细胞技术

版上很多朋友讨论细胞培养问题，见到很多很好的经验总结，这里说一些我个人的经验，因为一些比较特殊的原因，我自己培养接触过近300种细胞，常用于做实验的，累积有百余种，可以说遇到过许多各式各样古怪的细胞。这里挑细胞消化开始做我的第一篇专题，并不是因为细胞消化最重要，而是近期看到大家频繁讨论这个话题，我就抛砖引玉，下面几点拙见，可能与其它朋友总结的一些经验有点出入，仅供大家参考。许多同学对细胞消化做了许多研究，得出了很 ...

什么是HLA-B27HLA即人类白细胞抗原(Human Leukocyte Antigen)。该抗原是人类主要组织相容性复合体（Major Histocompatibility Complex, MHC）的组织抗原（膜相关糖蛋白），在免疫系统中主要负责细胞之间的相互识别和诱导免疫反应，调节免疫应答。HLA基因位于人类第6号染色体上。HLA I类分子包括HLA-A、-B、-C，广泛分布于各组织有核细胞表面；HLA-undefined27就是属于HLA-I类基 ...

【实验目的】 1． 观察肝脏的解剖结构，掌握肝脏的位置、形态特点和体表投影。 2． 观察肝脏的组织结构，掌握肝小叶组成。 3． 观察肝炎、肝硬化和肝细胞癌的病理变化，掌握三者之间的相互联系以及临床特点。 【实验对象】 尸检来源的正常肝脏和组织切片，急性肝炎、肝硬化和肝细胞癌的大体标本和切片。 【实验内容】 1． 肝脏的解剖结构 （1）膈面：肝的上面，借镰状韧带分为左右两叶。 （2）脏面：注意辨认“H”型结构，左纵沟的前后部分别为肝圆韧带和静脉韧带；右纵沟前部为胆囊窝，后部为腔 ...

【实验目的】 1. 了解常规切片的制作过程。 2. 熟悉苏木素－伊红(hematoxylin and eosin，HE)染色方法。 【实验原理】 将各种方法（活检、尸检）获取的组织标本经过一定的步骤处理，做成切片。苏木素是碱性染料，可将细胞核（嗜碱性物质）染成蓝色，伊红是酸性染料，可将多数细胞的细胞质（嗜酸性物质）染成红色，形成色彩鲜艳、结构清晰的组织图像。 【实验对象】　 尸检来源的正常肺组织。 【实验药品与器材】 1. 器材　手术刀、恒温箱、石蜡切片机、显微镜。 2. 试剂　10％福尔马林，梯度酒 ...

【实验目的】 1． 观察肺组织的解剖结构，掌握肺的形态、位置和分叶。 2． 观察肺的组织结构，掌握支气管壁的分层和肺泡的结构特点，了解肺导气部、呼吸部的组成。 3． 观察大、小叶性肺炎的大体标本和组织切片，掌握两者的病变特点及形态的异同点。 【实验对象】 尸检来源的正常肺和组织切片，大叶性肺炎和小叶性肺炎的大体标本和切片。 【实验内容】 1． 肺组织的解剖结构 （1）支气管：支气管由肺门进入肺部，呈树枝状分布。 （2）肺：一尖、一底（膈面）、二面（内侧面、肋面）和三缘（前缘、后缘、 ...

【实验目的】 1． 观察胃的解剖结构，掌握胃的位置、毗邻脏器和淋巴引流。 2． 观察胃和胃癌的组织结构，对比正常胃和胃癌的形态特点。 3． 观察慢性萎缩性胃炎和胃溃疡的形态变化，联系慢性胃炎、胃溃疡与胃癌之间的关系。 4． 观察胃癌和转移的大体标本，联系胃癌的扩散途径。 【实验对象】 正常胃标本和胃底组织切片，慢性萎缩性胃炎、慢性胃溃疡、胃癌和淋巴结转移性腺癌切片，胃溃疡、不同类型胃癌、卵巢转移性肿瘤的大体标本。 【实验内容】 1． 胃的解剖结构　观察胃贲门部、胃体部、胃底部和 ...

