细胞技术

相关专题 细胞培养中常遇见的有细菌污染、真菌污染、支原体污染、病毒污染等，说起支原体污染，估计细胞培养的同学就开始犯愁了，细胞培养的老手都知道，支原体污染非常不易察觉，怎么才能检测支原体污染呢? 1、细菌、真菌污染的检测 (1)肉眼观察 细菌、真菌污染常在传代、换液、加样等开放性操作之后发生，而且增生迅速，若有污染，在48小时内可明显观察到 ...

相关专题 细胞转染的方法主要包括：电穿孔法、显微注射、基因枪、磷酸钙共沉淀法、脂质体转染法、多种阳离子物质介导、病毒介导的转染等，理想的细胞转染方法是具有高转染效率、对细胞的毒性作用小等，本文主要介绍细胞转染常用的方法-脂质体转染的原理和操作步骤等。 脂质体(lipofectin regeant，LR)试剂是阳离子脂质体N--n， n，n- ...

相关专题 生物实验中的封闭剂 BSA的作用 BSA一般做为稳定剂被用于限制酶或者修饰酶的保存溶液和反应液中，因为有些酶在低浓度下不稳定或活性低。加入BSA后，它可能起到“保护”或“载体” 作用，不少酶类添加 BSA后能使其活性大幅度提高。不需要加BSA的酶加入BSA一般不会受到什么影响。对多数底物DNA而言，BSA可以使酶切更完全，并可实现重 ...

相关专题 在众多实验缓冲液中，HBSS显得有点默默无名。HBSS主要用于培养液的配制或清洗细胞，不能单独使用。本文介绍HBSS的配制和使用方法。 HBSS，即汉克斯平衡盐。英文全名Hank's Balanced Salt Solution。D-Hank's与Hank's的一个主要区别在于前者不含有钙和镁离子，因此D- ...

相关专题 &NBSp; 我们知道，在细胞培养检测实验在实验仪器、培养基等等工作上都要耗费不少的人力和体力。好在很久以前就有高人发明了细胞保存这个实验步骤，将暂时多出来的细胞冰冻保存，以最大程度保存细胞活力。 一、细胞冷冻保存 1.材料： 生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO(Sigma D-2650)、无菌塑料冷冻保存管(Nalgene ...

相关专题 MEM细胞培养基 无血清培养基可以提供细胞贴壁需要的一些基质，本文总结了利用无血清培养基OPTI-MEM进行贴壁细胞的脂质体转染试验材料，步骤、个人经验以及问题分析。 贴壁细胞的脂质体转染 一、实验材料 1、宿主细胞CHO(贴壁细胞) 2、脂质体LIPOFECTAMINE 2000(Invitrogen公司) 3、6孔细胞培养版 4 ...

相关专题 细胞凋亡专题 PTEN依赖的细胞生长抑制和细胞凋亡 PTEN (phosphatase and tensin homology deleted on chromosome 10)在广泛的人类肿瘤中发生基因突变或缺失。PTEN是一个PIP3-磷酸酶，与PI3K的功能相反，它可以通过去磷酸化将PIP3转变为PI-45-P2。PTEN可 ...

相关专题 磷脂酰肌醇3-激酶(PI3Ks)信号参与增殖、分化、凋亡和葡萄糖转运等多种细胞功能的调节. 近年来发现 IA型PI3K和其下游分子蛋白激酶B(PKB或Akt)所组成的信号通路与人类肿瘤的发生发展密切相关. 该通路调节肿瘤细胞的增殖和存活 其活性异常不仅能导致细胞恶性转化 而且与肿瘤细胞的迁移、黏附、肿瘤血管生成以及细胞外基质的降 ...

相关专题 AKT大家一定不陌生，即蛋白激酶B，细胞凋亡重要因子。本文精选了Nature子刊、世界公认的顶尖综述期刊——Nature Reviews Cancer上关于akt pathway的信号通路图。 Activation of class IA phosphatidylinositol 3-kinases (PI3Ks) occurs ...

