生物化学技术

相关专题 【实验原理】 高碘酸可以选择性地氧化和断裂糖分子中连二羟基或连三羟基处，生成相应的多糖醛、甲醛或甲酸。反应定量地进行，每开裂—个C-C键消耗一分子高碘酸。通过测定高碘酸消耗量及甲酸的释放量，可以判断多糖分子中糖苷键的位置、类型、多糖的分枝数目和取代情况等。 【实验材料】 1. 实验器材 紫外分光光度计。 2. 实验试剂 (1)溴 ...

相关专题 实验目的 组合生物合成是将不同化合物的生物合成基因重新组合后，形成新的生物合成途径，从而产生新的化合物，这是新药研究中的重要进展。目前许多具有生理活性的天然产物的生物合成途径已经研究清楚，利用组合生物合成技术通过改变聚酮合成酶的基因合成了一系列“非天然的”的聚酮类化合物库，以供进一步的活性筛选。本实验利用微生物中的聚酮体生物合成基因 ...

相关专题 【实验目的及原理】 本实验是克隆金黄色葡萄球菌激酶基因（Sak）并构建其高效表达系统。葡激酶(Staphylokinase简称Sak)是金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)合成分泌的一种蛋白具有溶血栓功能。它与纤溶酶原(Plg)结合形成1∶1的复合体使之转变为活性纤溶酶(Pli)。在血浆中Sak能溶解纤维蛋白凝 ...

相关专题 电泳切胶注意事项: 1.电泳的buffer和gel都是新制的，切胶的台子清理干净，刀片最好洗净灭菌，总之一句话就是保证切下的带没有外源dna污染。2.切胶是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。为了减少胶的体积，可以用相对比较薄的胶来做，只要够点样即可，也可采用薄而宽的梳子来跑胶。 3.关于防护，在一般有机玻璃后就足够了，戴上防护面 ...

相关专题 原位杂交(ISH)是一种可在细胞涂片、组织切片以及分裂中期染色体带中检测DNA或RNA的技术，此方法原理是由DNA或RNA的序列与互补的标记单链DNA/RNA探针结合形成标记的双链杂交分子，本技术可对组织细胞原位的待测核酸分子进行定性，定量及定位分析。在细胞分化调节、基因定位、肿瘤遗传学、分子病理学、病毒学等领域得到广泛应用。经典的 ...

相关专题 实验原理 DNA电泳是基因工程中最基本的技术，DNA制备及浓度测定、目的DNA片段的分离，重组子的酶切鉴定等均需要电泳完成。根据分离的DNA大小及类型的不同，DNA电泳主要分两类： （1）聚丙烯酰胺凝胶电泳 适合分离1kb以下的片段，最高分辨率可达1bp，也用于分离寡核苷酸，在引物的纯化中也常用此中凝胶进行纯化，也称PAGE纯化。 ...

相关专题 一、原理及目的（略） 二、试剂 1、30%丙烯酰胺贮存液：29g丙烯酰胺和1g NN’-亚甲双丙烯酰胺溶于100ml热水中，验证其pH值不大于7.0。置棕色瓶中，4℃保存。 2、1.5mol/L Tris（pH8.8）溶液 3、10% SDS溶液 4、10%过硫酸铵：新鲜配制 5、TEMED溶液：4℃保存 6、1.0 mol/L T ...

相关专题 一、目的： 学习和掌握应用紫外分光光度法直接测定核酸含量的原理及技术。熟悉紫外分光光度计的基本原理与使用。 二、原理： DNA和RNA都有吸收紫外光的性质，它们的吸收高峰在260nm波长处。吸收紫外光的性质是嘌呤环和嘧啶环的共轭双键系统所具有的，所以嘌呤和嘧啶以及一切含有它们的物质，不论是核苷、核苷酸或核酸都有吸收紫外光的特性，核酸 ...

相关专题 一、目的： 了解并掌握地衣酚法测定RNA含量的基本原理和具体方法。 二、原理： RNA含量测定，除可用紫外吸收法及定磷法外，常用地衣酚法测定。其反应原理是：当RNA与浓盐酸共热时，即发生降解，形成的核糖继而转变成糠醛，后者与3，5-二羟基甲苯（地衣酚orcinol）反应，在Fe 3+或Cu 2+催化下，生成鲜绿色复合物。反应产物在6 ...

相关专题 一、目的： 学习离子交换柱层析法分离核苷酸的原理及方法。 二、原理： 离子交换作用一般指在固相和液相之间发生的可逆的离子交换反应，它可用于分离各种可解离的物质。通常离子交换剂是在一种高分子的不溶性母体上引入若干活性基团。这样人工会成的离子交换剂具有各种各样的性能。作为不溶性母体的离分子有树脂、纤维素、葡聚糖、琼脂糖或无机聚合物等，引 ...