（一）流式细胞术在细胞生物学中的应用 流式细胞术最早被应用于生物学研究领域，就是生物细胞周期和动力学的分析。近年来，DNA倍体分析已经越来越广泛应用于临床和基础研究，发挥越来越重要的作用。 1． 有利于肿瘤的早期诊断和鉴别诊断　良性肿瘤或良性增生时不会出现非整倍体细胞（DI＞１），而恶性肿瘤则伴有相当数量的非整倍体出现，相当部分癌前病变也有非整倍体的出现。所以非整倍体细胞是判断肿瘤恶变的一个重要标志。 2． 有利于判断肿瘤的预后　有学者研 ...

（一）不同来源样品的处理 1． 培养细胞 （1）培养细胞用0.25%的胰酶消化。 （2）PBS或生理盐水洗涤细胞2次，再用PBS或生理盐水悬浮细胞，加入预冷的无水乙醇，终浓度为60%～70% ，快速混匀，并用封口膜封口，置4℃下可保存15天左右。 2． 新鲜标本 （1）将标本切成1～2mm3的小块。 （2）PBS或生理盐水清洗后去除上清，加入0.2％胶原酶（或0.15％胰蛋白酶）37℃消化10～30min（根据实验及不同组织确定），并不断振动。 （3）300目尼龙筛过滤， ...

1. 工作原理 流式细胞仪主要由流动室及液流系统、激光器及光学系统、光电管及检测系统、计算机及分析系统四个部分组成，见图18-1。 待测细胞被制备成单细胞悬液，经特异性荧光染料染色后置于专用样品管中，在气体压力推动下被压入流动室，流动室内充满鞘液（不含细胞或微粒的缓冲液），在高压作用下从鞘液管喷出包裹细胞，使细胞排成单列形成细胞液柱，依次通过检测区。液柱与高度聚焦的激光束垂直相交，被荧光染料染色的细胞受到激光激发产生荧光信号 ...

一、原代培养及其操作步骤 原代分离细胞培养是指从供体内取出组织后，经机械以及消化分离成单个细胞或单一型细胞群，使之在体外模拟人体生理环境，在无菌、适当温度和一定的营养条件下，生存、生长和繁殖。原代培养细胞常有不同的细胞成分，生长缓慢，但是更能代表所来源的组织细胞类型和表达组织的特异性特征。利用原代细胞培养做各种实验，如药物测试、细胞分化及病毒学方面的试验效果很好。其操作步骤如下。 1. 剪切组织　先将所取得的组织，用D-Hanks ...

细胞接种或传代以后，实验者每天或至多间隔1～2d，要对细胞做常规性检查。观察细胞形态和生长情况以及培养的pH变化、有无污染等。根据细胞动态变化，做换液或传代处理，如发现异常情况应及时采取措施。 1. 细胞形态　生长状态良好的细胞，在一般显微镜下观察时可见，细胞透明度大、折光性强、轮廓不清。细胞生长不良时，轮廓增强，胞质中常出现空泡、脂滴和其他颗粒状物，细胞之间空隙加大，细胞形态可变得不规则甚至失去原有特点，如上皮细胞变成类上皮细 ...

一、清洗 新采用和重新使用的培养器皿，都要严格清洗，以防各种有害物质对培养细胞损害。培养用的塑料器皿目前主要依靠进口，均已无菌密封包装，可直接使用。对于塑料瓶盖或胶塞等，可水中浸泡后用2％NaOH煮沸10～20min，自来水中浸泡和蒸馏水漂洗2～3次，晾干备用。细胞培养中的绝大部分器皿系玻璃制品，清洗过程为以下步骤。 1. 浸泡　新使用或重复使用的玻璃器皿须经5％盐酸溶液或自来水浸泡过夜或煮沸30min，水洗。以去除新购进玻璃器皿所 ...

