实验目的:掌握培养基的配制原则与方法; 掌握划线分离纯化微生物的原理与方法 熟悉手提式高压灭菌器的使用方法和注意事项; 实验材料:器材:试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅等。 试剂:牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂等 实验原理: 培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素、能源和水。根 ...
分子生物学技术的应用使肠道微生态学的研究取得了突破性的发展。目前研究最多的是16S rRNA。近几年来国外学者采用不同的分子生物学方法对细菌的16SrRNA进行研究,得到了广泛的细菌16SrRNA序列库。使用该方法可以检测肠道中常规方法不能培养或生长缓慢的细菌。rRNA分子在生物体中普遍存在,生物细胞rRNA分子的一级结构中既具有保守的片段,又具有变化的碱基序列。在生物进化的漫长过程中rRNA分子 ...
材料、设备及试剂 一、材料种子培养液一、设备 1. 7L发酵罐2. 5ml离心管3. 分光光度计三、试剂100mmol/L IPTG贮存液1mg/mL卡那霉素(Km)贮存液操作步骤1.接上pH电极的插头 接通底部冷却水管和空气出口处的冷凝器上的冷却水管 将各硅酮管置于相应的蠕动泵上。2.把搅拌马达置于搅抖联动装置上。3.把光标调到“Temperature”档 设定温度为30℃。4.校正DO电极的满 ...
材料、设备及试剂 一、材料1. 可诱导表达目的蛋白的重组大肠杆菌BL21二、设备 1. 超净工作台2. 恒温震荡培养箱3. 250mL、500mL三角瓶4. 7L发酵罐5. 分光光度计三、试剂1. 胰蛋白胨(Tryptone)2. 酵母抽提物(Yeast extract)3. 氯化钠(NaCl)4. 磷酸氢二钠(Na2HPO4?12H2O)5. 葡萄糖(glucose)6. 卡那霉素(Km)7. ...
材料、设备及试剂一、材料取样的5ml发酵物二、设备5ml管离心机25ml磨砂口刻度试管电磁炉三、试剂35-二硝基水杨酸溶液:6.5g 35-二硝基水杨酸溶于少量水中,移入1000ml容量瓶中,加入2mol/L氢氧化钠溶液325ml,再加入45g丙酮,定容到1000ml。操作步骤1. 细胞干重的测定发酵过程中收集的样品,4000r/min离心10min(上清转移至干净的试管中),加入5 mL去离子水 ...
细菌超声破碎的小总结细菌工程菌胞内表达主要分为两种形式,一种是在强启动子条件下的高效表达,由于蛋白的过度表达,使蛋白不能及时有效折叠而发生无规则卷曲,以固体颗粒的形式堆积于胞间质中,这就是所说的包涵体,另外一种是间质内的可溶性表达,即可以发生正常折叠,具有生物活性。一般情况下,细菌只要被正常破壁就可以通过离心的形式将包涵体和可溶性表达的蛋白分离开。超声破碎的条件一般是300w,10s/10s,20 ...
一、消毒与灭菌的概念 在延期界中,微生物无处不有,无孔不入,如制种所用的原料、水、工具、设备、操作的双手和衣着以及空间,都有大量的微生物存在。因此要分离和培养食用菌纯种,首先必须将培养基进行灭菌达到灭菌状态,并对生产过程的各个环节以及环境也必须进行消毒,昼减少其它微生物的存活而造成生产的污染,因此消毒灭菌是菌种生产过程中必须掌握的最主要关键技术之一。 (一)消毒 具有杀死致病微生物的作用或方法 ...
放线菌属于原核生物系统进化树上的(G+C)摩尔百分含量(mol%)高的革兰氏阳性菌(Eubacteria)分枝类群,它虽然具有原核生物特有的分子生物学特性,但在其不同类群中,细胞壁的化学组分变化很大。在做大肠杆菌超声时,采用的是400W,破碎5s停5s的方法,效果不错,但是用在链霉菌上,由于细胞壁组成差异一般没什么效果。 链霉菌(放线菌)超声破碎前处理一般是配置成一定浓度的菌悬液。 ...
【摘要】 目的:对黄连上清丸微生物限度检查方法进行方法学验证。方法:采用平皿记数法,分组分别使用5种实验菌验证。试验组取供试液加菌液注入培养基中培养。菌液组分别取各实验菌液注入培养基中培养。稀释剂对照组取稀释剂加菌液注入培养基中培养。供试品对照组取供试液注入培养基中培养。通过3次独立的平行试验,分别计算各试验菌每次试验的回收率。采用观察大肠埃希菌、大肠菌群与阴性金黄色葡萄球菌在相同环境下的培养来验 ...
