细胞技术

器材与试剂 干粉型培养基、胰蛋白酶，青霉素、链霉素. 纯净水系统、电子天平、PH计、磁力搅拌器等 具体步骤 1. 水： 细胞培养用水必须非常纯净，不含有离子和其他的杂质。需要用新鲜的双蒸水、三蒸水或纯净水. 2. PBS (也可用于其它BSS，如：Hanks，D-Hanks液的配制)： 主要用于免疫组化染色时组织或细胞的漂洗 溶解定容：将药品（NaCl 8.0g，KCl 0.2g，Na2HP ...

体外培养的细胞直接生活在培养基中，因此培养基应能满足细胞对营养成分、促生长因子、激素、渗透压、pH等诸多方面的要求。 营养成分 1. 氨基酸：所有细胞都需要12种必须氨基酸：缬、亮、异亮、苏、赖、色、苯丙、蛋、组、酪、精、胱氨酸。 2. 单糖：六碳糖是主要能源，也是合成某些氨基酸、脂肪、核酸的原料。细胞对葡萄糖的吸收能力最高，半乳糖最低。 体外培养动物细胞时，几乎所有的培养基或培养液中都以葡萄糖 ...

用无血清培养基把细胞悬液稀释到200－2000个/毫升，在0.1毫升的细胞中加入0.1毫升的0.4％的台盼兰溶液。 轻轻混匀，数分钟后，用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰，因而染成蓝色的细胞是死细胞。 ...

培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养，各种目的无血清培养的首选是AIM V培养基（SFM）。在开始进行新的细胞培养时，可以参考下表所列的条件： 细胞系 细胞类型 种 组织 推荐使用的培养基 293 成纤维细胞 人 胚胎肾 MEM 10% 热灭活马血清 3T6 成纤维细 ...

1. 冷冻管应如何解冻？ 取出冷冻管后， 须立即放入37 ℃水槽中快速解冻， 轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化， 并注意水面不可超过冷冻管盖沿， 否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时， 必须注意安全， 预防冷冻管之爆裂。 2. 细胞冷冻管解冻培养时， 是否应马上去除DMSO？ 除少数特别注明对DMSO 敏感之细胞外， 绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞）， 在解冻之后， 应直接放入含 ...

This protocol describes a method for the transformation of lymphoblasts by Epstein-Barr Virus (EBV). Cells may be isolated from whole blood or taken from cryopreserved non-immortalized stocks (please ...

一、 试剂 1、 淋巴细胞分离液：避光4度保存，用前在37度水浴中加温。整个分离过程中，温度应控制在8-28度，温度过高或过低均影响分离质量。 2、 全培养基（用前配置）：RPM1640培养基，内含20%胎牛血清（Gibco）{56℃灭活30分钟}，1.6-1.8% 1M的HEPES，1.2% 0.2mol/L谷氨酰胺，1%青霉素和链霉素。 3、 环 ...

本人具有数年的细胞培养经验，期间经历了无数次的失败和成功，回想起来有苦也有甜，现在把中国疾病预防控制中心和我自己的经验结合起来，制作成MDCK细胞培养SOP，欢迎大家参阅： 一、目的 MDCK细胞培养是分离流感病毒及相关研究实验的基本技术。疾控中心的所有技术人员，必须按照本文件相关的操作规程进行操作。 二、适用范围 适用于疾控中心所有技术人员 。 三、程序 （一）生物安全要求 实验室生物安全级别： ...

大鼠心肌细胞比乳鼠心肌难养，用无血清培养基，呈杆状，横纹清楚，在培养基里细胞不搏动。 大鼠心肌细胞分离一般是采用二型胶原酶分离，浓度为1mg/ml（用无钙台氏液配制），同时酶液里加入牛磺酸，BSA。一般采用Langendorff灌流的方法，大鼠开胸后，迅速取出心脏，放入冰的台氏液中，找到主动脉后，挂上Langendorff装置，衡流泵灌入无钙台氏液（37度），开始心脏会搏动几下，这样把心脏中的淤血 ...

Percoll密度梯度离心分离法： 1、Pcrcoll混悬液的配制：Percoll 90mlHBSS 9ml HEPES(0.25mol/l)1ml(PH 7.3)HCL(1mol/l)0.4ml 调节至PH7.4 2、制备Percoll密度梯度管 密度 Percoll/HBSS(ml/ml) 1.070 24:20 1.079 27:15.9 1.088 23:10 3、加分层液的顺序：底层先加 ...

