细胞技术

thisiscc 目前仅知道能用GFP做成融合蛋白，并在显微镜下观察，但也不了解更多细节。有熟悉这方面的，能提供一些研究方法，和技术细节不。能告诉哪些相关Publication也行。不甚感激。thisiscc 忘了说了，主要是想看目标蛋白在细胞质与细胞核的分布情况，及其在一定条件下的变化。Thanks again.rongjiansu 免疫荧光法观察处理前后目标蛋白在细胞中的分布，不过抗体的细胞内定位一般不准，不太可靠构建GFP ...

薇安夕夕宝 请问有人了解SHH通路吗？这个通路有激动剂吗？acola SAG C28H28ClN3OS黑糊糊2000 Oxysterols, could be one but not sure can be used for all the cell lines本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

xiaoerlong 求“体内培养”定义lightningwing 能否说的详细些，是抗体这类的体内培养，还是生物医学工程相关的体内培养？xiaoerlong 生物医学工程相关的体内培养（细胞培养方面的）xiaoerlong lightningwing wrote:能否说的详细些，是抗体这类的体内培养，还是生物医学工程相关的体内培养？生物医学工程相关的体内培养xxsl_2007 还真不好回答。体内培养是在动物体内生产所需物质的方法，如 ...

beyond211 不知TGF-β 在培养液里的半衰期是多久，如果我要持续刺激72小时，请问期间是否需要换液并换上新的TGF-β ？slimmerchan 我的经验是不需要，不过到第三天可以看到一些漂浮的死细胞sesame0415 我是在48小时后换液的，在相关文献中看到的…本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

yangguili 酶标仪读数为ovrflw是什么意思Ex：494Em：521读板后显示的OVRFLW，请问是什么意思？wkclive 超过仪器的检测限ZoeYee 超过检测范围了 样品稀释过再测下就行了本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

sunnyhaipo 各位大侠好，我是个实验的初学者。有个问题想求大家的帮助。我想检测一下石蜡标本中是否存在ALK融合基因的表达。ALK基因位于2p23,好像有6000多dp，ALK基因的多个外显子之间通常会有一些其他的基因融合其中从而会产生致瘤作用的融合蛋白。目前发现的可能会与ALK基因融合的其他基因有10来种，我想问一下怎样能够检测标本中是否存在这些融合基因的表达。我查过一些文献，有用FISH的，有用特异探 ...

sunnyhaipo 各位大侠好，我是个实验的初学者。有个问题想求大家的帮助。我想检测一下石蜡标本中是否存在ALK融合基因的表达。ALK基因位于2p23,好像有6000多dp，ALK基因的多个外显子之间通常会有一些其他的基因融合其中从而会产生致瘤作用的融合蛋白。目前发现的可能会与ALK基因融合的其他基因有10来种，我想问一下怎样能够检测标本中是否存在这些融合基因的表达。我查过一些文献，有用FISH的，有用特异探 ...

云向 大家好，我在提RNA ,但在配DEPC水时，和以往有点小不同，以前DEPC都是过夜才容的，有时甚至过夜也不容，但这次我刚加进去，大概等了一个多点就融了，中间我摇晃了三四次，我放在37度恒温箱中了，我很奇怪，这次为什么容那么快，会不会有问题，对了，我是在温水中假的depc水，大家谁还遇到过这种现象，不知道影不影响RNA的提取？外源RNA酶清除剂 没问题，本来DEPC就很容易溶于水。xinyinhancidian 多半是温水的缘 ...

kandr20051 最近在做细胞实验，用的是WST-1检测细胞活性。在检测的前72个小时，实验都符合预期，给药组的OD值比阴性对照组的要低，但是到了96个小时以后，WST-1的结果就逆转了。给药组的OD值远远高于阴性对照组。但最奇怪的是，WST-1的检测结果与我镜下观察到的细胞形态和多少完全不同！这是阴性对照组这是给药组的为什么会出现这种结果呢？zhuzhihui 这个我也在做，能有个稳定结果确实比较难。楼主可以考虑一 ...

fwangaust 我现在正在用NIH 3T3细胞转染质粒后，做CHIP实验。细胞裂解后超声，在验证超声效果时，超声前和超声后在600bp左右总有一很强的带，我用RNA酶处理过，这究竟是什么？是否会影响后面的实验？keaanu 我也遇到同样的问题，估计是蛋白-DNA复合物，带蛋白多的DNA电荷多，所以跑得快qyhxwxl 请问这种问题该怎么解决呢？解交联，还是提dna或者兼有之，盼复！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思 ...

aoc_chen 大家好，现在打算用BD Growth Factor Reduced Matrigel来做体外血管生成实验，请问这个胶买回来需要稀释吗？文献只说了24孔板每孔加250ul胶，然后上面再铺人脐静脉内皮细胞，我不明白这250ul是稀释后的还是原液？若是稀释后的，是多大比例稀释！不甚感激！ascorpio1 不需要稀释aoc_chen 谢谢楼上兄弟！roy2929 稀释一下省钱hlj8509_丁香 24孔做成管不太好。1、浪费matri ...

