道在插入外源基因（shRNA）时需不需要考虑像一般的载体表达时考虑基因错配的问题，如果加入的外源基因上带有启动子，那逆转录病毒载体上的启动子要切掉么？谢谢。破茧的蝶 楼主问题解决了吗？现在遇到同样的困惑~~shylook 最好用shRNA的vector吧比如PLKO等等不是的话 你要看载体自身带不带ATG 带的话 需要考虑不带的话 自己加上去即可本文由丁香园论坛提供，想了解更多有 ...

hellosdd 我最近正在做单负链RNA病毒（狂犬病毒）的rna提取，逆转录及目的基因的扩增，可是结果是 目的基因没有出现，引物是在比对后在保守处设计的，但是产物除了引物条带和一非特异条带（30个循环，不是很亮）外，再无其它条带，尝试提高退火温度 但是结果仍不好，合成cDNA的时候，使用的是以ATG（应该是上游引物吧）开头的引物。我不知道哪里出错了，希望能得到大家的建议。目的条带大概在1500bp附近，P出来的条带在500~7 ...

gaodong1234567 各位前辈：我刚进入实验室不久，最近有项研究需要国外某著名实验室的腺病毒做研究，不知能都索要，还是索要质粒，自己构建，哪位有经验的同道请赐教，谢谢！woxingwosu 主要还是质粒吧，其他的东西别人即时要给你，也不好寄过来呀，只有质粒最方便，滴在纸上就过来了。西厢蔷薇 好像还要个什么承诺书，需要所在学院领导签字woxingwosu 那就签呗。或者换一家看看本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意 ...

xieguozhu 在下欲构建两个含GFP的慢病毒过表达载体，但是有一个关键问题就是我构建的这两个目的基因是要导入同一个细胞的，我要表达的目的基因是miR-141, miR-200c. 要感染的细胞是MDA-MB-231， 这两种表达载体都是GFP标记的，我不知道在最后怎样判断两个基因都导入细胞了，后来我在想可不可以在同一个病毒上同时插入两个目的基因，比如miR-200c/miR-141(因为这两个基因在同一条染色体上，且靠的很近 ...

minnie_pumc 各位战友，大家好，我想请教个问题，在构建重组腺病毒载体时是不是必须先构进T载体中呢？谢谢！westernblotx 不是一定非要克隆到T载体，你也可以选择直接进行PCR产物酶切（注意引物设计两端的酶切位点选择和保护碱基），然后连接到你需要的目的骨架上。个人认为，我们用T载体主要是因为它作为中间克隆载体，相对比较容易操作，尽管想起来会觉得多了中间步骤，但是每一步都容易验证（比如克隆的片段需要测序是否 ...

xinlongrui 哪位大侠知道腺相关病毒如何纯化呀？先透析然后冻干，再用PBS溶解行吗？谢谢了zhujoker 买个试剂盒不就搞定了吗？或者参考这篇文献：HSP70腺相关病毒的制备、表达及纯化xinlongrui 谢谢zhujoker.本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

dongxiao1214 各位大虾们，我现在急需慢病毒载体和他的包装载体，谁有的可以卖给我一套吗？我研二了，老板让做这些东西，还只能自己想办法，谁能帮帮我，不胜感激！！dongxiao1214 自己先顶一下，愿意帮忙的可以加我qq 315915365dongxiao1214 对了，过表达的和RNAi的都可以，如果都有更好，不过我现在希望做的是过表达。kinguangjun 你好！我这里有clontech的慢病毒包装系统质粒，滴度可以 ...

dongxiao1214 我是研二的学生，打算构建过表达载体和RNAi载体，想用慢病毒载体，但是慢病毒载体有好多，怎么选择一种最合适的呢？而且现在也没有慢病毒载体，公司都不卖的，我想问问，有慢病毒载体系统的可否卖给我一套，不胜感激。老板让我3月份就开始做实验，但是现在还没有材料，很着急，希望各位行行好，让我怎么感谢都可以。沈玉琳 1，如果什么材料都没有的话老板还让做，说明这个老板很水，鄙视2，建议找公司做，这样很快，而且现在 ...

