细胞技术

相关专题 总有一种转染方法适合你 问： 手上有U251细胞，pEGFP载体，现在将不带外源基因的载体转u251的效率都很低，10%都没有。 所用转染试剂：invitrogen的Lipofectamine 2000和威格拉斯的Vigofect，效率都很低，试过不同细胞密度，不同的DNA和转染试剂的比值，还是不行。 各位高人有没有什么建议，另外转 ...

相关专题 总有一种转染方法适合你 xiangyu_16888：关于稳定转染的若干问题 1 转染后24小时以1：10的稀释比例加入新鲜的含G418的培养基中，其目的是什么? 2 此时换液是否将DNA-脂肢体复合物去处? 3 加入G418的量是按体积加还是按细胞数加? 4 转染后培养基除了G418是否也加入双抗? 谢谢各位大虾了! bigbang ...

相关专题 总有一种转染方法适合你 问：我想用质脂体转染法将质粒稳定转染入肿瘤细胞，请问可以选择哪种试剂盒? 因为我不报销费用，所以想选一种即好用又较为便宜的，请求指点。谢谢 答：您的情况我们去年也曾遇到过。目前市面上的质粒提取试剂盒林林总总，令人难以取舍。我觉得首先应该根据自己的需要来选取。进口的试剂盒，比如qiagene，omiga，pro ...

相关专题 总有一种转染方法适合你 问： 各位朋友，本人今天刚刚做了转染，用的24孔板，质粒是带有荧光的(含neo基因的载体)，如果转进去了，下一步就要进行筛选?但是不知道具体该怎么做才能得到稳定转染的细胞? 答： 最好先做以下预实验，摸一下G418的浓度范围，以未转染的细胞做对照，当未转染细胞完全杀死作为最佳筛选浓度。在选择压力下待存活的细胞 ...

相关专题 总有一种转染方法适合你 hangcy2004问： 细胞转染后建立稳转细胞系大多用G418来杀，可是这种抗生素的选择是根据什么来确定的呢?还可以用其他的抗生素吗? 如果一个载体上有两个抗生素基因，氨苄青霉素和新霉素，那么建立稳转细胞系时该用哪种抗生素来杀细胞呢?刚结束这方面的知识，不甚了解，恳请高手指点迷津!非常感谢! alfredy ...

相关专题 总有一种转染方法适合你 p猫：稳定转染之后的细胞为什么荧光强度会有很大的不同? 在建立稳定株的整个过程中都存在这个问题，理论上说同一个细胞克隆出来的细胞团里面的每个细胞表达蛋白的水平应该是一样的吧，可是为什么荧光显微镜下看荧光强度差异却很大呢?这样的稳定株能用来做后续的实验吗? lhczj认为： 如果不考虑荧光强度，细胞能够长时间保 ...

相关专题 总有一种转染方法适合你 请问脂质体2000能转染Hela细胞吗? 答1.应该是可以的，但是脂质体2000的细胞毒性的确比较大，如果细胞比较敏感的话不建议使用。罗氏的FugeneHD细胞毒性比较小，而且效率也高，特别是对原代细胞，肿瘤细胞和干细胞。悬浮细胞的话还是电转吧。 答2.可以，用脂质体2000转染Hela细胞，没感觉对Hela ...

相关专题 总有一种转染方法适合你 问：最近要做萤光素酶载体PGL3转染细胞，PGL3载体上面带有neo的抗性标记，有一个老师和我说要培养基里面要加G418筛选，但我查了一些PGL3载体转染的文献，都没有提到加G418，所以想问问学长们到底要不要加G418? 答：Neo是一个抗性基因，pGL3系列的载体上有这个抗性基因;Neo在原核(大肠杆菌) ...

相关专题 总有一种转染方法适合你 转染的定义是“将具生物功能的核酸转移或运送到细胞内并使核酸在细胞内维持其生物功能”。其中，核酸包括DNA (质粒和线性双链DNA )，反义寡核苷酸及RNAi(RNA interference)。基因转染技术已广泛应用于基因组功能研究(基因表达调控，基因功能，信号转导和药物筛选研究)和基因治疗研究。 基因转染需 ...

相关专题 总有一种转染方法适合你 问： 我是新手，我想将一个构建的真核表达载体转染进HEK293细胞中，有人说要先将质粒线性化，也有人说不用，不知道到底应该怎样呢?如果需要线性化，具体怎么操作呢?谢谢了! 答： 要看你的目的，是做瞬时表达还是稳定表达，做稳定表达，为了更好的整合到细胞的基因组上，可将质粒线性化，选择好酶切位点。不酶切直接筛选稳 ...