相关专题 一、目的： 学习聚丙烯酰胺凝胶平板等电聚焦电泳测定蛋白质等电点的原理及方法。 二、原理： 等电点聚焦（isoelectric focusing IEF）或简称电聚焦（electrofocusing），也曾称等电点分离聚焦电泳等。它是60年代中期出现的技术，克服了一般电泳易扩散的缺点。近年来，等电点聚焦电泳又有了新的进展，可以分辨等电 ...

相关专题 王琛 分子细胞重点实验室 中科院上海生物化学与细胞生物学研究所 点击下载全文 ...

相关专题 【原理】 维生素C是具有L系糖构型的不饱和多羟化合物，属水溶性维生素。维生素C具有很强的还原性。在碱性溶液中加热并有氧化剂存在时，维生素C易被氧化而破坏。一些重金属离子（如铜离子），也可使维生素C氧化。在中性和微酸性环境中，维生素C能将染料26-二氯酚靛酚还原成无色的还原型26-二氯酚靛酚。同时维生素C氧化成脱氢维生素C。 氧化型的 ...

相关专题 【原理】 以醋酸纤维薄膜为支持物，用缓冲液润湿后，将微量血清样品点于膜上，再在电泳槽中进行电泳，可将血清蛋白分离成清蛋白、α1、α2、β、γ球蛋白五条区带，将薄膜置于染色液中，使蛋白质固定并染色后，可看到清晰色带，也可将色带分别于碱溶液中进行定量测定，再计算血清中各种蛋白质的含量百分数。 在正常情况下，这些蛋白质各占一定的百分比，在 ...

相关专题 【原理】 琼脂糖（agarose）是经过挑选，以质地较纯的琼脂（agar）作为原料而制成的。琼脂在化学上是由琼脂糖和琼脂胶组成的复合物。琼脂胶是一含有硫酸根和羟基的多糖，它具有离子交换性质，这种性质会给电泳及凝胶过滤以不良的影响。琼脂糖是直链多糖，它由D－半乳糖和36－脱水－L－半乳糖的残基交替排列组成。 琼脂糖主要通过氢键而形成凝 ...

相关专题 带电颗粒在电场作用下向着与其电性相反的电极移动的现象称为电泳。如带正电荷的粒子向负极移动，带负电荷的粒子向正极移动。电泳技术是生物化学与分子生物学中的重要研究方法之一，利用电泳技术可分离许多生物物质，包括氨基酸、多肽、蛋白质、脂类、核苷、核苷酸及核酸等，并可用于分析物质的纯度和分子量的测定等。 电泳的基本原理 许多生物分子都带有电荷 ...

相关专题 一．原理带电荷的物质在电场中的趋向运动称为电泳。其中，凝胶电泳由于其操作简便、快速、灵敏等优点，使它成为分离、鉴定和提纯核酸的首选标准方法。与蛋白质分子类似，核酸分子也是两性解离分子。在pH3.5时，碱基上的氨基基团解离，而三个磷酸基团中只有第一个磷酸解离，整个分子带正电荷，在电场中向负极泳动；在pH值为8.0-8.3时，碱基几乎不 ...

相关专题 一．原理DNA片断的分离与回收是基因工程操作中的一项重要技术，例如可收集特定酶切片断用于克隆或制备探针，回收PCR产物用于再次鉴定等。回收实验中两个最重要的技术指标是纯度和回收率：前者未达标时会严重影响以后的酶切、连接、标记等酶参与的反应；后者不理想时往往会大大增加前期的工作量。本实验采用的是V-GENE公司的DNA凝胶回收试剂盒， ...

相关专题 一．实验目的学习一种人工合成模拟过氧化物酶的方法，了解柱子型固定酶的原理以及感性认识酶分析法的一些应用。二．实验原理过氧化物酶的辅基是血红素。在体外将血红素与牛血清白蛋白结合制备成含血红素的蛋白质分子作为模拟过氧化物酶。在确定血红素与牛血清白蛋白结合后，检测其的过氧化物酶活性。然后将此人工模拟酶固定在载体琼脂糖凝胶（Sepharos ...

相关专题 【基本原理】 游离状态的考马斯亮蓝G250在酸性溶液中呈红褐色，与蛋白质结合后呈蓝色，蛋白质含量与颜色的深浅成正比，经595nm测定，可作出蛋白质含量与吸光度值的标准曲线，并求出未知样品的蛋白质浓度。 【器材】 1．可见光分光光度计 2．试管 【试剂】 1．0.9% NaCl 2．蛋白质标准溶液（500μg/ml）：小牛血清白蛋 ...