相关专题 在细胞培养过程中，经常少不了HEPES缓冲液。那么，HEPES缓冲液的配制和使用方法怎样呢?HEPES缓冲液是一种弱势，在开放式的培养条件中，若加入HEPES，可防止培养基内pH氧化升高，从而将PH维持在7.0左右。 HEPES分子量为238.31，化学名：4-羟乙基哌嗪乙磺酸，分子式: C8H18N2O4S。 HEPES常用于生 ...

相关专题 293细胞总有一种转染方法适合你 gdgznf2008：大家看看我的293细胞状态怎样? 适合转染吗? my5155714认为： 不太好至少你的细胞长的太不均匀了 而且有的细胞已经老化消化的问题 网友gdgznf2008认为： 我的细胞是师兄冻存的，也不知多少代了，我用的是0。025的胰酶+EDTA消化的，而且尽量吹打均匀，可 ...

相关专题 全球领先的生物技术公司Eppendorf率先在中国推出全新细胞培养耗材，扩展了eppendorf细胞处理（Cell Handling）产品线，为客户提供完整的细胞产品解决方案。 eppendorf作为拥有50多年高品质耗材研发和制造经验的生产商，一直致力于为客户提供高品质耗材。正如Eppendorf的承诺以及客户的信赖，Eppen ...

相关专题 The PI3K/AKT and related pathways are important in internalizing the effects of external growth factors and of membrane tyrosine kinases. Activation of membrane kina ...

相关专题 常规转染技术可分为瞬时转染和稳定转染(永久转染)两大类。转染方法的选择对实验结果影响很大，不少转染方法都需对细胞数量，DNA与转染试剂比例，培养及检测时间进行优化。传统的转染技术，如DEAE右旋糖苷法，磷酸钙法，电穿孔法，脂质体法各有利弊，其主要原理及应用特点见下表： ...

相关专题 滋养层细胞在胚胎干细胞的培养中扮演了双重角色，同时提供了生长底物和生长因子。后者我们能用外源的生长因子来替代。至于前者，一些研究人员也开始用基底膜基质来替代，如BD的Matrigel。当然，人类胚胎干细胞及诱导多能干细胞(iPSC)的最佳培养条件是成分完全明确，并且完全人源性的。 为此，StemCell Technologies公 ...

相关专题 在分子生物学中，磷酸钙沉淀法特指将外源DNA转入真核细胞的一种方法。将氯化钙、DNA和磷酸缓冲液混合，形成吸附DNA的不溶性羟磷灰石细微颗粒附着在细胞表面，通过胞饮进入细胞。此方法对于贴壁细胞转染是最常用并首选的方法。 核酸以磷酸钙-DNA共沉淀物的形式出现时，可使DNA附在细胞表面，利于细胞吞入摄取，或通过细胞膜脂相收缩时裂开的 ...

相关专题 脂质体介导是目前条件下最方便的转染方法之一，适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，其转染率高，优于磷酸钙法，比它高5～100倍，能把DNA和RNA转染到各种细胞。 用LR进行转染时，首先需优化转染条件，应找出该批LR对转染某一特定细胞适合的用量、作用时间等，对每批LR都要做：第一，先要固定一个DNA的量和DNA/LR混合物与细 ...

相关专题 实验前应明确的问题 1. 选择适当的细胞接种浓度。一般情况下，96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大，因此，在进行mtt试验前，要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间，以保证培养终止致细胞过满。这样，才能保证MTT结晶形 ...

相关专题 细胞凋亡(apopotosis)是指细胞在一定生理和病理条件下，遵循自身程序，由基因调控的主动性死亡过程。细胞 凋亡具有重要的生理和病理意义，它是多细胞生物发育和组织平衡的主要机制，并且与肿瘤、神经推行等发病机理有关。许多病理生理因素如自由基、辐射、DNA损伤、剥夺生长因子以及死亡受体和配体作用等都能引起细胞凋亡。 常用方法： 1 ...

相关专题 在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧，细胞发生凋亡早期，膜磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。 在细胞发生凋亡时，膜磷脂酰丝 ...