细胞技术

一、材料：125I-UdR购自中科院北京原子能所，放化纯度95%。脱氧腺苷（AdR）、脱氧鸟苷（GdR）、脱氧胞苷（CdR）、脱氧尿苷（UdR）均为Sigma公司产品。二、方法1、细胞培养：当癌细胞贴壁生长超过瓶壁的70%，用胰蛋白酶消化30-40s，传代培养。肿瘤细胞每3-4d传代1次。在50ml培养瓶中，细胞数达2×106个细胞后，取处于对数生长期的细胞进行细胞存活实验。2、细胞存活实验：将制 ...

1）取新生一周内大鼠，碘酒、酒精浸泡消毒后快速断头；2）用眼科剪和镊剪除皮肤和颅骨，分离皮肤和颅骨时用不同的器具，弯剪剪取部分大脑皮层至60mm培养皿，培养皿内提前放置D-Hanks溶液；3）解剖镜下取出脑膜及血管，转移组织至另一盛有D-Hanks溶液的器皿，将组织剪碎为1mm3左右的小块，然后小心转移至带螺帽的离心管内；4）0.125%胰酶消化15-30分钟，以含10%胎（小）牛血清的DMEM培 ...

1. 高脂＋STZ法：ＳＤ大鼠购进后适应环境2周。随机分为3组:正常对照组、高脂饮食组和高脂饮食+ＳＴＺ组每组10只。正常对照组:喂以普通饮食其中碳水化合物60%蛋白质22%脂肪10%其他8%。高脂饮食组及糖尿病组:喂以高脂饮食其中碳水化合物40%蛋白质13%脂肪40%其他7%。糖尿病组高脂饮食喂养4个月后一次性腹腔注射ＳＴＺ15ｍｇ (ｋｇ・ｂｗ)其他两组腹腔注射柠檬酸缓冲液并继续高脂喂养。注射 ...

采用美国Radnoti公司Langendorff离体心脏灌流系统，观察离体心脏功能变化，可排除其它组织器官、循环代谢产物的干扰。实验步骤：A.配制37℃ K-H液（1.25 CaCl2，130 NaCl，5.4 KCl，11 葡萄糖，0.5 MgCl2，0.5 NaH2PO4及25 NaHCO3），向K-H液中通入95％O2-5% CO2气体，缓冲液PH 值为7.4，并取部分K-H液放入冰箱中 ...

所选动物：大耳白兔，体重1－3KG。复制方法：采用腹部敷贴法感染采自钉螺的血吸虫尾蚴。兔腹部剪毛，约1CM2，滴以含尾蚴液，使每只兔感染180－200只尾蚴，玻片覆盖15MIN形成机型感染，3个月后形成血吸虫性肝纤维化。模型特点：肝内门静脉分支与门脉区纤维增生，门脉周围硬化产生门脉阻塞。该模型门静脉系统血流动力学改变明显，故非常适用于门静脉高压症的研究。但是不适用于其他类型人类肝纤维化。 相关动物 ...

1 　材料　地塞米松磷酸钠注射液(江苏第三制药厂批号000706) ;RPMI - 1640 培养基(GIBCO USA)(每升含10 %小牛血清、L-谷氨酰胺0. 33mg、青霉素100u、链霉素100u、pH-7. 4) ; 胰蛋白酶(Difco Lot :12885655) ; 四甲基氮唑盐(MTT) ( FLUKA Switzerland) ;FLUO-3/ AM(CALBIOCHEMC ...

细胞活化� 1. 收到细胞株包裹时， 请检查细胞株冷冻管是否有解冻情形， 若有请立即通知。细胞 株请尽速开始培养， 或立即冷冻保存(置于�70 °C， 隔夜后， 移到liq N2)。 2. 冷冻细胞解冻程序: 2.1. 依据细胞株数据单指定之基础培养基种类、血清种类和其它指定之成份和比 例， 制备培养基。绝大多数之细胞均无法立即适应不同之基础培养基或不同之 血清种类， 若因实验需要， 必须有所不同 ...

细胞培养是现代生物学研究中应用最为广泛的技术之一。它的突出优点，一是研究对象是活的细胞，可长时期地监控、检测甚至定量评估其形态、结构和生命活动等；二是可以人为地严格控制研究条件，便于研究各种物理、化学、生物等外界因素对细胞生长、发育和分化等的影响，有利于单因子分析；三是研究的样本可以达到比较均一性。常用的细胞系均是性质均一的细胞，需要时还可采用克隆化等方法使细胞进一步纯化；四是研究的内容便于观察、 ...

一、反复冻融法：1、将细胞在-20度以下冰冻，室温融解，反复几次，由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。2、至少3次以上冻溶。3、IFCC推荐法：收集细胞悬液，4℃低温离心（3000rpm，5min），弃上清，加入一定量PBS（200ul），轻轻吹打混匀，-200C 冷冻30 min，370C 解冻，如此反复3次，可形成细胞裂解液。4、用液氮冻融三四次就可以了，细胞冻 ...

染色体分裂指数低：患者处于非常时期（感染期、放、化疗期）：　　　　　　　　　　　培养基营养成份不良；　　　　　　　　　　　培养基PH偏低或偏高；　　　　　　　　　　　PHA过量或不足；　　　　　　　　　　　小牛血清质量不高；　　　　　　　　　　　小牛血清数量偏低或过高；　　　　　　　　　　　培养温度不稳定； 　　　　　　　　　　　培养箱温度偏低；　　　　　　　　　　　秋水仙素处理时间过短；　　　　 ...

