细胞技术

相关专题 仪器用具： 37℃培养箱及冰浴 Electroporation cuvette (electrode gap 0.1 cm) Electroporator (Bio-Rad IBI geneZapper 或其它厂牌) 药品试剂： 无菌水 (置冰浴中) 10% glycerol (置冰浴中) SOB 液体培养基 SOB 固体培养基 ...

相关专题 总有一种转染方法适合你 一些真核蛋白在原核宿主细胞中的表达不但行之有效而且成本低廉，然而许多在细菌中合成的真核蛋白或因折叠方式不正确，或因折叠效率低下，结果使得蛋白活性低或无活性。不仅如此，真核生物蛋白的活性往往需要翻译后加工，例如二硫键的精确形成、糖基化、磷酸化、寡聚体的形成或者由特异性蛋白酶进行的裂解等等，而这些加工原核细胞则无 ...

相关专题 总有一种转染方法适合你 DXY721认为： 悬浮细胞和贴壁细胞在转染过程中差别不大，主要差别在于转染后的筛选，当然如果你做的是瞬时转染就不存在筛选的问题了。 其实转染的过程很简单，问题是能不能转的进去的，转染率能有多少，转进去是否可以稳定表达目的蛋白等等。 我们也是用脂质体做悬浮细胞的转染，说明书上都有具体的操作过程，将脂质体和目的 ...

相关专题 总有一种转染方法适合你 知己知彼，方能百战不殆。做细胞转染也一样道理。细胞转染实验的影响因素很多，如需要转染的细胞类型(对于困难的细胞系尤其如此)，需要被转染的分子(DNA、RNA、寡核苷酸、蛋白质)，转染试剂等。但无论在何种情况下，以下八个要素都不容忽视。 要素一：细胞 分裂细胞相比较非分裂细胞——分裂细胞往往要比静止细胞更易于摄 ...

相关专题 总有一种转染方法适合你 pazj：我的细胞转染48h后在荧光显微镜观察，细胞形态还正常，消化传代以后加G418做稳转，加药以后头两天看，细胞形态还是正常的，但是第三天开始就缩小成小圆点了，感觉就和加胰酶消化后的细胞形态，不知道这个时候细胞是死是活?我还要继续加药吗?还是重新做转染? lanniaoxxx认为： 这种情况应该是细胞死亡 ...

相关专题 总有一种转染方法适合你 jw52317：细胞转染后的筛选，如何配制培养液? 最近打算将一cDNA转染到一肿瘤细胞内，所用的质粒(pCMV)只有氨苄西林的抗性基因(Amp)，请问有哪位朋友知道我转染细胞后该怎么配制筛选培养液，包括选用的抗生素，浓度已经转染后什么时候开始筛选的等。 学山肥虎认为： 1 质粒的概念 质粒(plasmid) ...

相关专题 总有一种转染方法适合你 前言 X-tremeGENE DNA Transfection Reagent是一种非脂质体、多组分转染试剂，已被证明可有效转染多种细胞。X-tremeGENE 9和X-tremeGENE HP在有无血清条件下均可进行转染，且细胞毒性低，转染后无需更换培养基。 降低转染试剂本身的脱靶效应是非常重要的： · 在 ...

相关专题 总有一种转染方法适合你 xiaoniao175问： 请问怎样提高细胞的转染效率?我前天做了转染，连接目的基因的载体带荧光，转染后48小时在荧光显微镜下观察，却发现只有约百分之15左右的荧光，我该怎么提高转染效率?有没有必要接着往下做筛选?还是重新转染一次? dafang0212认为： 如果要是做稳定筛选的话，15%的转染率应该够了。 ...

相关专题 总有一种转染方法适合你 geniusma问： 准备做hepg2的转染试验了，实验室常用的的是lipofectamine 2000，听说hepG2的转染效率很低，并且这种细胞比较容易成团，这会影响转染效率吗?是否用trypsin+EDTA可以使其成为单个细胞不成团?哪种转染方法更适合hepg2?需要改用电转吗?如果用lipofecta ...

相关专题 总有一种转染方法适合你 乡乡问： 最近本人在做HepG2细胞的转染，转染的是GFP质粒，按照LIPO2000的说明书使用后，发现细胞的死亡很严重，24h时差不多死了一半。而且我在转染前细胞密度差不多达到90%，也在转染后6小时的时候换了培养基。在显微镜下看荧光的转染效率大概有70%-80%，虽然效率还可以，但是由于细胞死亡对我后续的 ...

