细胞技术

songland 以往的染料划痕试验可以测定GJC功能，但已证明效果不佳，现在还有新的方法吗？求详细可行的操作方法本人目前唯剩下25个丁当，不足感谢热心的仁兄仁姊。lianzit 电偶联，经过放射性活性代谢物转移的代谢协同，微注射和荧光染料的转移，刮除负载与荧光染料的转移，荧光光漂白后的恢复。你可以直接百度或者在图书馆上搜！ishow11 利用激光扫描共聚焦显微镜结合荧光漂白恢复技术检测GJC效果不错本文由丁香园论坛提供 ...

luking2006 我用H9C2心肌细胞系做心脏的自噬研究，想请教细胞系传代次数多30代，会对实验结果造成影响吗？看到有文献说细胞系传代多了会引起基因表达的改变。是这样吗？很急切，先谢谢大家了。我前期用传代多的细胞系做出的实验结果和大体的不一致，不知是不是这个原因。anyi63 我们用的是h9c2细胞株，细胞系是细胞株50代以后遗传突变带癌细胞特点，有可能在培养条件下无限传下去cxc11 战友：你们在哪里，我需要这个细 ...

栽梧桐等凤凰 请问细胞系表达的蛋白能否用来包被酶标板，进行单克隆抗体的筛选。就怕目的蛋白的含量不够高，做ELISA时阴性阳性做不出差异。hahadongwr 可以用来包被。你可以先对表达的蛋白进行纯化，而后测定纯化后蛋白的浓度，1-5ug/mL的浓度便可以进行后期的包被和ELISA检测。devil123 同意楼上的，一般利用杆状病毒等表达系统进行蛋白表达，产物可以用Elisa检测，如表达量低的，可以考了做westen，更敏感 ...

fancygirljj 课题是研究发病机制的，打算做有关信号通路方面的实验，但一头雾水，对这个领域十分陌生，不知该从何下手呢？请教各位高人~~感激不尽~~~fancygirljj 在下实在是个level zero,请各位不吝赐教~~~怎样找到我要研究的受体的信号通路呢？fancygirljj 自己顶一下~本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiong ...

zhuzixiang HCT116 colon cancer cells and HCT116 p53-/- cells。请问国内哪里有这两种细胞？愿意交换或者购买。谢谢！版主woxingwosu留言:到丁香通看看？xxiaozhi 同问，谢谢！tangwt1988 我这有HCT116。可我在上海sfwsdfsdf 同问，大约要多少钱呢？juebizhidian 请问楼上现在手里有没有这两种细胞啊？ 我的实验刚好也要用到他们cpuyao juebizhidian wro ...

xiujing_001 各位高手：我正在做信号通路，请问如何知道一个蛋白的磷酸化位点，比如PERK（protein kinase R-likeendoplasmic reticulum kinase）？多谢了！biolinkphilic 一般蛋白的磷酸化位点就是位于苏氨酸、丝氨酸和酪氨酸上xiujing_001 有查找磷酸化位点的工具吗？比如软件之类的本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成 ...

米迷二号 如题！大家帮帮忙啊！George2 我们经常用HEK293细胞做基因转染实验，事实上，该种细胞还是挺好转染的，我们用过Lipofeacmine2000(Invitrogen公司的)，还用过磷酸钙沉淀法（自己配制和试剂盒都用过），转染效率都很高，也很方便。hermer fugeneanniegood 我们用过磷酸钙和威格拉斯的转染试剂，磷酸钙试剂可以自己配制，物美价廉没有毒性。只要PH值调准，操作手法熟练呵呵转染效果是很 ...

256k 实验要抽血，提取血中的单核细胞、巨噬细胞、DC细胞，然后提取RNA。------------------------------------背景线。提取RNA不可能一次成功，如果多次做就要反复抽自己的血，太血腥也太打击积极性了。我设想：能否，分离出的单核细胞扩大培养，再传几代，以扩大细胞数目。问题：单核细胞能传代么？能扩大培养么？ningmeng1119 提取出来后你可以把细胞保存起来，需要的时候拿出来复苏直接提取RNA，可以试一下256k 谢谢 ，这也是 ...

zhoujz 伽马-分泌酶抑制剂DAPT的中文名字及价格。望各位江湖救急。谢谢！chayeerkaishui N- ［N- ( 3， 5- difluorophen-acetyl) - L- alanyl］ - S- phenylglycinet- butyl ester)氮- - S - 苯基甘氨酸丁酯reyesa http://www.selleck.cn/products/DAPT-GSI-IX.html这个公司国内有现货。可以打折的。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫 ...

yuhuashieasy 要用Compound C进行腹腔注射，sigma说Compound C在DMSO中的溶解度5mg/ml，但DMSO用于动物的浓度不能太高，按照这个溶解度的话，药液要稀释很多倍才能注射，可腹腔注射又不能太大量怎么办啊?Compound C的溶解度最大有多少啊？怎么办啊?Compound C的溶解度最大有多少啊？请各位做过的或者知道的大侠帮帮忙，很急，多谢了！vetboss yuhuashieasy wrote:要用 ...