Freezing Embryonic Stem (ES) Cell Clones in 96-Well Plates the Laboratory of Dr. Allan Bradley Baylor College of Medicine Houston Texas 冻存96空板中的胚胎干细胞克隆Freezing Embryonic Stem (ES) Cell Clones in 96-W ...

目前尽管Alzheimer病(AD)的分子遗传学和分子生物学的研究中发现了4种与AD有关的基因如APP的突变、AD3、STM2、ApoE等，但导致AD发病的关键机理尚不很清楚而建立与之互为因果的真正AD模型尤为重要。本实验采用MR I、γ2刀立体定位射频热凝损毁老年猴脑的穹隆2海马伞并通过检测其tau及APP蛋白、乙酰胆碱酯酶( acethyl2cholinesteraseAchE) 、胆碱乙酰转 ...

概述树突状细胞（DC）的主要功能是吸收抗原，进行加工，并向T淋巴细胞呈递。其它抗原呈递细胞也有此功能，如B淋巴细胞和单核细胞。但是，与其它细胞不同的是，DC细胞具有诱导初发免疫反应的独特功能，例如，可以活化处女T细胞（Naive T cell）。DC细胞存在于外周淋巴组织中，已在血液和非淋巴器官中发现了不同类型的DC细胞，并被认为是淋巴组织中细胞的前体。由于血液和组织中DC细胞含量少，且缺乏特异的 ...

实验动物及分组：选用健康SD 雄性大鼠32只体重280～330 g 将其随机分成A 、B、C、D 4 个组A 组即对照组鞘内注射( IT) 生理盐水。模型组:B 组鞘内注射0. 5 % AlCl3 C 组鞘内注射1. 0 % AlCl3 D 组鞘内注射1. 5 % AlCl3 5 d 后拔管单笼饲养28 d。AD 动物模型建立方法及判定蛛网膜下腔插管及给药方法采用Yaksh 法 。AD 动物模型成 ...

1.Hypovolemic shock（MODS Multiple organ dysfunction syndrome）： 低血容量性休克模型Wistar大鼠，4. 5 %异戊巴比妥(80 mg/ kg )？ 在25 ℃室温下腹腔内给药麻醉?右股动脉插入套管针 连接多导生理记录仪监测血压;左颈静脉插入套管针给予甘氨酸、生理盐水和自体血(复苏通路) ;右颈动脉插入套管针另一端连接肝素化玻璃注射器中 ...

【细胞种类】小牛肺动脉平滑肌细胞第5代；【培养液】含15％FBS的MEM液；【固定方法】70％酒精固定；【染色方法】PI单染法；【具体步骤】1、接种：以1undefined5/ml密度（活细胞）接种，加培养液；2、同步化：24h后加不含FBS的MEM进行同步化12－24h；3、加因素：弃MEM液换等量的培养液，加药物等因素培养到指定时间；4、消化：用不含EDTA的0.25％胰酶进行消化，离心（2000转5min ...

前阵子做单抗，做了几次细胞融合都没做出来，后面怀疑是SP2/0受支原体污染，细胞生长速度减慢，出现细胞碎片，换液后情况稍好。怀疑受污染后我对细胞做了一系列的处理，终于有一种处理成功地削除了支原体污染，细胞融合也成功了，现在单抗已经做出来。现在想把我的处理方法贴出来，希望对一些遇到同样问题的朋友有用。处理方法：以两种抗生素交替使用，第一种是2-3倍于正常浓度的双抗（青霉素、链霉素），第二种是10ug ...

最近第一次养细胞就养成功了非常高兴发上来跟大家分享养细胞主要是无菌我用得是组织块消化法首先要把培养用的DMEM和PBS 用过滤法抽吸式过滤一下取材时注意无菌150克的大鼠用7毫升的1%戊巴比妥消毒用DMEM反复清洗用眼科剪刮去外膜剪开血管用棉签刮去内膜的脂滴再用眼科剪剪成碎块铺到培养瓶里均匀铺开滴少许含20%FCS的DMEM湿润一下然后再加3---5毫升的DMEM(含20%FCS)到培养瓶内使铺组 ...

1.什么是细胞转化？何时会发生细胞转化？　　细胞转化是细胞发生遗传性状改变的一种变化，它的基础是DNA或基因的突变。从属性上说，基因突变导致生物体发生的转化，有利于生物体的转化，也有不利于生物体的转化（例如癌变）。　　在体外培养的细胞，受到致突变作用时便可发生转化，凡能诱发DNA（基因）结构改变的因素均视为诱发因素，有物理因素（如射线）、化学因素（MNNG）、病毒（EBV、SV40）、癌基因也是， ...

一、原理黄色的噻唑兰，简称MTT，可透过细胞膜进入细胞内，活细胞线粒体中的琥珀脱氢酶能使外源性MTT还原为难溶于水的蓝紫色的针状Formazan结晶并沉积在细胞中，结晶物能被二甲基亚砜（DMSO）溶解，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映细胞数量。二、实验步骤（实用于贴壁细胞）1）收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，分于96孔板，每孔180μl，3000-10000个/孔 ...