相关专题 总有一种转染方法适合你 问：细胞稳定转染建系后，转染的质粒细胞内本身有较高表达，我的质粒是点突变的质粒，我做的是稳定转染，按理论稳定建系后不应该对细胞增值有影响的。 根据实验设计，我往已经稳定建系的细胞中，再瞬时转染了带报告基因的另一种质粒，同时往野生型即没有转染任何质粒的细胞中也同时转入了相应报告基因质粒，两者相比稳定转染的细胞系 ...

相关专题 总有一种转染方法适合你 参与者：水仙子2005 最近用pIRES2-eGFP做转染，可是看不到荧光(就连空载体也没有)，由于实验要在3月底出结果，所以现在很急，准备寒假加班加点做。 有人说这个载体的GFP表达很不稳定，不知道有没有人用过这个载体，能否给点建议，对于好的建议愿以积分相赠。 参与者：Crazyvirus 不知你是固定以后 ...

相关专题 总有一种转染方法适合你 求助者：sunshine046000 各位大侠，我最近准备做共转染，用于分析目的基因的蛋白功能改变，查阅文献发现可以用含目的基因的载体和含有报道基因(b-gal)的载体做共转染以控制转染率。..请问师兄师姐们，如果我的研究目的在于分析目的基因(野生型和突变型)的表达情况以及后续的活性变化。是否最好用含相同启动 ...

相关专题 总有一种转染方法适合你 摘要：由于RNAi实验技术的推广和应用，人们在体外培养细胞中进行RNAi实验已经比较容易。随着研究的深入，人们需要将研究扩展至更自然的细胞和体内环境。一种像做体外转染一样的简单易用的方法已经出现，这就是动物体内转染试剂。 由于RNAi实验技术的推广和应用，人们对特定基因"敲除"或"沉默"变得越来越简单，研究也 ...

相关专题 总有一种转染方法适合你 【求助】不同细胞siRNA转染效率，如何检测? 最近在做RNAi，用的siRNA，然后Real-Time PCR，发现抑制率仅20-30%左右，与说明书说的70-90%相去甚远 咨询一些相关人员后，认为可能是转染效率的问题，如果转染效率仅有20-30%，那抑制20-30%也就不少了。 因此想请教一下，一般不同 ...

相关专题 总有一种转染方法适合你 外源基因进入细胞主要有三种方法：电击法、磷酸钙法和脂质体介导法，实际上其基本原理都是利用不同的方法在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入，但是由于前两者的效率低且伤害较大，所以现在除了对于一些特殊细胞系，一般的转染方法都利用脂质体。 利用脂质体转染和其他方法一样，最重要的就是防治其毒性，因此脂质体与治理的比 ...

相关专题 总有一种转染方法适合你 问：cos-7的转染 1、细胞的培养：我们在培养细胞时发现该细胞长的很快，不到2天的时间就长满了;消化的时候老是成块的掉，如果消化时间加长，细胞也能成单个的，但是细胞的生长力又减弱了，请问要怎样来克服这一问题呢? 2、转染前：转染前16-24h我们用含血清不含抗生素的MEM传进6孔盘，16h左右就发现细胞贴壁 ...

相关专题 总有一种转染方法适合你 phoolishkate：脂质体转染后必须用不含抗生素的培养基吗? 我的培养基都加了青链霉素，转染后是不是不能用? applezph认为： 由于脂质体转染对细胞存在一定毒性，一般说来转染前的一次传代就应用不含抗生素的培养基，转染后的话我觉得也不应该加青链(我都是这么做的) 当然如果对自己的操作实在没有把握的话 ...

相关专题 总有一种转染方法适合你 ayao0问：转染的时候可以用加血清的培养基吗 前几天学习做细胞脂质体转染，看师姐是用的加血清的培养基，整个过程比以前的方法简单方便了很多。 不用过四个小时就去换液，可以过了48个小时看转染效率很不好，以前也有人用这种方法做过，很成功。 到底这种新的方法行不行的通，做的时候需要注意哪些问题 monica912 ...

相关专题 总有一种转染方法适合你 问： 最近做细胞转染，预筛选稳定克隆，载体为pEGFP-N1，pIERS 现在是平行做几个基因，转然后，只有空载体和一个基因可以看到绿色荧光，其余均没有，这会是什么原因呢?怎么补救啊? 答： 需要考虑的问题有： 1.你的细胞和转染的方法，是不是你的细胞本身就很难转染，有些细胞用脂质体转染率很低的。在求助时最好 ...