细胞技术

timeanddoctor 凌晨6时抽取病人静脉血，EDTA抗凝，4摄氏度保存，3小时后常温离心，转速4000转5分钟，打算做流式细胞术。看看还能用么，谢谢！希望能碰到有解释一下的战友（最好从最基础的开始），谢谢了！timeanddoctor 血浆是放在多少度保存？juan850920 颠倒混匀后还是可以的，标本放在4度大概两三天还能测流式，但最好不要离心yugicheung 看上去溶血挺嚴重的～本文由丁香园论坛提供，想了解更多 ...

iternol 怎么鉴定肿瘤耐药细胞株啊？求各位给点方法。yzg831 相关报道的文献是关键1. 分子水平：WB,qpcr鉴定相关报道的耐药marker2. 表型：直接用报道的药物剂量处理细胞，看其与对照非耐药株的敏感性反应，有没有不同涛声依旧神游天下 你有肿瘤耐药株么？测IC50啊，与亲本株进行比较本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongc ...

verarzhch 因实验急用，求一点质粒，检验细胞是否发生自噬。RFP-LC3或myc-LC3。谢谢！本人在上海，可购可换。bzy0222 我有GFP-LC3。yzg831 我们实验室也有的喜龙 bzy0222 wrote:我有GFP-LC3。请问您的质粒是购自哪里的，能不能用来转染RAW264.7细胞。bzy0222 我不知道呢，来自addgene06lzj 同求rfp-lc3质粒！gregoryhjk 呃，质粒这个东西还是牵涉到知识产权的。EG ...

小红赛 我目前在做药物靶向治疗肿瘤的课题，想在肿瘤细胞水平上以P53—MDM2为靶点，研究阻断MDM2或阻止P53水解时的信号变化及对细胞生长的影响，但目前不知道在P53—MDM2这个靶点上，有什么好的药物或者抑制剂，能用于细胞水平研究的，谢谢selleckchem01 在这个靶点下面两个抑制剂都可以用于细胞试验~Nutlin-3Nutlin-3 is a MDM-2 antagonist with an IC50 of 90 nM. It induces the exp ...

veritassea 各位大侠大家好，我想用腺病毒载体基因体内转染小鼠的DC细胞和T细胞，但是有人说这些免疫细胞体内转染的效率非常低，具体是多少也不知道。请问究竟转染效率低于多少就不能应用于实验呢？如果这样不可行的话，还有其他的办法吗？谢谢各位指导！david_xmu 滴度整高点，大于10的12次方VP。veritassea 好的，谢谢！我会试试看。万胖宝宝 楼主好，我也在做这方面的实验，请问你现在做的怎么样了，可否交流一下！万胖 ...

kfh2008 求助，请问，微量加样枪量程那里的三个数字不在同一个直线上，总是对不齐，怎么样才能调回正常。谢谢。dlzhangyu 要看你的牌子是什么，一般都附有一个小的塑料扳手用来调整。Eppendorf和Gilson的好像没有，他们的枪直接送修即可，他们有这项服务的。sakingoow 请问德国eppendorf如何送修呢，怎么找不到联系方式啊kfh2008 dlzhangyu wrote:要看你的牌子是什么，一般都附有一个小 ...

jiaoyang1978 蛋白质中有6个半胱氨酸，随机形成3个二硫键的方式有多少种？selleckchem01 这个不能用概率论来算的吧~jiaoyang1978 不是作实验什么的，是课后题，答案是30，不知道怎么算的，故求解法。dlzhangyu 就是用排列组合算的嘛，二硫键的形成需要两个半胱氨酸的残基上的硫原子，实际上类似这样，你画一个圆圈，上面有六个点，问连成三条线的方法有几种。那么你随便选一个点，连接另外一个点，有5种方 ...

liteng1117 最近才开始做磷酸化的Wb，选择抗体的时候发现，不同的磷酸化位点有不同的抗体，必须要找到刺激因素与磷酸化蛋白的位点吗？这个是特异性的吗dlzhangyu 一般是从文献里找，看别人选什么磷酸化的抗体就用什么。也可以直接看抗体的说明书。liteng1117 哦，谢谢大侠，还有个小问题，那个磷酸化的Wb，提蛋白的时候都必须要加磷酸酶抑制剂吗？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实 ...

zhao7253 我想在肺组织做药物抑制平滑肌细胞增殖的细胞周期检测，药物作用于微管导致细胞复制停止于G0/G1和G2/M期，怎么选择周期蛋白呢？此药物能稳定已聚合的微管和增强微管的装配，因此导致细胞复制大部分在G0/G1 和 G2/M期受到抑制，急！！！！！！！！！！！！！！谢谢zhao7253 要能做WB和PCR的，谢谢！！！！！zhao7253 谢了 我再研究下本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以 ...

pljj2046 各位高手，小弟想根据基因来查询其所对应的microRNA,请问用什么工具啊？TargetScan用不成了吧？**赐教~~~pljj2046 大家元宵吃完了给我讲讲啊~~~pljj2046 高手们快出现啊~~~帮帮忙啊本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

konglingrufeng 之前实验设计A组 小鼠成骨前体细胞（MC3T3-E1)+阳性诱导剂+培养基B组 小鼠成骨前体细胞（MC3T3-E1)+实验诱导剂+培养基C组 小鼠成骨前体细胞（MC3T3-E1)+阳性诱导剂+实验诱导剂+培养基D组 小鼠成骨前体细胞（MC3T3-E1)+培养基诱导相同天数后在免疫荧光结合共聚焦显微镜技术下，半定量测定OPG/RANKL表达，差异有统计学意义问题1.接下来，能选择一条通路，加阻断剂，然后还是用免疫荧 ...

