细胞技术

第三章 细胞培养和转染 1. 细胞培养(HEK293T) 1) 显微镜下观察细胞，细胞生长状态良好，去上清； 2) 加入预热的PBS 3ml 温柔地清洗细胞弃去PBS； 3) 用胰蛋白酶消化细胞，通常75cm2 培养瓶的贴壁细胞用3ml 胰蛋白酶于37oC 处理5min； 4) 待细胞脱落后，加入5ml DMEM 培养液(含10%FBS)以终止消化反应，并将 细胞悬液转移入15ml 或50ml 离 ...

抗氧剂BHT知识百科抗氧剂BHT由德国拜耳公司发明，广泛用于工业用途。 　　1、抗氧剂BHT，能抑制或延缓塑料或橡胶的氧化降解而延长使用寿命。 　　2、抗氧剂BHT能防止润滑油、燃料油的酸值或粘度的上升。 　　3、抗氧剂BHT又是合成橡胶（丁苯、丁、聚氨 ...

实验十四 细胞集落形成实验 非整倍体无限细胞系和癌细胞株中，仍然存在不同细胞亚群，它们的功能和生长特点有些差异，其中有些亚群细胞对培养环境有较大的适应性和具有较强的独立生存能力，细胞集落率高。纯化细胞群来自一个共同的祖细胞，细胞遗传性状、生物学特性相似，利于实验研究。原代培养细胞和二倍体有限细胞系，细胞集落率很低。细胞集落化培养之前，应先测定细胞集落形成率，以了解细胞在极低密度条件下的生长能力。 ...

相关专题 Half day Seminar17th December 2002School of Metallurgy and MaterialsThe University of Birmingham This half day meeting was the third held by the MedMag Network which ...

在园子里经常看到询问冻存、复苏细胞的方法和注意事项。我新开此贴，专门介绍一些致命的“败笔”，和解决方法。希望对大家有帮助。（以Raji为例） 细胞冻存： 1. 错误的时机：细胞状态不好（长的太过了，培养液已经很黄；细胞可疑污染；细胞已 经开始凋亡或崩解；连续培养超过二个月，细胞性状已有改变改变）。 解决： 最佳时机：细胞增殖旺盛，情况稳定，试验效果良好， ...

细胞划痕实验（Wound Healing)是一种操作简单，经济实惠的研究细胞迁移/肿瘤侵袭的体外试验方法。这种方法的原理是，当细胞长到融合成单层状态时，在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。 基本的步骤包括“划痕”的制造，细胞迁移期间图像的获得以及后期数据的处理 ...

相关专题 总有一种转染方法适合你 编者按：RNAi是目前研究的热点，作为一种快速silence基因的重要方法。但如何制备siRNA是主要问题之一，目前至少有以下五种方法：化学合成（价格贵），体外转录制备siRNA;体外转录合成长链RNA，通过dicer或RNase III降解为短片段的siRNA；siRNA表达载体在体内生成siRNA；PCR ...

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相关专题 细胞培养基的配制 Serologicals公司于7月26号宣布它的全资子公司Celliance引入了Onco-CYTE(TM)产品。Onco-CYTE(TM)是一种不需要血清的、替代含有胎牛血清(FBS)液体培养基的培养基，它可以用于许多癌症细胞株和一些生物培养的应用。 Onco-CYTE(TM)是EX-CYTE®家族的第二个产品。 ...

相关专题 IFN-α逆转白血病细胞耐药性的实验研究　　第三军医大学学报1999年第21卷第3期张勇　张翼军　夏顺中　周成康　　提　要　目的：了解干扰素-α(IFN-α)逆转白血病细胞多药耐药性(MDR)的作用和可能机制。方法：采用链亲和素-胶体金原位杂交(SAG-ISH)检测了IFN-α孵育前后的52例白血病患者骨髓细胞的多药耐药基因(MD ...

相关专题 1. 如何选用特殊细胞系培养基？ 培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始。 2. 何时须更换培养基？ 视细胞生长密度而定， 或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。 3. ...