青鸟使者 小弟最近在研究VEGFR2的一个小分子抑制剂，请问高手，使用20ng/ml 的VEGF刺激HUVEC细胞前需要去血清饥饿细胞吗？如果需要，要饥饿多长时间？青鸟使者 求助啊，有人知道吗？snowwinds 我们养的是肺上皮细胞。一般是无血清培养24h后加刺激因素。lij_try 青鸟使者，你好，我一直找不到HUVEC细胞，请问您能否送我一株该细胞？我的邮箱是:lij_try@163.com 方便告诉我您的联系方式吗？十分感谢！yin ...

观天 有用钒酸钠（sodium orthovanadate）、氟化钠（sodium fluoride）做细胞培养抑制磷酸酶活性的吗？（不是提蛋白的cocktail）请问使用浓度是多少？有一篇paper配的钒酸钠stock pH=10,需要这么高吗？同一篇paper又-80°C保存，-20°C容易降解吗？观天 已经知道了。wangyananxy 同问，求楼上解答！谢谢观天 使用浓度因细胞而不同，可用MTT确定；配制：stock pH=10时以单体形式存在； ...

364587256 先谢谢各位大虾，小妹实验室新手，想做某个药物对EMT途径的抑制作用，涉及抑制PI3K/AKT途径。现在打算采用如下设计方法，**指正（作为硕士毕业论文）。1. TGF-beta刺激上皮细胞发生上皮间质转化（EMT），测上皮细胞指标（较无TGF-beta刺激组下降），间质细胞指标（较无TGF-beta刺激组上升），pAKT, AKT（较无TGF-beta刺激组升高）。2. 加入药物后，再次测上述指标（该药物是抑制EMT作用的） ...

wwdcom2 wwdcom2 这一现象已被重复很多次，也被其他学者所证实具体是这样的oxLDL刺激内皮细胞后，引起TGF-beta的表达增加，下游Smad3磷酸化并入核，在核内聚集。而TGF-beta/Smad3信号通路抗炎作用也已达成共识。可是没有学者给出oxLDL刺激后该信号通路增加后，与炎症蛋白同步的解释。我给老板的解释是oxLDL刺激后，诸如AP-1\NF-KB不能无限增加，而对抗因素-也就是诸如TGF-beta ...

紫琳儿 大家好，我想请教大家一个问题：今儿上午在实验室将 100mg TPCK和 1mg的 PD98059分别溶于1ml DMSO 溶解之后，将其抽取0.5ml加入到1.5ml的无血清RPMI-1640培养液中，TPCK立马就发生化学反应生成粉红色的混浊物。而PD98059静置几分钟后也变成了黄色的混浊物。但是之前PMA也是同样的方法先溶解于DMSO，再溶解无血清RPMI-1640培养液 中。没有浑浊现象发生。问题：1、为什么？2、如果我都用D ...

magichunter 我在文献中查到，PPARr拮抗剂GW9662可以抑制药物的抗炎作用，前提是药物是通过激活PPARr来实现其抗炎作用的。即炎症细胞中的炎症因子（如：NO）升高，加入抗炎药物后，NO水平降低，当同时给予GW9662和该抗炎药物时，该药物的抗炎作用被抑制，NO水平再次升高。以上是文献的报道，但是我在实验时发现，加入了抗炎药物+GW9662后，NO的水平不但没有升高，反而降低了（与单独抗炎药物组相比），不 ...

阿兰梦 之前没有做过，只是根据文献的简单描述依葫芦画瓢，但是毕竟是好几千的试剂，生怕弄错了临床医生一下子做科研，确实很多地方不懂，很艰难目的是想用双荧光素酶报告基因的方法检测药物内皮细胞的NF-KB的转录活性影响，需要买pNF-kB-Luc 报告质粒，碧云天有；然后需要双荧光素酶报告基因检测系统，promega有；另外还需要一个内参，文献是β-半乳糖苷酶问题是：1、不知道买哪一个对：http://www.promega.com. ...

阿兰梦 看了文献测活性RhoA 有几种方法：1、经典的，是放射标记γ32-P-GTP 方法，因为放射性，现在不怎么用了。2、看到国内有文献，采用分离胞膜胞浆，然后用抗RhoA抗体做western。这是基于胞浆都是GDP-RhoA，胞膜是GTP-RhoA的原理，但是总觉得有什么不对的地方？为什么没有被广泛采用？3、现在多采用 pull down方法，RhoA-GTP与Rhotekin的RBD结合，最后用RhoA抗体检测沉淀物中RhoA-GT ...

lilyfisher 半胱氨酸和同型半胱氨酸是不是同一个物质，或者说它们结构上有什么区别，谢谢slytjiaofei 当然不是同一个物质，可以参考人卫版生化中氨基酸代谢一章！！！lmnsmu 半胱氨酸与同型半胱氨酸不同，同型半胱氨酸 比半胱氨酸多一个CH2，同型半胱氨酸是甲硫氨酸脱去-SH上甲基后的产物。甲硫氨酸（蛋氨酸）在甲硫氨酸循环中首先活化生成S腺苷甲硫氨酸，提供甲基后转变成S腺苷同型半胱氨酸，然后脱腺苷生成同型半胱氨酸 ...

lilyfisher 黄嘌呤有可以有不同的2种分子式？谢谢。lx7051178 一看就是有机化学没学好。酮式和烯醇式互变异构听说过吗？@_@lilyfisher 感谢您的帮助。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming