微生物学技术

一、实验目的　　1.了解细胞膜的渗透性　　2.了解各种物质进入红细胞的速度 二、小分子跨膜运输概述　　生物膜对小分子的跨膜渗透包括水、电解质和非电解质溶质。根据人工不含蛋白质的磷脂双分子层研究物质通透性质表明，只要时间足够长，任何分子都能顺浓度梯度扩散通过脂双层。人工合成的脂质体主要用来研究细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度。但不同分子通过脂双层扩散的速率差别很大，主要取决于它们在脂类和水之间 ...

1目的：建立洁净室中沉降菌的测试标准操作规程，保证药品在规定洁净级别内进行生产。2范围：洁净室的沉降菌的监测。3依据：国家标准GB/T 16294-1996。4职责：QA洁净度监测人员、微生物检验人员对本制度的实施负责。5内容5.1洁净室：对尘粒及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域。5.2洁净工作台：一种工作台或者与之类似的一个封闭围挡工作区。其特点是自身能够供给经过过滤的空气或气体，如垂直 ...

冷冻干燥菌种的转接技术 建议用下列方法恢复培养冷冻干燥保藏的菌种。 －、安瓶管开封 　　1．用浸过70％酒精的脱脂棉擦净安瓿管。 　　2．用火焰将安瓿管顶端加热。 　　3．滴无菌水至加热的安瓿管顶端使玻璃开裂。 　　4．用挫刀或镊子敲下已开裂的安瓿管的顶端。 二、菌株恢复培养 　　1．用无菌吸管，吸取0.3～0.5ml适宜的液体培养基，滴人安瓿管内，轻轻振荡，使冻于菌体溶解呈悬浮状。 　　2．取0 ...

一、大肠菌群介绍 　　大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致，其定义为：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。 　　大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在 ...

大肠杆菌(Escherichia coli)是分子遗传学实验、基因工程操作中广泛采用的一种受体菌，它的遗传背景研究的比较详细，常用做寄主进行基因扩增及外源基因的表达。一.实验目的:掌握大肠杆菌的对照培养、单菌落的分离及菌种保存方法。二.实验原理:大肠杆菌除本身的核染色体外，往往还含有质粒(Plasmid)DNA，这是一种双链闭合环状的DNA分子，大小在1Kb-200Kb左右，通常质粒 ...

中 国ACCC 中国农业微生物菌种保藏管理中心ISF 中国农业科学院土壤肥料研究所SH 上海市农业科学院食用菌研究所CACC 抗菌素菌种保藏管理中心IA 中国医学科学院抗菌素研究所SIA 四川抗菌素工业研究所CGMCC 普通微生物菌种保藏管理中心AS 中国科学院微生物研究所AS-IV 中国科学院武汉病毒研究所CFCC 林业微生物菌种保藏管理中心CAF 中国林业科学院菌种保藏管理中心CICC ...

1．本次实验的目的和要求（1）观察家禽巴氏杆菌病的临诊表现和病理解剖变化 （2）掌握禽巴氏杆菌病的微生物学诊断方法2．实验内容或原理根据典型症状和病变，以及在显微镜下检查组织涂片发现的两极染色的杆菌，可初步诊断本病。但确诊应依靠病原分离鉴定，病原分离鉴定原理为革兰氏染色法。3．需用的仪器或试剂等动物：鸡、小白鼠器材：外科镊子、外科剪、灭菌纱布、载玻片、糖发酵管等。药品：草酸铵结晶紫、革兰氏碘、 ...

【用途】显色基质鲎试剂 ( Chromogenic End-point Tachypleus Amebocyte Lysate CE TAL )用于体外细菌内毒素的定量检测，禁止以任何途径进入机体。 【原理】鲎试剂为鲎科动物东方鲎的血液变形细胞溶解物的冷冻干燥品鲎试剂中含有Ｃ因子、Ｂ因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。在适宜的条件下（温度，pH值及无干扰物质），细菌内毒素激活C 因子，引起一系列酶促 ...

(一)无菌操作前的准备工作 培养材料接种时的无菌操作过程除上述各项消毒灭菌操作外，还需完成以下无菌操作步骤，从而获得接种的无菌培养材料。 工作人员无菌操作前需用肥皂刷洗双手及手臂，并用流水冲净，并对手臂消毒后穿戴好灭菌工作服、工作帽和口罩，更换拖鞋，才能进入无菌操作区。如进入层流操作室进行实验操作，应完成缓冲准备区内的淋浴、一次更换灭菌衣帽、拖鞋；手臂消毒、二次更换灭菌防护衣帽、手套、拖鞋等； ...