使用牛肉膏蛋白胨培养基 组成成分:牛肉膏 3g蛋白胨 10gNacl 5g琼脂 15~20g水1000mLPH7.4~7.6。 具体配置步骤: 1.称药品 按实际用量计算后按配方称取各种药品放入大烧杯中.牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量用热水溶解后倒入大烧杯;也可放在称量纸上称量随后放入热水中牛肉膏使与称量纸分离立即取出纸片.蛋白胨极易吸潮故称量时要迅速. 2.加热溶解 在烧杯中加入少于所需要的水 ...
一、常用培养基1、LB培养基将下列组分溶解在0.9L水中:蛋白胨10g酵母提取物5g氯化钠10g如果需要用1NNaOH(~1ml)调整pH至7.0,再补足水至1L。注:琼脂平板需添加琼脂粉12g/L上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。2、SOB培养基将下列组分溶解在0.9L水中:蛋白胨20g酵母提取物5g氯化钠0.5g1mol/L氯化钾2.5ml用水补足体积到1L。分成100ml的小份,高压灭菌。培养 ...
1、大肠菌群是指一群好氧及兼性厌氧在37℃、24h能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽孢杆菌它主要来源于人畜粪便通常可作为水体粪便污染的指标菌 2、大肠菌群是指37℃生长时能发酵乳糖在24h内产酸产气的革兰阴性无芽孢杆菌除包括大肠埃希氏杆菌属外还包括肠杆菌科的肠杆菌属、枸椽酸菌属、克雷伯菌属 3、大肠菌群是指一群能在36℃24h内发酵乳糖产酸产气需氧和兼性厌氧的革兰阴性无芽胞杆菌. ...
大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要来于人畜粪便故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。 食品中大肠菌群数系以100mL(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。 1 设备和材料 1.1 温箱:36±1℃。 1.2 冰箱:0~4℃。 1.3 恒温水浴 :44.5±0.5℃。 1.4 天平。 1.5 显微镜。 1 ...
大肠菌群是一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌,该菌主要来源于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。食品中的大肠菌群数系以100ml(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。 2.仪器设备与器具: 2.1 恒温培养箱:36±1℃。 2.2 1000ml三角烧瓶、1ml、10ml移液管。 2.3 接种针。 2.4 显微镜 ...
病原体酵母“白念珠菌”过去曾被认为是严格无性生殖的,但现在人们知道,这种生物有一个秘密交配循环。交配通常涉及a-细胞类型和alpha-细胞类型的融合,与相关酵母“酿酒酵母”中所见的类似。现在,另外一种新颖的有性生殖模式已在“白念珠菌”中被发现:在特定情况下,即在没有为一种分泌出的蛋白酶编码的BAR1基因存在的情况下,高效同性交配可在a-型细胞之间进行。“白念珠菌”的同性交配与相关真菌病原体“新型隐 ...
Abiotrophia adjacens 毗邻贫养菌 Abiotrophia defectiva 软弱贫养菌 Achromobacter spp 无色杆菌属某些种 Acinetobacter /Pseudomonas spp 不动杆菌/假单胞菌属某些种 Acinetobacter baumannii 鲍氏不动杆菌 Acinetobacter calcoaceticus 醋酸钙不动杆菌Acineto ...
基本原理 微生物具有容易变异的特性,因此,在保藏过程中,必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状态,才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。 低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素,所以,菌种保藏方法虽多,但都是根据这三个因素而设计的。 保藏方法大致可分为以下几种:1.传代培养保藏法 又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等(后者作保藏厌氧细菌用),培养后于4 ...
加拿大西安大略大学的研究人员发现金色葡萄球菌具有自我控制毒素机制,这有助于人类更好地了解该超级细菌的自我演化进程,从而开发出新的抗生素。相关研究成果发表在5月24日《自然·医学》网络版上。 金色葡萄球菌是医院交叉感染的主要原因,也是普通人群中的第二大常见感染源。在北美,每年有超过50万人因此类感染入院,所消耗的医疗费用高达60多亿美元。金色葡萄球菌中含有的致命超级抗原会引起免疫系统的大规模有害 ...
Nomenclature & AbbreviationsA listed gene name means that gene carries a loss of function mutation a Δ preceding a gene name means the gene is deleted. If a gene is not listed it is not known to ...
AG1endA1 recA1 gyrA96 thi-1 relA1 glnV44 hsdR17(rK- mK+)AB1157thr-1 araC14 leuB6(Am) Δ(gpt-proA)62 lacY1 tsx-33 qsr'-0 glnV44(AS) galK2(Oc) LAM- Rac-0 hisG4(Oc) rfbC1 mgl-51 rpoS396(Am) rpsL31(s ...