细胞治疗是将人体细胞经体外培养、诱导增殖活化后回输入人体的一种治疗肿瘤等疾病的方法，因安全有效，并能提高生活质量而广为人们所关注和采用。细胞治疗离不开细胞培养，而培养过程中细胞因子或活性蛋白的加入不可或缺，这些细胞因子或活性蛋白目前基本上都是重组表达而来。对于原核细胞表达，培养时需在培养基中加入蛋白胨。而真核细胞表达时，则需在培养液中加入牛血清。蛋白胨和牛血清都是动物成分，因此用传统表达法表达出来的细胞因子或 ...

3D（三维）细胞培养使细胞聚集生长，形成组织样结构，更好的模拟体内生理状况。瑞士insphero公司的3D细胞培养技术无需使用支架介质，通过悬滴法给细胞提供一个更加接近体内生存条件的微环境，使细胞形成3D微组织，从而更好地模拟体内细胞生长情况，更直观的反映细胞生物学和功能，更准确的构建靶组织模型。InSphero公司的3D细胞悬滴培养板使用的是GravityPLUS™自动悬滴板，使用这一平台将自己的细胞培养成 ...

上海大学生命科学学院、上海市能源作物育种及应用重点实验室的研究人员证实，玉米Pro1基因(Zm P5CS2)的突变造成了突变体细胞中脯氨酸(proline)合成受阻，从而导致proline积累的减少。突变体中proline的缺乏引起了相应的转运RNA(tRNApro AGG)空载形式(uncharged tRNApro AGG)的增多，从而激活了细胞中的GCN2激酶，该激酶通过磷酸化真核生物翻译起始因子eIF2α从而抑制了细胞 ...

操作步骤（Roche公司）1.用二甲苯浸洗2次，每次5min；2.用梯度乙醇（100、95、90、80、70％）各浸洗1次，每次3min；3.PBS漂洗2次；4.用ProteinaseK工作液处理组织15-30min在21–37°C或者加细胞通透液8min；5.PBS漂洗2次；6.制备TUNEL反应混合液，处理组用50μlTdT＋450μl荧光素标记的dUTP液混匀；而阴性对照组仅加50μl荧光素标记的dUTP液，阳性对照组 ...

别再让你培养的细胞睡在硬板床上了！！众所周知，体内细胞所处周边环境的软硬度(softness，stiffness)可谓千差万别，凭直觉想想脂肪细胞和骨细胞吧。可是我们体外培养细胞时却选择使用了几乎相同的材质，硬邦邦的培养皿、板或培养瓶。你可能说：“这没啥呀，大家不都是这样做的吗？我的细胞也长的挺好呀！”别再固执的认为细胞生长在“硬板床”上对其没有什么影响了，大量的研究表明细胞所处环境的硬度对其生物学行为影响可谓相当的 ...

UltraGROTM 细胞营养添加物具备以下优点：_血清替代物_非动物来源_适用于初代培养及继代培养_细胞倍增时间24小时_节省时间及成本无血清/非动物来源 细胞营养添加物UltraGROTM 富含生长因子，经实验证能替代多种市售的细胞营养添加物在各种间充质干细胞的培养有极佳表现效果来自美国最先进制造技术每批次UltraGROTM皆经过间充质干细胞培养测试批次间稳定性高牛血清/动物蛋白添加物的缺点• 许多已知或未知的病原传染风险。• 异种 ...

一、细胞冷冻保存1.材料生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO(SigmaD-2650)、无菌塑料冷冻保存管(Nalgene　5000-0020)、0.4％（w/v）trypanblue(GibcoBRL15250-061)、血球计数盘与盖玻片、等速降温机(KRYO10SeriesII)2、冷冻保存方法（1）传统方法:冷存管置于4℃10分钟----20℃30分钟----80℃16～18小时(或隔夜)---液氮槽vaporphase长期储存。-20 ...

r&d Systems如今提供两种新的无血清培养基添加剂，是专为神经细胞的培养而优化的。N21-MaX Media Supplement:适合无星形胶质细胞滋养层的神经元长期培养无血清培养基添加剂，与神经细胞培养的基础培养基共同使用，为神经元的长期培养提供了一个营养丰富且完全限定的培养基，而无需星形胶质细胞滋养层。N21-MaX Media Supplement包含21种不同组分，以支持培养中神经元的长期生存。它经过验证，可支持 ...