相关专题 zhou0958求助：是否瞬转成功的检测 我现在想做瞬转，然后24，48，72小时后检测转染的载体对细胞增殖的影响.我所转染的是连有目的片段的PCDNA3.1载体，这种载体是不带荧光的.请问各位大侠，我该用什么方法来检测我的转染是否成功呢? DXY721认为 检测转染成功与否的方法很多，流式，RT-PCR，WB应该都可以 east ...

相关专题 问：跟文献上的细胞一样，但跟他的质粒不一样，文献上说G418筛选浓度为500mg/ml，那我可以直接用这个浓度筛选我转染以后的浓度吗?质粒的不同对同一细胞的G418筛选浓度影响大吗? 答： 由于每种细胞对G418的敏感性不同，而且不同的厂家生产的相同浓度的G418的活性不尽相同，所以在筛选之前，一定要确定G418的最佳筛选浓度。尽 ...

相关专题 总有一种转染方法适合你 酵母DNA转染的方法与E.coli转染的方式十分相似，但是如果不注意细节或者说技巧，同样会导致试验失败。不管你用于做酵母菌双杂合筛选，还是做系统模型，下面列出的几个常见的操作希望能够避免…… 1. 忘记加单链DNA 在做E.coli转染是直接使用双链的DNA，而酵母转染需要加入单链“载体DNA”，以强化质粒 ...

相关专题 德国默克是世界上历史最悠久的化学制药公司之一。已有335年历史的默克公司于1998年收购了美国CN Bioscience集团(包括Calbiochem，Oncogene，Novabiochem和Novagen四大品牌)，CN Bioscience(现已改名为MERCK Bioscience)的四大品牌分别在生化、信号传导、蛋白质化 ...

相关专题 总有一种转染方法适合你 随着基因与蛋白功能研究的深入，siRNA转染已日渐成为实验室工作中经常涉及的基本方法。本文收录了与siRNA转染相关的常见问题，并附上QIAGEN专家的解答，希望能对您的实验有帮助。 Q：我该如何优化siRNA转染? A：在实验室中建立RNAi和研究每一种新的细胞系时，应当优化siRNA的转染。HiPerFe ...

相关专题 有战友说体外细胞培养过程中发现细胞形态变化，不明原因。在此通过几个问题解释一下“细胞转化”。 1. 什么是细胞转化?何时会发生细胞转化? 细胞转化是细胞发生遗传性状改变的一种变化，它的基础是DNA或基因的突变。从属性上说，基因突变导致生物体发生的转化，有利于生物体的转化，也有不利于生物体的转化(例如癌变)。 在体外培养的细胞，受到 ...

相关专题 DMEM是现今细胞培养中比较常见的培养基之一，DMEM培养基是建立在MEM培养基的基础上研究出来的，它与MEM培养基相比较，DMEM培养基中加大了MEM培养基中各种成分的用量，下文主要介绍一下自己配制DMEM的方法。 一、这里是一份GIBCO的低糖DMEM粉剂配制说明(普通高糖的DMEM培养基配法是一样的)： TO PREPARE ...

相关专题 DNA Ladder是细胞凋亡时产生的一些DNA片段，经过特定内切酶的酶切作用后，在电泳凝胶上产生多条核酸片段的条带，由于电泳图性状成梯形，因此称为DNA Ladder。DNA Ladder的产生与细胞凋亡密切相关，因此也可以利用DNA Ladder来判断细胞凋亡的标准。 例一 gongyulai ：我用的是药物诱导癌细胞凋亡，做 ...

相关专题 本文介绍2D电泳的关键步骤和实验方法。众所周知，2DE分离能力非常强大， 它利用蛋白质间两个性质上的差异分离蛋白质，甚至能将细胞中的五千种蛋白分离开，因而在分离蛋白混合样品、比较差异方面具有重要位置，结合质谱鉴定技术可查明大型蛋白复合物各组组分，与其它生物技术如分子生物学、分子遗传工程、免疫学、微量蛋白质的自动氨基酸序列分析相结合 ...

相关专题 一、酶消化法。 1、胰酶。这是用得最多的。一般浓度在0.25-0.5%。作用时间根据细胞种类、作用温度等因素而变化很大，从几分钟到几十分钟不等。0.25%的胰酶作用于单层贴壁的细胞，在37度条件下，一般消化1-5分钟就足够了。终止是用血清。主要作用于细胞间。配制时不能用含钙、镁的平衡液，否则影响活性。保存于-20度。 2、胶原酶。 ...