严格的消毒灭菌对细胞与胚胎工程研究与应用工作极为重要，直接影响着整个实验能否顺利进行。(一)消毒灭菌方法目前常用的消毒灭菌方法多采用物理方法(如干热灭菌法、湿热灭菌法、过滤除菌法、射线杀菌法等)和化学方法（消毒剂、抗生素）两大类。1．干热灭菌法是利用恒温干燥箱内120 ºC～150 ºC的高热，并保持90～120分钟，杀死细菌和芽孢，达到灭菌目的的一种方法。主要适用于不便在压力 ...

(一)粪大肠菌群与大肠菌群的关系 根据国家颁布的食品卫生微生物检验标准方法(GB4789．3—94)，粪大肠菌群(Fae—cal coliform)系指一群能在44 ℃24 h内发酵乳糖产酸产气和利用色氨酸产生靛基质，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。表5—3中的大肠艾希氏菌I型即属粪大肠菌群。 粪大肠菌群的唯一来源是粪便，因此，唯有粪大肠菌群是粪便污 ...

(一)大肠菌群的定义及范围 根据国家1994年颁布的食品卫生检验方法微生物学部分，大肠菌群(coliform bacteria)系指一群在37 ℃、24 h能发酵乳糖，产酸、产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。 大肠菌群主要是由肠杆菌科中四个菌属内的一些细菌所组成，即艾希氏菌届、拘橼酸杆菌属、克雷伯氏菌属及肠杆菌属，其生化特性分类见表5-4。 由上表可以看出，大肠菌群中大肠艾希氏 ...

标准平板培养计数法虽是国家制定的菌落总数测定方法，在一定程度上能反映食品的卫生质量，但是对一些食品却不能做出准确的评价，这是因为细菌的适应生长的温度有高温、中温和低温之分，所需的pH值和营养条件也不尽相同，并且和培养时间也有关系。例如，引起新鲜鱼类、贝类食品的新鲜度降低以至于腐败变质，起主要作用的细菌类群是低温细菌，为了调查这类食品新鲜度的状况，就必须采取低温培养72h。又如，冰冻鲜鱼、贝类作为食 ...

食品中菌落总数的测定，目的在于了解食品在生产中，从原料加工到成品包装受外界污染的情况；也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，确定食品的保存期，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。 食品有可能被多种类群的微生物所污染，每种细菌都有它一定的生理特性，培养时应用不同的营养条件及其生理条件(如温度、培养时间、PH值、需氧性质等)去满足其要求，才能分别将各种细菌培养出来。但在实际工作中，一般 ...

微生物的家族 最早将生物界分为两界系统，包括动物界和植物界。以后相继分为三界系统，即动物界、植物界和原生生物界。四界系统，即动物界、植物界和原生生物界（或真菌界）和原核生物界。五界系统，即动物界、植物界、真菌界、原生生物界和原核生物界。 植物与其它生物的区别主要是：植物含有叶绿素，可进行光合作用，具有细胞壁，而且是营固着生活。植物界通常划分为七个大类群，即藻类、菌类、地衣、苔藓、蕨 ...

一、基本原理 微生物具有容易变异的特性，因此，在保藏过程中，必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状态，才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。 低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素，所以，菌种保藏方法虽多，但都是根据这三个因素而设计的。 二、保藏方法大致可分为以下几种： 1. 传代培养保藏法 又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养 ...

一、实验原理 许多微生物在其生命活动过程中能产生某种特殊的代谢产物，具有选择性地抑制或杀死其他微生物的作用，例如抗生素。不同抗生素的抗菌谱是不同的，某些抗生素只对少数细菌有抗菌作用，例如青霉素一般只对革兰氏阳性菌有抗菌作用，多粘菌素只对革兰氏阴性菌有作用，这类抗生素称为窄谱抗生素；而另一些抗生素则对多种细菌有作用，例如四环素、土霉素对许多革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都有作用，这类抗生素称为广谱抗生 ...

一、实验原理 高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，其原因有三：一是湿热中细菌菌体吸收 ...

带有水疱性口炎病毒（vesicularstomatitisvirusG，VSV-G）蛋白的假型逆转录病毒载体已被证明可将基因高效递送到各种细胞中。其效率受相对细胞的生长速度以及细胞膜上的磷脂酰丝氨酸的水平影响。 一、材料与试剂 1. DMEM（GIBCO，11995-065） 2. 胎牛血清FBS（GEMBIO900-108） 3. 青霉素/ ...

一、材料和试剂 1. Hairpin-pLKO.1vector（OpenBiosystems） 2. Packagingvectors:第二代包装质粒包含gagpol和rev基因（pCMV-dR8.91或pCMV-dR8.74psPAX2）和包被质粒（pMD2.G）（Addgene） 3. 脂质体2000（Invitrogen） & ...