aalu 癌细胞与同种同类型正常组织细胞融合会出现什么现象？为什么？请标明文章的名称出处，谢谢!jiachengtang 你自己的看法呢？查过文献么？交流是相互的aalu 我没有查到文章，我不敢武断的下结论。不过我感觉应该试着从多个角度来分析。一方面，经典的癌基因、抑癌基因来看；另一方面，细胞质决定细胞命运（可能夸大了）的角度，这里包括两种甚至多种情况，我试着说两种，（1）癌细胞染色体完整（2）癌细胞染色体异常。。。本文由丁香园论坛 ...

firemoth 想请教下各位老师，在做脏器在体实验时，检测GABABR时，做总ERK检测，就可以证明ERK是被GABABR介导的，不是被其他受体介导；而检测5-HT受体时，做总ERK检测，不能证明ERK是被5-HTR介导的？在体实验怎么证明证明ERK是被5-HTR介导的？（动物已经处死，实验组织已经摘除保存了）必须要通过培养细胞来证明吗？zhanghai123 你好，看了你的帖子，有点不是很清楚。有几个问题想问一下：1 GAB ...

sosjgl 求助 那位朋友做过配体和受体关系的研究啊我现在要证明一个产物是一个已知受体的的配体，需要怎么证明？我想首先证明他们之间的亲和力，就是用这个受体已知的配体来测他们的竞争关系。求高手给点建议，或指点下方向。 有做过这方面的请赐教，如果有需要的话，本人可提供著名高校代理作为感谢。hxzcf 如果做的是体内实验，先分组，第一组用配体，第二组组用受体的激动剂，第三组用配体+受体的抑制剂。观察行为学改变，如果第一组和二组得到相 ...

玛利乐乐 最近做某种抑癌基因促进肿瘤细胞凋亡，做了western检测，caspase3，8，9，fas，BID，cytc，发现fas上调，caspase8，3下调，说明fas通路活化；BID下调，caspase9下调，我觉得应该是caspase8通过BID裂解激活线粒体通路，但是测cyt c却是下调，按理应该线粒体通路激活引起cytc释放，应该增多才对啊，这样解释不通，请高手指教是哪里的问题呢？可以不考虑cyt c吗？那怎么解释 ...

lingdestar 想用western检测一下刺激后的细胞外释放的蛋白，请教各位高手，怎么浓集培养基呢？liubingood 使用冷冻干燥机可以浓集培养基并且保持培养基中的蛋白活性，原理是将含培养基冷冻到冰点以下，使水转变为冰，然后在较高真空下将冰转变为蒸气而除去的干燥方法。培养基可先在冷冻装置内冷冻，再进行干燥。但也可直接在干燥室内经迅速抽成真空而冷冻。升华生成的水蒸气借冷凝器除去。这种方式的使用的前提是你们实 ...

hql219 HS-5细胞有谁养过，传代时大概需要消化多长时间，几天传一代？ysgoodluck 楼主，你养的HS-5是用的什么培养基啊？wjling2550 我前段时间养过，刚开始差不多三四天、四五天传一代，消化的时候也好消化，大约3分钟吧，后来就长得比较慢了，有一次是一周多才传一代wjling2550 培养基用的是H-DMEM本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙 ...

华仔123456 如题求助？在线等华仔123456 受体的表达量在哪些情况下会有改变呢？yyc5243 应该是不会变化的吧。某种受体在某一细胞或一定组织内的数量是有限的，所以即使加大配体浓度也不会增加结合值。正常情况下受体是无活性的或者不表达的，随着细胞内某些机制的改变，受体的活性增加或者说受体活化的数量增加。或者本来不表达，但是刺激后使受体表达了（受体也是一种蛋白，蛋白的表达必然要有转录和翻译）。我的理解是这样的wan ...

frankwolf 各位高手：小的新手上路，恳请各位不吝指导。小的想用带有绿色荧光蛋白的真核表达载体将一个长度在600-1000bp的cDNA和一段长度几十个bp的shRNA转染入人类的细胞中，希望目的基因能够比较稳定的表达，并且使得细胞能在激光共聚焦显微镜下显示绿色。能否恳请各位分别为推荐cDNA和shRNA各推荐一种比较常用的、可行性比较好的、不太容易发生意外情况的带有绿色荧光蛋白的真核表达载体呢？多谢各位 ...

简繁 请教做糖尿病细胞实验3T3-L1、L6、HepG-2细胞的战友，你们用的是哪种胰岛素？我原来用sigma牛胰岛素I5500这个货号的，后来断货了，请教战友换用哪种胰岛素好，如果有相对成熟的条件请赐教，非常感谢！另外国内大细胞库一直找不到合适的胰岛细胞株，请教各位战友用的是哪种，谢谢！lzyn 同学我就是买的sigma的这个胰岛素，我想知道以前你是怎么配的？能告诉我吗？》我的QQ530549736 希望您多给指点。我是研一 ...