细胞技术

1 光学显微镜和倒置显微镜 （1） 未染色细胞：凋亡细胞的体积变小、变形，细胞膜完整但出现发泡现象，细胞凋亡晚期可见凋亡小体。贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。 （2） 染色细胞：常用姬姆萨染色、瑞氏染色等。凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化，核膜裂解、染色质分割成块状和凋亡小体等典型的凋亡形态。 2 荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜 一般以细胞核染色质的形态学改变为指标来评 ...

Caspase家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用，其中caspase-3为关键的执行分子，它在凋亡信号传导的许多途径中发挥功能。Caspase-3正常以酶原（32KD）的形式存在于胞浆中，在凋亡的早期阶段，它被激活，活化的Caspase-3由两个大亚基（17KD）和两个小亚基（12KD）组成，裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。但在细胞凋亡的晚期和死亡细胞，caspase-3的活 ...

磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine PS）正常位于细胞膜的内侧，但在细胞凋亡的早期，PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin-V是一种分子量为35~36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力特异性结合。将Annexin-V进行荧光素（FITC、PE）或biotin标记，以标记了的Annexin-V作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微 ...

细胞凋亡中染色体DNA的断裂是个渐进的分阶段的过程，染色体DNA首先在内源性的核酸水解酶的作用下降解为50-300kb的大片段。然后大约30 ﹪的染色体DNA在Ca ? 和Mg? 依赖的核酸内切酶作用下，在核小体单位之间被随机切断，形成180～200bp核小体DNA多聚体。 DNA双链断裂或只要一条链上出现缺口而产生的一系列DNA的3'-OH末端可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶 ...

一、 神经干细胞的分离和传代 无菌条件下取新生SD大鼠(出生48h内)脑组织，D-Hanks液充分漂洗后，在解剖显微镜下剥离脑膜，准确分离海马，用眼科剪将海马剪碎后，再转移到DMEM/F12(1:1)加B27 和bFGF(20ng/ml)的无血清培养基，吸管吹打机械分离制作单细胞悬液，台盼蓝染色后细胞计数，调整细胞浓度为5×104~5个/ml，置于24孔培养板中培养，每孔 ...

膜的流动性是生物膜结构的基本特征之一，主要指膜脂肪酸链部分及膜蛋白的运动状态。膜脂类分子在相变温度以上条件下主要有侧向扩散、旋转、左右摇摆、伸缩振荡、翻转及异化运动等方式。膜蛋白的运动方式大体分为侧向及旋转运动，主要受脂质双分子层的影响。脂肪酸不饱和键含量和链的长度明显影响着膜脂流动性，不饱和键的存在会降低膜脂分子间排列的有序性，从而增加膜的流动性，短链能减低脂肪酸链尾部相互作用，在相变温度下， ...

细胞经诱导或抑制后，需对自噬过程进行观察和检测，常用的策略和技术包括观察自噬体的形成、利用Western Blot检测LC3-II/I比值的变化以评价自噬形成等。

实验原理 活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法.其目的是显示生活细胞内的某些结构而不影响细胞的生命活动和产生任何理化变化以致引起细胞死亡.活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态根据所用染色剂的性质和染色方法的不同 活体染色可分为体内活染与体外活染两类.体内活染是以胶体状的染料溶液注入动植物体内染料的胶粒固定于细胞内某些特殊结构内以达到易于识别的目 ...

实验的原理： （一）细胞凝集反应 细胞膜是由脂类双分子层镶嵌蛋白质构成的单位膜，而脂类和蛋白质又与糖分子结合为细胞表面的分枝状糖外被。凝集素是一类可逆结合特异糖基的蛋白质，具有使细胞凝集、血型鉴定、促进淋巴细胞分裂、防害抗虫等作用。凝集素使细胞凝集是由于它与细胞外被的寡糖链相连接，起到“桥”的作用。 （二）细胞膜的渗透性 细胞膜是细胞与环境之间进行物质与能量 ...

实验用品 1.器材: 复式显微镜及其摄影装置、黑白胶片、显影罐、温度计、电炉、暗房袋、暗盒、相纸、剪刀、塑料盘、烧杯、量筒、天平、生物样品等 2.试剂: ①显影液 (D72通用显影液): 用50℃蒸馏水150ml先将小袋药粉溶解再将大袋药粉放入搅动至完全溶解加水至250ml.待温度降至20℃左右时使用. ②定影液: 用50℃蒸馏水150ml将药粉完全溶解后加水至250 ...