yanjing2001 我用药物处理细胞后，流式检测细胞周期，G1期增加，S期减少，G2基本没有什么变化问题一：这是说明药物把细胞阻滞在G1期吗？问题二：把细胞阻滞在G1期与G1/S期阻滞是相同的意思吗？问题三：想进一步通过western blot 检测cyclin确定G1期阻滞，应该检测cyclin d,还是cyclin d1呢，为什么请大家帮忙！sunzhihong490 1.这的看你的细胞组织在G1起的百分比了，随着药物浓度的增加 ...

wzmclf 各位，谁有NF-kB参于凋亡途径这方面的图，急用。谢谢有的话能给我一份吗chenyumei_ttkj Nuclear factor kB (NF-kB) is a nuclear transcription factor that regulates expression of a large number of genes that are critical for the regulation of apoptosis, viral replication, tumorigenesis, inflammatio ...

lesenhower 想到一个问题：体外切断了正常的血供，器官的营养交换取决于简单的灌流。对于血管有畸形的器官，体内会因血供不足发育异常；如果将该器官放在体外培养，由于不依赖血管了，而直接由培养基灌流提供营养，是否就不会存在“血供不足”的问题了，所以反而可能发育正常了？换个说法，对于体外培养的器官，其内部血管是否存在，正常与否还有区别吗？有没有人能给这个问题以确切的答案？谢谢！孤单走着 版主太小气，2叮当，过年啦！整个50叮当。 ...

wliangl 求助各位达人，谁能帮忙分析一下这个问题：使用mCherry质粒（红色荧光质粒）在24孔板转染血管内皮细胞。三天后使用Nikon的荧光显微镜，Texas Red滤镜系统观察：阴性对照（未进行转染，直接培养）和转染细胞同时出现红色荧光，强度相当，转染组全部细胞都出现红色荧光，对照组部分细胞出现，部分细胞较弱，目测感觉全都不像红色荧光表达。问题排除：1. 使用其他滤镜系统没有荧光（GFP，DAPI，CY5）2. 孔板其他孔和 ...

nedvedtnt 请问各位高手，有没有构建过表达磷酸化ERK1/2的质粒？因为我所要验证的通路是对ERK1/2磷酸化的抑制作用，必须要一个能够过表达磷酸化ERK1/2的质粒进行干预，请问能否构建这样的质粒？liubingood 表达磷酸化ERK1/2的质粒倒是没听说过，但是ERK1/2的质粒应该是有的。我们曾经构建过akt的强制表达质粒。为何要表达呢？可以采用一定的刺激因子使磷酸化ERK1/2表达升高，再用你的因素处理 ...

wltxj 求助：为什么转膜后会曝出GST的条带来，请高手指教! 多谢xindu19881988 是不是本身应该是融合蛋白的，但是会有GST单体存在？我也是这样，不知道为什么。xinyinhancidian 如果是这张胶上GST及其融合蛋白进行转膜，Western blot肯定会有非特异性条带，因为上样量太大了。做GSTpull down之前有必要对自己使用的GST融合蛋白的量做一个定量。纯化GST融合蛋白时，有些容易降解的蛋白质会 ...

zhuzhu007 请问在做细胞免疫荧光时，用Tween20打孔，也就是做细胞通透的时候，浓度是多少？rongjiansu 这个要靠实验去摸索，一般用0.1% 的浓度处理5－10分钟不等。做微管最多可以用到10%。关于如何优化，Nature protocol上面有一篇文章，专门讲免疫荧光实验条件的优化zhuzhu007 rongjiansu wrote:这个要靠实验去摸索，一般用0.1% 的浓度处理5－10分钟不等。做微管最多可以用到10%。关 ...

新手上路多包涵 在网上查了一些资料看，但还是不大明白，请教高手们提供点资料学习学习。另外这个东西，现在研究的热么?呵呵。谢谢rongjiansu 對話的英文為cross talk，指的是不同信號通路間的相互作用，通常是關鍵的調控分子特別是Kinase之間的相互作用，一直是細胞生物學研究的熱點問題。另外還有convergence和disperse，是信號通路三大特性。liubingood rongjiansu wrote:對話的英 ...

狼伟人坯子 由于课题需要，需要做乳腺癌方面的通路研究，思路问题想和大家探讨一下，希望大家多多指正：1. 某个细胞因子（暂且定义为A）的siRNA干扰48h后，提RNA和Pr，检测细胞膜上某个蛋白（暂且定义为B）的表达水平变化（前期实验结果表明，RNA水平下调，蛋白水平还未做）2. A siRNA 干扰48小时后 提蛋白 做PI3K/Akt，NF-kB的总蛋白和磷酸化水平的WB3. A siRNA 干扰48小时后，NF-kB与蛋白B启动子的双荧光素梅报告系统或 ...