kakaxuan1984 寻找掌握microRNA慢病毒包装技术的科研人员合作，由于本人课题需要，需要构建microRNA慢病毒载体，因为是大鼠系统性用药，所以用量较大，您只需提供病毒包装即可，其他由我们来做，研究成果分享形式，有意者可邮件交流kakaxuan1984@126.comdujinghua 请问楼主慢病毒让公司包装的话，大鼠系统用药需要很大的病毒量，所有都让公司包装的吗？shylook dujinghua wro ...

crystalilixu 请教各位老师：关于真菌的问题，我用抗真菌药物处理后，真菌生长收到了抑制，电镜下真菌形态发生了变化，但是下一步的为了探索其可能的作用机制，从分子生物学领域可以作哪方面的工作啊？阳光海岛 这个问题的关键是你的“抗真菌药物”是什么，不是说他是什么名字什么结构，而是指它是一个化学合成新药，仿制药，还是中药提取物，又或者是其他物质。来源不同，研究的方法就不太一样。对于化学合成的新药，一般来说现在都是靶向药物 ...

genechip 我跟一个英国科学家要了腺病毒，对方答应给了，但不知道是否可以通过Fedex邮寄，海关那边会不会查，要不要申报？另外由于是我这边付费，邮寄过来大概要多少钱？genechip 有人知道吗？思路迪腺病毒 如果通过Fedex寄，那就得碰运气，海关是抽查的，抽到了，你就要官方证明等文件。另外，对方寄的时候也要官方证明，但不知对方国家是否同意邮寄这类病毒性玩意？好在腺病毒比细胞运输好，不容易死，拿来后可以立即扩增，然后重 ...

boboshining 慢病毒转染人间充质干细胞的效率是多少啊？谢谢kinguangjun 我做过用慢病毒感染人脐带血间充质干细胞和人脂肪间充质干细胞,其感染效率大概在50%～80%之间,人脐带血间充质干细胞比人脂肪间充质干细胞的感染效率要高一些.易冰 我现在也很想知道，慢病毒是不是转染有种属性质，我用构建好的慢病毒转染大鼠骨髓间充质干细胞，基本上没有多少转染成功的。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资 ...

beingconfident 最近做慢病毒感染细胞，慢病毒载体是自己包装的，含有筛选基因，marker基因，还有目的基因。第一次做筛选基因是G418，但是可见部分细胞表达marker基因，但是加药筛选不死，最后检测目的基因有表达。很奇怪。后来重做将筛选基因换成Hygromycin，感染48h小时加药，细胞死亡明显，最后形成单克隆，但是没有看到marker基因的表达，测目的基因有表达，两次结果都有些戏剧性。总结起来我的 ...

qinghuaihulu 各位大侠：真菌中是否存在miRNA?westernblotx 到目前为止，真菌中发现典型的（我是说以线虫和植物里面的为标准）miRNA的还几乎没有，上上个月nature报道了在酵母中首次发现RNAi（http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=154&id=15803565&sty=1）其他真菌中有利用RNAi来做表达调控的，但没有证据表明和报道表明这些生物中存在miRNA, ...

raker 病毒核酸中的C、G含量有什么意义？版主freecell留言:是“核酸”，不是“核算”。freecell G+C含量，是病毒的分类依据之一。raker 它对病毒的作用没有么？比如它的生化特性等等，仅仅是作为分类依据?freecell raker wrote:它对病毒的作用没有么？比如它的生化特性等等，仅仅是作为分类依据?病毒的生化特性多是由其基因组编码的蛋白决定的，例如对酸碱的稳定性、热敏感性、对有机溶剂的稳定性等等。未发现核酸 ...

发酵过程指在活细胞催化剂(微生物细胞或动物细胞)作用下，所进行的系列串联生物反应过程，以生产生物化工产品。一般包括细胞生长和产物形成两个阶段。1. 发酵过程按发酵产品分为四个主要类型：1）以获得微生物细胞为产品的过程；2） 以获得微生物酶为产品的过程；3）以获得微生物代谢产物的过程，代谢产物包括分解代谢产物和合成代谢产物，分解代谢产物是指菌体利用基质，如淀粉或葡萄糖，分解成小分子物质的过程，而合成代谢产物又可分为初级代谢产 ...