细胞技术

原理： 苏丹红染料在脂类物质中的溶解度大于其在溶剂中的溶解度，如果染料与含有脂类的试样接触，便有大量染料进入脂类物质的结构内，使这些结构呈红色。多用苏丹红染料、油红O、尼罗蓝等溶于脂类的染料染色，使脂质呈色。也可用四氧化锇染色，脂肪酸或胆碱可使四氧化锇还原为二氧化锇而呈黑色。 配制试剂： 1.苏丹红Ⅲ染色液：将1g苏丹红Ⅲ溶于加温的70%乙醇溶液中过滤备用； 2.甲醛钙固定液：将10ml甲醛和1 ...

原理： 细胞伤口愈合实验被研究者广泛应用和改进，用来研究各种实验条件比如基因敲除和化疗在细胞迁移和增殖中的作用。该实验操作简单，费用廉价，实验条件容易根据不同的目的改进。该方法的基本原理是，在单层培养细胞间制作划痕以产生愈伤区域，然后监控该伤口周围细胞的向划痕迁移的现象，即伤口愈合。改变细胞迁移和/或生长的因素可以增加或降低伤口愈合率。该方法可以定量，适用于自动化系统高通量筛选。 材料和仪器： ...

材料： 6孔板 marker笔 直尺 20微升枪头（灭菌） 无血清培养基 PBS 准备： 所有能灭菌的器械都要灭菌，直尺和marker笔在操作前紫外照射30min（超净台内） 流程： 1、先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀地划横线，大约每隔0.5~1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。 2、在空中加入约5X105个细胞，具体数量因细胞不同而不同，掌握为过夜能铺满。 3、第二天用 ...

原理： 细胞接种存活率只表示接种细胞后贴壁的细胞数，但贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆。而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。由于细胞生物学性状不同，细胞克隆形成率差别也很大，一般初代培养细胞克隆形成率弱，传代细胞系强；二倍体细胞克隆形成率弱，转化细胞系强；正常细胞克隆形成率弱，肿瘤细胞强。并且克隆形成率与接种密度有一定关系，做克 ...

概念： 细胞克隆形成率即细胞接种存活率，表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量。贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆，而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。 基本步骤： 1、取对数生长期的各组细胞，分别用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞，并把细胞悬浮在10%胎牛血清的DMEM培养液中备用。 2、将细胞悬液作梯度倍数稀释，每 ...

一、实验原理 细胞培养可分为原代培养和传代培养。直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养；当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要做再培养， 即将培养的细胞分散后，从一个容器以1：2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养，为传代培养，传代培养的累积次数就是细胞的代数。 细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力。目前细胞冻存多采用甘油或DMSO作保护剂 ...

一、细胞 DNA 含量分布（由细胞 DNA 降解方式检测细胞凋亡） ① 收集已固定的单细胞悬液约 5×105~1×106/ml； ② 离心除去固定液，3ml PBS 重悬细胞; ③ 1500rpm 离心，5 分钟 ，弃去 PBS； ④ 加 PI 染液 1ml，室温避光 20 分钟； ⑤ 调整细胞浓度 5×105/ml； ⑥ 上机检测。 二、磷脂酰丝氨酸外翻分析 ...

1. 将 15-20cm 长的新生儿脐带放入无菌的 PBS 溶液中储存。（注：4℃下最多贮存 24 小时，室温下不超过 6 小时，否则废弃） 2. 用一个钝头的针头扎入脐带静脉管中，用无菌的 PBS 溶液冲洗 3-5 次，将污血冲洗干净为止。 3. 用手术钳夹紧脐带下端，加入 15ml 的胶原酶（1mg/ml）室温下消化 15-20分钟，并不时上下摇动脐带。 4. 消化完后，将下端手术钳松开，消 ...

一. 细胞复苏与培养 将液氮或- 80℃ 保存的肿瘤细胞于 37℃ 水浴，快速溶化，用 8.0ml 培养基混匀已融化的肿瘤细胞悬液，于 1500 转/ 分，离心 3 分钟。 弃上清，再吸取 8.0ml 培养基质混匀细胞沉淀，再 1500 转/ 分，离心 3 分钟，弃上清，细胞沉淀用 1.0ml 培养基混匀，备用。 另取一个 75cm2 方瓶，加入 14.0ml 培养基质，将上述制备的含 肿瘤细胞 ...

一、原理 在体外培养基中由一个祖先细胞增殖形成的细胞团，称之为集落。肿瘤细胞能无限繁殖，所以具有这种能力，而成熟分化的细胞则不能形成集落。HL一60细胞是一种急性早幼粒细胞白血病细胞，在体外无需加刺激因子，可在软琼脂培养基中形成集落。二甲基亚砜是一种细胞分化诱导剂，经二甲基亚砜处理后的HL一60细胞按粒系途径定向成熟分化，同时细胞的增殖力降低，几乎全部细胞丧失了软琼脂中形成集落的能力。因此，这种 ...

根据凋亡细胞固有的形态特征，人们已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法。 1、光学显微镜和倒置显微镜 ① 未染色细胞：凋亡细胞的体积变小、变形，细胞膜完整但出现发泡现象，细胞凋亡晚期可见凋亡小体。贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。 ② 染色细胞：常用姬姆萨染色、瑞氏染色等。凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化，核膜裂解、染色质分割成块状和凋亡小体等典型的凋亡形态。 2、荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜 ...

实验器材 手术小直剪刀三把、眼科直镊子三把、眼科弯镊子两把、玻璃平 皿三套、200目尼龙滤网、50ML、15ML离心管和手术刀片。以上物品均需要高压灭菌消毒处理。 实验试剂 无Ca2+和Mg2+的 PBS、0.05%胰酶0.53mmol/L EDTA溶液、小鼠胚成纤维细胞（MEF）生长培养基：高糖DMEM加10%FCS。 实验动物 孕期14至16天的孕鼠 实验步骤 1. 处死孕鼠，置于75%酒精 ...

血管新生和在旧血管里构造新血管对在胎儿的生长、创伤治愈、肿瘤增殖及转移等各种过程中有重要作用。特别它是肿瘤生长、转移的必经阶段，一直以来不少科研人员将血管新生的抑制剂用于抗肿瘤药物的研究。至于血管新生促进剂，它主要是用于治疗血流灌注不足等诸多症状，但实际应用不多，主要是因为除了从生物体提取的增殖因子以外，科研人员很少能识别出其他有此作用的物质。血管新生治疗在血流灌注不足等方面被寄予厚望。血流灌注不足是由于糖尿病患者的慢性闭塞性动脉硬化、脉管炎病及其他动脉硬化等各种血管闭塞等引起的。但是现在进行的血管新生治疗只限于向患者注射增殖因子和进行基因治疗等方法，众人期待能研发出可以替代这些方法的稳定、便宜的低分子。本文作者及研究团队介绍新型低分子化合物2-Cl-C.OXT-A在血管新生方面的作用。

一、前言 多细胞生物能够维持机体的动态平衡（Homeostasis），器官的功能单位--上皮细胞和周围间质细胞间的相互作用对于维持动态平衡起了重要作用。在一些生理过程中，尤其在发育，细胞的增殖分化、肿瘤的浸润转移和创伤治愈过程中组织基因的表达调节，都是由细胞周围的组织微环境进行调节的。进行再生医疗时，分化的胚胎干细胞（ES细胞）、诱导性多功能干细胞（iPS细胞）和骨髓间充质干细胞等形成器官，再移 ...

摘要 生物样本往往是非单一细胞的混合物，如原代分离的细胞样本和许多培养的细胞样本都是由不同种类或不同功能的细胞组成。而对于样本中不同细胞亚群的区分和定量恰恰是很多研究中的关键一环。这些混合在一起的不同细胞通常是使用流式细胞仪和荧光标记的细胞类型特异性抗体来进行区分的。值得注意的是，许多细胞的类型和生理状态的鉴定不仅仅可以通过蛋白表达的变化来鉴别，也可以根据细胞大小的变化来区分。 对疾病模型小鼠的 ...

大家知道，PeproTech的所有细胞因子和蛋白均为冻干粉，这使得运输非常便捷，只要常温即可。而且，细胞因子和蛋白冻干粉非常稳定，在-20o C或-80o C条件下可保存数年。冻干粉在使用前需进行溶解，然后以液体形式加到培养体系或注射入动物体内。溶解步骤非常关键，因溶解不好会导致细胞因子或蛋白的失活，这也是很多用户在实际使用中经常遇到的问题。 应该如何进行正确的溶解呢？ 下面我们以Recombi ...

复旦大学附属肿瘤医院黄朝晖博士在导师杜祥教授和上海市肿瘤研究所癌基因和相关基因国家重点实验室何祥火研究员指导下利用基因芯片高通量筛选的方法，找到了影响结肠癌增殖速度的microRNA-miR-95，并鉴定了miR-95的下游靶基因Sundefined1。该研究成果发表在2011年3月的Cancer Research（影响因子8.234）上。基因芯片技术服务由上海伯豪生物技术有限公司/生物芯片上海国家工程研究中 ...

细胞培养中的无菌技术： 1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 % ethanol 擦拭无菌操作台面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % ethanol 擦拭无菌操作台面。操作间隔 ...

近日来自中国科技大学和德国德国比勒费尔德大学的科研人员展开合作在新研究中首次发现酵母SNARE蛋白Vti1采用了与哺乳动物完全不同的结合位点与接头蛋白Ent3相结合，这一发现为真核生物囊泡转运过程的机理研究提供了新的线索和思路，相关论文发表在7月26日出版的国际著名综合性学术期刊《美国科学院院刊》（PNAS）上。 中国科技大学生命科学学院滕脉坤教授、牛立文教授及德国比勒费尔德大学Gabriele ...

自从1977 年推出以来，二氧化硅胶体PercollTM已经成为全世界数以千计的研究人员对密度梯度介质的选择。其近乎完美的物理特征方便它在细胞、细胞器、病毒和其他亚细胞颗粒分离中的使用。Percoll做为第一步在进行更高分辨率分离或核酸抽提前富集细胞是非常有用的。人们会认识到在进行其他的这些方法前使用Percoll 做为第一步可以节省大量的时间和资源。对于生物学颗粒，理想的 ...