放射自显影技术是利用放射性同位素所产生的射线作用于感光乳胶的氯化银晶体而产生潜影，再经过显影定影处理，把感光的氯化银还原成黑色的银颗粒，即可根据这些银颗粒的部位和数量分析出标本中放射性示踪物的分布，以进行定位和定量分析。 实验用品 器具：显微镜、恒温培养箱、电冰箱、干燥箱、电吹风、暗室 试剂：酒精、二甲苯、Giemsa 染色液、乳胶、显影液、定影液、3H ...

每一物种的细胞一般都具有一定数目、形状和大小的染色体，在秋水仙素的作用下可使分裂细胞阻断在中期，此时染色体形态最典型，然后通过低渗、固定、染色等步骤，便可在显微镜下呈现出其形态。 实验用品 器具：显微镜、培养皿、手术剪、镊子、冷冻载片、滴管 试剂：秋水仙素、生理盐水、甲醇、冰醋酸、低渗液、PH6.8 磷酸缓冲液、Giemsa 染色液 材料：蟾蜍 实验方法步骤 1. 前 ...

细胞融合是指两个或两个以上的细胞合并成为一个细胞的过程。在自然情况下，体内和体外培养的细胞均能发生自发融合现象。人工方法诱导细胞融合开始于50 年，现在这项技术已成为研究细胞遗传、细胞免疫，肿瘤及细胞工程的重要手段。在诱导物（如仙台病毒，聚乙二醇）作用下，相互融合的细胞发生凝集，随后在质膜接触处发生质膜成份的一系列变化，主要是某些化学键的断裂与重排，最后打通两质膜，形成双核或多核细胞（此时称同核 ...

1 材料 1.1 动物 出生后 1-4 天 SD 乳鼠 15 只。 1.2 试剂 低糖 DMEM、胰酶(含 EDTA)、青链霉素、碳酸氢钠液、新生牛血清、谷氨酰胺、D-Hank's 液。0.1%新洁尔灭、碘酒、75%酒精。 培养液：培养液(DMEM，新生牛血清，青链霉素)。 1.3 手术器械和仪器 铝盒、眼科直剪、眼科弯剪、眼科直镊、 ...

1 材料 1.1 动物 出生后1-4天的Wistar乳鼠1只。 1.2 试剂 PBS、培养液(低糖DMEM，新生牛血清、青链霉素、1%明胶PBS、0.25%胰酶)，碘酒和酒精绵球。 1.3 手术器械 眼科直剪2把、眼科弯剪2把、眼科直镊2把、眼科弯镊2把、玻璃平皿3套，25cm2 ...

一、 实验材料： 6-8周龄大小鼠；剪刀，镊子，灌流用针头，连接管，玻璃平皿，细胞筛，冰盒 二、实验方法： 1. 培养用液 洗涤培养基：DMEM 基础培养基：DMEM/F12 2. 消化用液 前灌流液T1 ;后灌流液T2 3. 培养基本操作方法 a. 将小/ ...

我们知道，PeproTech的所有细胞因子和蛋白均为冻干粉，这使得运输非常便捷，只要常温即可。而且，细胞因子和蛋白冻干粉非常稳定，在-20oC或-80oC条件下可保存数年。冻干粉在使用前需进行溶解，然后以液体形式加到培养体系或注射入动物体内。溶解步骤非常关键，因溶解不好会导致细胞因子或蛋白的失活，这也是很多用户在实际使用中经常遇到的问题。

磷酸盐缓冲液，Tris缓冲液和柠檬酸缓冲液等是生物学实验中常用的缓冲液，也是PeproTech重组细胞因子和蛋白溶解所需的常用缓冲液。然而，这些缓冲液的配制比较麻烦，尤其当要获得特定pH值的缓冲液时，调节pH值是费力、费时的事情。对于Tris等缓冲液等，pH计是无法准确测量其pH值的。

细胞培养是指从体内组织取出细胞，模拟体内环境，在无菌、适当温度及酸碱度和一定营养条件下，使期生长繁殖，并维持其结构和功能的一种培养技术。动物细胞体外培养主要用来获得细胞群或得到其次生代谢产物，如人造皮肤、人造耳朵、克隆抗体，或者进行药物药效、有毒物质鉴定等。动物细胞培养需要严格的条件：A) 无菌无毒培养环境—保证细胞在体外培养成功的首要条件。在体外培养的细胞由于缺乏对微生物和有毒物的防 ...

一.试剂配制 无菌水ddw: 高温灭菌; 分装; 2XHBS: 280mM NaCl 10mM KCl 1.5 mM Na2HPO4 12 mM glucose 50 mM HEPES Adjust the pH every 0.05pH from 7.00 to 7.45 using 10N NaOH then add ddw. to the final volume. 过滤灭菌分装; 2M ...