流式细胞术的应用

（一）流式细胞术在细胞生物学中的应用

流式细胞术最早被应用于生物学研究领域，就是生物细胞周期和动力学的分析。近年来，DNA倍体分析已经越来越广泛应用于临床和基础研究，发挥越来越重要的作用。

1． 有利于肿瘤的早期诊断和鉴别诊断　良性肿瘤或良性增生时不会出现非整倍体细胞（DI＞１），而恶性肿瘤则伴有相当数量的非整倍体出现，相当部分癌前病变也有非整倍体的出现。所以非整倍体细胞是判断肿瘤恶变的一个重要标志。

2． 有利于判断肿瘤的预后　有学者研究发现恶性肿瘤组织学分级越高，出现非整倍体或异倍体的比例越大，更容易出现转移，预后也越差。

3． 有利于判断药物对细胞周期的影响　流式细胞术可以快速判断药物作用细胞周期的时相，结果客观可靠。例如推测某种药物作用于细胞的DNA合成期，通过流式细胞仪的检测，发现G2/M期数量减少，则有力地支持了推测的正确性。

（二）流式细胞术在凋亡研究中的应用

应用流式细胞仪检测凋亡细胞是细胞凋亡研究的新手段，常用方法有：

①碘化丙啶(PI)染色法是目前最常用的方法。由于凋亡细胞DNA被降解，导致对DNA染料着色能力下降，用PI荧光染料对DNA降解进行测定，分析细胞周期的改变，观察是否有亚二倍体细胞出现。②连接素Ⅴ（Annexin V）/PI双染色法：早期凋亡细胞因细胞膜的磷脂对称性改变而使磷脂丝氨酸暴露于细胞膜外，而Annexin V对PS有极强的亲和性，PI对凋亡早期细胞膜完整的细胞拒染，而凋亡晚期的继发坏死细胞可同时被AnnexinⅤ与PI标记，正常活细胞均不被二者染色。因此利用流式细胞仪可作双参数测定，定量分析正常活细胞、坏死细胞和凋亡细胞数。

（三）流式细胞术在免疫学中的应用

1． 淋巴细胞表面标志的检测。

2． 流式细胞术在白血病和淋巴瘤免疫分型中的应用。

3． 流式细胞术在血栓与出血性疾病中的应用：①血小板功能的测定；②血小板相关抗体的测定。

4． 通过FCM检测移植后CD34＋/CD33＋造血干细胞。

思 考 题

1． 如何获取满意的流式细胞术样品？

2． 流式细胞术在肿瘤学中有哪些方面的应用？

（张文敏）