细胞技术

细胞凋亡的定性检测依赖于形态学观察及DNA电泳其定量检测则需借助于流式细胞检查。使用碘化丙啶(PI)染色检测DNA含量是最早出现的凋亡定量检测方法［1］。进入90年代检测DNA断裂点的TUNEL(Terminal deoxylnucleotidyl transferase mediated-dUTP nick end labeling)技术成为凋亡定量检测的主流。1995年Vermes 首次使用荧 ...

简介随着研究的进展，仅仅对细胞进行定量和活性的检测已不能满足需要。在单细胞水平研究细胞因子的表达能力对研究细胞因子在疾病中的作用越来越显的重要无比。目前检测单个细胞特定细胞因子的表达手段包括：ELIspot、原位杂交、免疫细胞化学、限制性稀释分析（limiting dilution analysis，LDA）和单细胞PCR，应用原位杂交技术和免疫组化方法观察细胞因子蛋白表达及mRNA表达可以识别T ...

基本原理细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面，目前早期识别仍有困难。这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸（PS）从细胞膜内转移到细胞膜外，使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂，正常主要存在于细胞膜的内面，在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS暴露在细胞膜外。Annexin V是一种Ca+依赖的磷脂结合蛋白，最初发现是一种具有很强的抗凝血特性的血管蛋白，Annex ...

1.我们实验室最近一次的情况:我们前后从上海细胞中心买了三批细胞，细胞刚到的时候，观察均生长良好，密度适中，培养液清亮，也没有见小黑点，但是对细胞传代以后就陆续出现多少不等的小黑点，有时候在一夜之间暴长，给培养液加庆大霉素，也无济于事，对贴壁细胞用生理盐水及D-hanks液冲洗七遍后见减少，但是随后几天又出现，刚开始怀疑操作有问题，但是由有经验的老师操作也出现这种问题，陆续对培养液，血清及胰酶进行 ...

MTT实验是检测细胞活力的实验方法，由于细胞活力与细胞数呈正相关，因此也常常用来检测细胞的增殖情况。MTT的原理：活细胞有琥珀酸脱氢酶，将MTT还原成棕褐色沉淀。由于一般介绍园子里已经很多，笔者将自己的心得按照实验流程与大家交流交流。1、培养好细胞点板。养细胞没啥好说的，如果不知道细胞如何养，那就看看相关的文献方法。如果知道了细胞的名字，就可以上www.atcc.org检索细胞的培养信息，这个网站 ...

估计养细胞者，很多人遇到过所谓的“黑胶虫”。最近养细胞，不幸的是，也中奖了，看到培养瓶里仿佛一夜之间冒出来的密密麻麻的小黑东西，真是有苦难言，因为曾在园子里看过有关“黑胶虫”的帖子，不好对付，没有有效的杀灭方法，据说有专杀培养基，但又有什么好的方法可以消除实验室和培养箱内的污染呢？紫外照射、甲醛高锰酸钾熏蒸------这些方法不知其对“黑胶虫”的确切效果，有些对人有毒害，有没有一种方法，即能杀死“ ...

四唑盐（MTT）比色法仅供参考 MTT常用浓度为5mg/ml;向大家推荐一本书《动物细胞培养--基本技术指南》注：此书中MTT浓度为50mg/ml1、药物的细胞毒性四唑盐（MTT）比色法操作步骤接种细胞（1）用胰蛋白酶消化汇合的单层细胞，将细胞收集到含血清的培养基中。（2）离心细胞悬液使细胞沉积下来。用培养基重悬细胞，计数。（3）将细胞稀释至2.5×103-50×103 个/ml每个微滴定板可容纳 ...

以兔软骨细胞为例：①一般根据实验要求，选取不同年龄组的兔子，实际上兔子的年龄越小越好，毕竟幼体组织的活力要高于成体组织的活力，耳静脉空气注射法处死后无菌条件下分离后肢关节软骨和肋软骨，剥离包裹软骨组织的筋膜和软骨膜，放入盛有PBS液的培养皿中。②将分离得到的软骨组织剁碎成0.3-0.5mm的组织块，移入25cm2培养瓶，用含双抗的PBS液冲洗软骨3次。③加入软骨体积10-15倍的0.25%胰蛋白酶 ...

1：接种细胞：用含10％胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔1000－10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200ul.2:培养细胞：同一般培养条件，培养3－5天（可根据试验目的和要求决定培养时间）。3：呈色：培养3－5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS 配)20ul.继续孵育4小时，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。每孔加150ul ...