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Handbook of Industrial Cell Culture: Mammalian Microbial and Plant CellsHumana Press| 1588290328 | Edition - 2002-12-06 | PDF | 546 pages| 3.9 MB A diverse team of researchers technologists and engin ...

一、取得完全无血液残留的肺脏： 实验前j将大鼠全身血液放净，取得完全无血液残留的肺脏 二、消化肺组织： 常用于细胞消化的酶有胰蛋白酶、弹性蛋白酶、胶原酶。胰蛋白酶是最早用于消化、分离上皮细胞的酶，现在一般用损伤性小的弹性蛋白酶来替代胰蛋白酶。但这种酶却有活性不稳定，有效作用时间短暂，容易自我降解等问题。Dobbs L G等认为弹性蛋白酶能更有选择性的消化分离上皮细胞。胰蛋白酶消化没有选择性，会 ...

开始时，我的细胞用胶原酶消化5h接种玻璃培养瓶，1.5h后吸出细胞液至另一培养瓶培养以去除成纤维细胞，原瓶内成纤维细胞加培养液继续培养，24h观察，发现转瓶后心肌细胞未贴壁，培养液中为大量细胞碎片状东西以及未贴壁的细胞悬浮，仅见极少量的成纤维细胞贴壁生长，接种24孔板也是这样(24孔板为新，非重复使用)，接连几次都是这样，很是郁闷。而原瓶内分离的成纤维细胞生长良好，且可见少量心肌细胞贴壁成团生长， ...

问：我的HeLa的细胞，转了H2BGFP的，已经传了很多代了，慢慢的像是伸出触角一样，起初不是很明显，现在变成这样了。可能是因为什么原因呢？请看图片： 答：Hela细胞在没有加胰岛素的培养基培养下容易形态变化。建议： 1、可能由于血清浓度不够高，导致细胞营养缺失或不良，建议加大血清用量，一般为10%FBS。 2、肿瘤细胞传代次数过多容易影响细胞生长状态细胞容易分枝生长建议传代时控制细胞生长密度而且 ...

1、舒林酸和尼美舒利的溶解方法的问题： 问：最近在做试验时发现舒林酸和尼美舒利两种药物很难溶解，加入DMSO后可以溶解，但是再加入1640培养液稀释时又出现结晶，而且很难溶解。有什么好的办法吗？ 答：(1)可以先把所需药母液加如一个小安剖瓶，再加入培养基，用枪多吹打几分钟就会溶解。 (2)如果还是溶解不了，可以换用乙醇试试。 (3)配制药母液时浓度要尽量高，这样稀释后培养基中的DMSO浓度才越低。 ...

材料 1、实验动物： 孕13d的昆明种二级小鼠。 2、主要试剂 主要试剂 来源 DMEM/F12 GIBCO rh-EGF peprotech rh-bFGF peprotech B-27 supplement GIBCO HEPES Sigma Trypsin Sigma Ploy-L-lysine ...

一周龄大鼠，断颈处死，活力碘消毒无菌取出肝脏，于无菌维持液中漂洗，用眼科剪仔细清除肝包膜韧带沿肝边缘剪切肝尖组织(绕开肝蒂等)转入青霉素小瓶中，用眼科剪绞碎剪成0.1-1.0mm3大小的碎片，加入5倍体积无菌维持液用滴管轻轻吹打吸出上层血细胞再用无菌维持液反复清洗3~5次，加入10倍体积无菌胰蛋白酶消化液37℃消化，消化过程中不断震荡，至组织块边缘变薄(镜下观)离心(1000rpm10分钟)弃去上 ...

1、将静脉血20ｍl用ACD抗凝剂以容积比血：抗凝剂＝9：1抗凝处理 2、按血：分离液＝1：2注入国产淋巴细胞分离液上层，400g 20℃离心30分钟 3、交接层重浮于4倍体积的RPMI1640并通过离心法200g，10min洗三次 4、获得细胞可做分选或其他实验。 体会： 1、实验中我用过肝素方法抗凝，但效果不好，因为肝素抗凝后交接层混浊，洗涤后没有细胞。后来是一位老师推荐我用ACD抗凝剂，效果 ...

1、将切下的组织在手术台上请护士将标本放入低温生理盐水中（可不要动它），在手术完成时将标本放入PBS冰水液中并放入消毒的容器中带回实验室； 2、在超净台中将标本放入培养皿中，加入α-MEM洗涤； 3、获得组织切开，仔细辨认于关节反折处及增生的白色光滑的滑膜组织，附于关节软骨面的增生的血管翳也为滑膜组织（可作另一管消化），仔细剔除脂肪组织，用α-MEM洗二次（以去除红细胞）， ...