细胞技术

细胞培养中常见的污染情况总结如下: 常见的污染如下： 1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。 仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！ 可在培养液中加相应 ...

丁香园网友simon的观点： 支原体是一种大小介于细菌和病毒之间(最小直径0．2um)并独立生活的微生物．约有1%可通过滤菌器。支原体无细胞壁形态呈高度多形性．可为圆形、丝状或梨形。 支原体形态多变，在光境下不易看清内部结构。电镜下观察支原体膜为三层结构．其中央有电干密度大的密集颗粒群或丝状的中心束。支原体多吸附或散在于细胞表面和细胞之间。横断面与细胞微绒毛相似，但微绒毛电子密度比支原体小，且中央 ...

丁香园网友ronghong_2000的观点： 我们实验室最近一次的情况: 我们前后从上海细胞中心买了三批细胞，细胞刚到的时候，观察均生长良好，密度适中，培养液清亮，也没有见小黑点，但是对细胞传代以后就陆续出现多少不等的小黑点，有时候在一夜之间暴长，给培养液加庆大霉素，也无济于事，对贴壁细胞用生理盐水及D-hanks液冲洗七遍后见减少，但是随后几天又出现，刚开始怀疑操作有问题，但是由有经验的老师操作 ...

丁香园网友juventus2004的观点： 最近帮同学养细胞系，也看到以前有人发关于黑胶虫的贴，我是养心肌和海马神经元，感觉应该没有黑胶虫，有的话，请问有相关抗体或荧光标记吗？！ 个人认为，可能大家用得血清，而且没有处理好，导致的，我这里一直用国产血清，胎牛的，只要用得好，我就猛要求多买几瓶，虽然老师还是不让多买，如果大家用得进口的，当然好。 解冻血清，要先放入4度冰箱，而且要不时地摇晃，均匀的， ...

概述 凡混入细胞培养环境中对细胞生存有害的成分和造成细胞不纯的异物都应视为污染，细胞污染不能完全被消除，但能减少其发生的频率和后果的严重性。细胞污染根据污染源主要可以分为物理性，化学性和生物性污染。 物理性污染的来源、危害及预防：物理性污染常常被人们所忽视或被笼统地归为化学性污染。物理性污染通过影响细胞培养体系中的生化成分，从而影响细胞的代谢。培养环境中的物理因素，如温 度、放射线、振动、辐射(紫 ...

取一个注射器针头， 针头头部都会有一个斜面，把针尖背对斜面的一方弯曲成90度，记住只是针尖部位，形成一个小倒刺状。取爬片的时候把培养板放倾斜，可在板子下支一个东西，左手拿小镊子，右手拿针头。用针头头部弯好的倒刺，去勾爬片，很容易就会勾起来，而且不会伤片子。再用镊子把片子夹出来。速度比原来提高很多，取一个板子的爬片只要一分钟。 说的不是很清楚 画张图给大家吧 ...

丁香园网友kj7156084的培养方法： 本室的PC－3来自上海细胞生物所，种是ATCC的。 以10％FBS＋1640或F12培养，0.25%胰酶消化。塑料瓶或玻璃瓶都可以，当然，前者效果较好。复苏时最好用塑料瓶。 5－7天传一次（1：2），2－3天换一次液。尽量高密度传，因为PC－3细胞喜欢扎堆长，如果过了两三天细胞长得不均匀，可以消化离心一下。 传代后一到两天不要动它，要有耐心。 人前列腺癌 ...

丁香园网友yql1977的问题： 各位朋友，今天跟我师弟讨论一个问题，神经元OGD时是否要将缺氧液配成酸性的，我认为酸中毒和高钾血症等并发症是机体缺血后造成的后果，因此不必人为制造酸中毒，而且关于神经元OGD的大量文献也没有特意提及缺氧液的PH值。而我师弟认为在体情况下缺血时会伴有酸中毒及高钾血症，因此造模时应该造成酸中毒甚至高钾的环境，不过他做的是心肌，关于心肌的文献大部分都说明缺氧液PH在6. ...

HepG2人肝肿瘤细胞株广泛应用于遗传毒理学及病毒培养等方面的研究研究肝脏疾病发病机理及其临床应用有着重要意义。由于其与肝细胞具有相同的生物学活性，还被用于胰岛素抵抗的研究。本文对肝癌细胞培养的最佳条件做一简单综述。 1、HepG2细胞的复苏条件 （1）复苏温度的选择 唐孟萱等采用下述方法进行细胞复苏：快速将所冻存细胞40℃水浴摇床60转/ min慢摇至其溶解，溶解后马上转入 37 ℃水浴箱，手工 ...

丁香园网友roseluo425的观点为： 1、0.08％胶原酶II＋0.125%胰酶等比混合后消化 2、消化前后一定要轻柔吹打 3、重悬时要充分吹打，动作轻柔（100次） 4、种板密度要合适 5、当然血清，板都要进口，别图便宜 6、别忘了检查CO2温箱的情况 丁香园网友ljm123的观点为： 1、首先是选择乳鼠时最好是出生3天内的以我的经验来看活力是较好的皮肤看起来是暗红色的再大一点的话皮肤变厚变 ...