相关专题 细胞培养（Cell Culture）专题：http://ask.bbioo.com/special/experiment/Cellculture.htm我现在的方向其实是生物医用材料，我对一次性生物材料的性质还算比较了解。对培养瓶、培养板的重复使用简单的说两句。 一般培养瓶、培养板、培养皿的材质都是生物相容性的聚苯乙烯，且要求具有 ...

相关专题 细胞融合(Cell fusion)或细胞杂交(cell hybridization)是指真核细胞通过介导和培养，两个或多个细胞合并成一个双核或多核细胞的过程。人工的细胞融合开始于20世纪50年代 60年代到70代作为一门新兴的技术 发展非常快 应用范围也极为广泛 除了同种类细胞间可以融合 种间远缘细胞也能融合 细胞与组织不同 ...

相关专题 摘要：据文献报道c2erbB22可以介导细胞凋亡 为检验这一结论是否具有普遍性 用52氟尿嘧啶(52Fu) 诱导小鼠成纤维细胞NC3H10 TC3H10及人乳腺癌细胞MCF27的凋亡. 用Northern印迹法检测c2erbB22的表达状况1结果显示: c2erbB22基因表达在52Fu 作用6 h 开始降低 12 h降低更为明显. ...

相关专题 1．细胞以1.5×105/ml细胞数接种于直径35ml培养皿中（内放置一盖玻片），培养1天，用含0.4％ FCS培养液同步化3天，使绝大多数细胞处于G0期。 2．终止细胞培养前，加入BrdU（终浓度为30μg/L），37℃，孵育40min。 3．弃培养液，玻片用PBS洗涤3次。 4．甲醇/醋酸固定10min。 5．经固定的玻片空气干 ...

相关专题 　　材料与方法　　1. 主要试剂：MTT、XTT、PMS、DMSO（Sigma公司产品)，RPMI　　1640（Gibco公司），氟尿嘧啶（上海旭东海普药业有限公司），注射用盐酸阿霉素（深圳万乐药业有限公司)，注射用丝裂霉素Ｃ（协和发酵工业株式会社），新生小牛血清（杭州四季青公司提供）。　　2. 细胞与细胞培养：人肝癌细胞系 BEL ...

相关专题 1．体外细胞培养结束后，去培养液，加入11％的戊二醛固定，置于振荡器上摇20min。 2．固定细胞用去离子水洗涤至戊二醛液洗净。 3．置空气或烘箱37℃彻底干燥。 4．加入0.1％的结晶紫液对细胞染色，振摇30min。 5．用蒸馏水洗涤，至多余的结晶紫液冲洗干净。 6．置空气或37℃烘箱中彻底干燥。 7．加入10％的乙酸对细胞吸收的 ...

相关专题 1．用含10％小牛血清和抗生素的RPMI-1640培养液将K562细胞配成1×105/ml浓度。用同样培养液将PBMC配成1×106/ml浓度。 2．取96孔圆底细胞培养板，每孔加0.1ml K562细胞悬液；每孔加适量PBMC使效靶比为1：1～5：1，每种处理3个复孔；3个对照孔只加效应细胞；8个对照孔只加靶细胞；4个对照孔只加细 ...

相关专题 1）用淋巴细胞分离液分离PBMC 1．抽取正常人静脉血加到肝素抗凝管中，加2倍量磷酸盐（PBS）悬浮细胞。将此悬液小心加在淋巴细胞分离液上，400×g离心30分钟。 2．离心后红细胞在管底，PBMC在血浆和淋巴细胞分离液的交界面。收集PBMC，用PBS洗涤细胞两次，每次离心150×g 10分钟。低速离心可以减少血小板沉淀，但细胞沉淀 ...

相关专题 根据调亡的生化特征的检测方法 一、琼脂糖凝胶电泳 1）常规的琼脂糖凝胶电泳 方法一： 1．收集细胞（5×106）1000r/min，离心5min，去上清。 2．PBS洗一次，1000r/min，离心5min，去上清。 3．加细胞核裂解液500μl重悬细胞，50℃水浴，3～5h，不时振摇或37℃过夜。 4．加0.5ml平衡酚抽提，上下 ...