在细胞实验室，有很多经验很难总结在书本上，但是与整个实验的成功却密切相关，现在建立新贴，想到哪里说道哪，随时补充并建议高手随时添加内容，大家共享自己实验中积累的小窍门。1）细胞冻存管一般有1.5-2ml左右体积，原则上可以存放1.5ml充满均匀悬浮细胞的冻存液，一些人喜欢灌注1-1.5ml冻存液冻存，这实际上并不好。原因如下：冻存液冻存需要一段时间，如果这段时间冻存管倾斜，液体容易流到管口，很容易 ...

Hippocampal Neuron Cultures (and mixed cortical cultures)Submitted by: Jean Siao Ph.D.Begin by timing the pregnant mouse at E17-E19 days of gestation. Have ready the following:1.Cold Hank’s balanced ...

MTT实验是检测细胞活力的实验方法，由于细胞活力与细胞数呈正相关，因此也常常用来检测细胞的增殖情况。MTT的原理：活细胞有琥珀酸脱氢酶，将MTT还原成棕褐色沉淀。由于一般介绍园子里已经很多，笔者将自己的心得按照实验流程与大家交流交流。1、培养好细胞点板。养细胞没啥好说的，如果不知道细胞如何养，那就看看相关的文献方法。如果知道了细胞的名字，就可以上www.atcc.org检索细胞的培养信息，这个网站 ...

原代椎间盘细胞培养其实并不太难，但培养时间相对较长，所以容易出问题。1 选材很关键选用胎儿椎间盘进行原代培养相对容易一些，可利用反复传代的方法来制作退变模型。直接选择人退变椎间盘进行培养时（一般选择手术摘除的椎间盘），患者的年龄及间盘的退变情况必须充分考虑在内。若年龄偏大，间盘退变很严重，培养的难度相应增大。20－50岁之间的患者都可采用。如果实验需要进行纤维环和髓核细胞的分别培养，在取回间盘时需 ...

细胞培养中常见的污染情况总结如下:常见的污染如下：1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！可在培养液中加相应的抗生素 ...

1，我取脑的时候是用双镊，先用一把夹住头部，另一把在人状缝下面撕开，要特别小心，别弄出血来，因为出血的话取出的脑组织含血块就会比较多，离心的时候可以看出来，不知各位同仁有没有更好的方法。2，尽量去除脑膜和血管，PBS清洗干净，胰酶消化37度10-15分钟消化中止按每10ml胰酶加1ml血清。3，玻璃培养瓶差速30-40min过滤75－100um滤网，种植，其实我不大看细胞密度，感觉差不多就好了，呵 ...

原代培养细胞，关键是消化，我一般酶液是新配的，要足量啊（又一次还剩三排的时候，一同学把酶液碰到水浴锅，害的我借得酶液，耽误了时间，而且组间数据紊乱，最后浪费细胞和染料，大家要注意保护好酶液啊），这样每次心理都有底，而且放入水浴37度30min，甚至扔到培养箱（不建议采用）升温。消化前，用温PBS轻洗细胞，一次，然后开始消化，24孔板加400ul酶液（0.25%胰酶和0.02%edta，如果你的ed ...

一、流式细胞术发展简史　　流式细胞术（Flow Cytometry FCM）是一种可以对细胞或亚细胞结构进行快速测量的新型分析技术和分选技术。其特点是：①测量速度快，最快可在1秒种内计测数万个细胞；②可进行多参数测量，可以对同一个细胞做有关物理、化学特性的多参数测量，并具有明显的统计学意义；③是一门综合性的高科技方法，它综合了激光技术、计算机技术、流体力学、细胞化学、图像技术等从多领域的知识和成果 ...

细胞凋亡（Apoptosis），又称细胞程序性死亡（PCD: Programmed Cell Death），是指细胞在一定的生理或病理条件下，遵循自身的程序，自己结束其生命的过程。它是一个主动的，高度有序的，基因控制的，一系列酶参与的过程。细胞凋亡概念提出至今还不到30年的时间，但由于它在保证多细胞生物的健康生存过程中扮演着关键角色，对个体的正常发育及细胞凋亡紊乱在病理学研究中的重要作用，引起了人 ...

细胞凋亡的定性检测依赖于形态学观察及DNA电泳其定量检测则需借助于流式细胞检查。使用碘化丙啶(PI)染色检测DNA含量是最早出现的凋亡定量检测方法［1］。进入90年代检测DNA断裂点的TUNEL(Terminal deoxylnucleotidyl transferase mediated-dUTP nick end labeling)技术成为凋亡定量检测的主流。1995年Vermes 首次使用荧 ...

The Light Microscope (House Ear Institute)An explanation of how the light microscope works how to use it and how to get optimal results when using it. Photomicrography(Bowtell Lab) Immunolabeling fo ...