纯化病毒第一步 剪碎法CEF的制备 实验前准备 PH7.2 PBS（SW配）﹑平皿一小包（３个）﹑饭盒１（器械，玻璃漏斗）﹑饭盒2（纱布）﹑离心管２﹑碘酊﹑废液缸﹑０.１％新洁尔灭溶液﹑０.２５％胰酶﹑９日龄ＳＰＦ胚２﹑Ｍ１９９培养基 实验步骤 Ⅰ 首先SPF胚新洁尔灭溶液表面消毒，再碘酊﹑酒精消毒，最后小心敲破气室 Ⅱ 准备两把眼科弯头镊子，一把撕破尿囊膜和羊膜，另一把夹鸡胚。用镊子把鸡胚取出， ...

裂解方法包括化学裂解、酶裂解和机械裂解。化学裂解和酶裂解通常是比较温和的方法，通常会很少使DNA 断裂。这两种方法（包括SDS 和溶菌酶处理等）提取纯化DNA中常用的方法。机械裂解可以更均一的裂解细胞，同化学裂解相比，机械处理具有更高的裂解效率和更低的选择性。机械处理可以更剧烈和全面的裂解细胞，但也会造成DNA 的断裂。 一、机械裂解法主要有以下两中： 1、热休克（Thermal shock），既 ...

支原体是一种大小介于细菌和病毒之间(最小直径0．2um)并独立生活的微生物．约有1%可通过滤菌器。支原体无细胞壁形态呈高度多形性．可为圆形、丝状或梨形。 支原体形态多变，在光境下不易看清内部结构。电镜下观察支原体膜为三层结构．其中央有电干密度大的密集颗粒群或丝状的中心束。支原体多吸附或散在于细胞表面和细胞之间。横断面与细胞微绒毛相似，但微绒毛电子密度比支原体小，且中央无颗粒群或中央束。 支原体 ...

PBS的配制： 在800ml蒸馏水中溶解8g NaCL，0.2g KCL，1.44g 磷酸氢二钠和0.24克磷酸二氢钾，用HCL调节溶液的pH值至7.4，加水定容至1升，在1.034x10（5），高压蒸汽灭菌20分钟。室温保存。一般用于实验室中的PBS缓冲液都是这样配制，而不用摩尔分数表示。 PBS(Phosphate-buffered Saline) 分子克隆上的配方 NaCl: 8g KCl: ...

丁香园网友yuanjianmei的问题为： 胶原酶2一定要用D-hank's液配制吗？ 消化血管细胞一次要用多少啊？ 丁香园网友张艳红的观点为： 用D-hank's液配制也可，但不一定。我做的是软骨细胞的原代培养，用的是1640完全培养基配制的。你消化血管细胞如果是做原代培养，我估计用6-8ml就可。我用时每次用8-10ml。当然，这也得视取用的组织特性和组织的量而定。仅供参考。 丁香园网友ww ...

肿瘤细胞在组织培养中占有核心的位置，首先癌细胞是比较容易培养的细胞。当前建立的细胞系中癌细胞系是最多的。另外肿瘤对人类是威胁最大的疾病。肿瘤细胞培养是研究癌变机理、抗癌药检测、癌分子生物学极其重要的手段。肿瘤细胞培养对阐明和解决癌症将起着不可估量的作用。 一、组织培养肿瘤细胞生物学特性 肿瘤细胞与体内正常细胞相比，不论在体内或在体外，在形态、生长增值、遗传性状等方面都有显著的不同。生长在体内的肿 ...

丁香园网友yflfen的问题为： 1. 配制培养基时碳酸氢钠和hepes添加量之间有没有什么必然的联系？我已经的做法对培养基的质量有没有影响，影响有多大？我可否按DMEM的说明书添加3.7g/L的碳酸氢钠，此外再自己再另行添加20mM的hepes。 我参考其他文献上的做法时，就有疑问，但后来还是“根据文献介绍（但文献中用的是Hyclone的DMEM）只添加了1.97g/L的碳酸氢钠，同 ...

PC12是大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞系属神经嵴源性具有神经细胞特性. 由于具有分化型和未分化型两种形式因此很多朋友包括我本人在内都困惑过做实验时应该选择哪种类型? 根据最近查到的资料发现无论分化型还是未分化型都可以作为神经细胞来使用分化型的PC12可以看待为成熟的神经元因为无论形态还是生化特征都与神经细胞类似.而未分化型PC12可以看待为未成熟的神经元. 值得注意的一个问题是关于PC12培养液的使用 ...

1、欲冷冻保存之细胞应在生长良好(log phase) 且存活率高之状态，约为80 – 90 ％致密度。 2、冷冻前检测细胞是否仍保有其特有性质，例如hybridoma 应在冷冻保存前一至二日测试是否有抗体之产生。 3、注意冷冻保护剂之品质。DMSO 应为试剂级等级，无菌且无色(以0.22 micron FGLP Telflon 过滤或是直接购买无菌产品，如Sigma D-2650 ...

一、常规的试剂配制： 1、培养基：选用高糖型DMEM/F12 (1:1)培养基干粉（含15 mmol Hepes），每升培养液中加入碳酸氢钠1.8 g，调节pH值7.0，0.22 μm的微孔滤膜过滤除菌后，加入谷氨酰胺、无菌的青霉素和链霉素液，使其终浓度分别为0.5 mmol/L 、100 U/ml和100 μg /ml，分装后置于4℃保存，临用前加入2%的B27。神经细胞代谢旺盛，选 ...