蛋白质技术

原核表达将克隆化基因插入合适载体后导入大肠杆菌用于表达大量蛋白质的方法一般称为原核表达。这种方法在蛋白纯化、定位及功能分析等方面都有应用。大肠杆菌用于表达重组蛋白有以下特点：易于生长和控制；用于细菌培养的材料不及哺乳动物细胞系统的材料昂贵；有各种各样的大肠杆菌菌株及与之匹配的具各种特性的质粒可供选择。但是，在大肠杆菌中表达的蛋白由于缺少修饰和糖基化、磷酸化等翻译后加工，常形成包涵体而影响表达蛋白的生物学活性 ...

上周送了一个考染的蛋白质点做PMF质谱鉴定，我自认为点取准了，质谱的蛋白量足够，可公司的人说我送去的样品太少，PMF做不出来，但是可以做MALDI-TOF-TOF。没办法，做了一个月的实验不能白做吧！狠下心多加了200元做了MALDI-TOF-TOF。（鉴定一个蛋白质的钱可以买一台三星的17寸显示器了）结果如下：Accession Mass Score Description1. gi|34903780 51933 67 unnamed prot ...

是该公司结合自己产品的一个说明，但其中有些知识我自己认为很有用，转下来。下面的步骤适用于通过Xcell Ⅱ转印系统进行蛋白印记的大部分应用。为达到最佳效果，用户的优化是必要的。I. 所需材料： • Xcell SureLock™或Xcell Ⅱ™ Mini-Cell以及Blot Module（Cat. Nos. EI10001, EI9001及EI9051）• 电泳后的迷你胶（mini-gel）（最大的尺寸9cundefined9cm）• 预先切割好的印记膜：硝酸纤维素（Cat. no. LC20 ...

呵呵希望让大家查询的方便一些也希望版主给适当加分裂解液的问题http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=3291558&sty=3&keywords=%C1%D1%BD%E2%D2%BA求教RIPA裂解液http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=3391456&sty=3&keywords=%C1%D1%BD%E2%D2%BA求助：胞浆蛋白的提取必须要用到裂解 ...

蛋白提取：１． 总蛋白提取（胞膜，胞浆，胞核）：组织匀浆后,15000g, 4度, 20分钟后,取上清.Buffer:NP40 750ul, 脱氧胆酸钠0.5克, SDS 0.1克, 加undefinedPBS 至100ml. 再加入PMSF(7.4mg/ml) 0.1ml. (现用现加)7.4mg/ml PMSP异丙醇溶液: 取A mg PMSF 加 A/7.4 ml 异丙醇.工厂-20度储存２．组织膜蛋白提取：所在操作冰上进行（1）取组织，用PBS冲洗干净组织上的血液. 加入 10ml Buffer A , 用剪刀尽可能剪碎组织,于冰上充分匀浆。每次 ...

在我的G宝盘里，有空可以去看看。现在已经加到29本，不光是教材，还有实验指导书和其他。我的课题和杂事太多，不能常来，刚建了G宝盘，上传了一些书，各位也许有用，网址：http://banzhao1982.gbaopan.com/少数最先上传的书有：1． Drenth_Principles of Protein X-Ray Crystallography 3rd ed(2006).pdf2．B.O.Pallson - Systems Biology - Properties of ...

下列方法已在本实验室验证，复性任何包涵体，必定能得到目的蛋白：菌体为超声法裂解，裂解溶液中含50mM Tris-HCl, pH 8.0，100mM NaCl，5mM EDTA，0.1% NaN3，0.5% Triton-X100，在使用前加入 0.1mM PMSF每250毫升裂解液中加入约50克菌体，工作15s，间隔15秒，超声破碎45分钟，超声后加入10mM MgSO4 和0.1mg/ml 的溶菌酶和Dnase 0.01mg/ml，室温放置20分钟，6000RPM离心15分 ...

欢迎您的到来。如果您是初访本版，希望如下信息对您有帮助：1、本版是丁香园 “实验技术讨论区” 的一员，以讨论蛋白质相关的实验技术为主旨。您可以提出您的实验疑问，讨论实验方法，介绍基础理论等等。您的参与是对蛋白质技术版块最大的支持。2、在本版发贴有如下建议：（1）题目请尽量写清要问的问题，以便网友浏览；（2）问问题尽量写清要问的细节，并注意不要重复发贴；（3）所有丁香园友的劳动都是义务的，请尽量使用文明用语，以感谢网友的帮助；（4）与 ...

将最近看到一篇较好的文章中的英文翻译并整理如下啦^_^，错误之处请批评指正：一、EMSA反应影响因素：1、DNA探针：探针可以和目的蛋白相结合，但同时也可以被其它蛋白非特异性结合，因此在得到特异性条带时也会有非特异性结合条带、“smear”探针条带或样品滞留不出孔。2、目的蛋白：同理目的蛋白除对其特异性结合的探针结合外，与竞争性反应中的非特异性DNA探针也有不同亲和力的结合，从而可以出现特异性结合条带或者与其它蛋白 ...

前段时间在别人实验室学做western，做了若干次，感觉很容易呀！当然了，别人那试剂都是现成的，技术也成熟，每次都有结果呀！然后回自己实验室来也学着别人的样开始搞。我们这是个新的实验室，什么都没有啊，只有仪器，我买瓶瓶罐罐啊、试剂啊，然后刷刷洗洗，配各种溶液～～～～～～溶液真是多啊，我配了3天才完全配好！特别是调pH太耗时间！开始做了！做胶：别人实验室是用琼脂粉封底，我记得他们是5％，我自己一配，怎么这么稠啊(加热中）！完全搅不 ...

Western-Blot操作流程试剂配制（一）母液1.0mol/L Tris·HCl Tris (MW121.14) 30.29g蒸馏水 200ml溶解后，用浓盐酸调pH至所需点（见下所示），最后用蒸馏水定容至250ml，高温灭菌后室温下保存。 PH HCl7.4 约17ml7.5 约16m7.6 约15ml8.0 约10ml1.74mg/ml (10mmol/L)PMSF PMSF 0.174g异丙醇 100ml溶解后，分装于1.5ml离心管中，-20℃保存。0.2mol/L NaH2PO4 ...

友情整理06年3月份无人应助贴，希望大家积极应助！ 核酸理化常数测定方法http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5777507&sty=1&tpg=22&age=0 请教顺乌头酸酶活性的测定方法！！http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5684366&sty=1&tpg=38&age=0 求助NCBI上的一个问题.http://www.dxy.cn/bbs/post/ ...

1.【求助】有关流式细胞仪http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=4532636&sty=1&tpg=14&age=02.求购DEAE Sephadex A 25http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=4532181&sty=1&tpg=14&age=03.紧急求助：请教一个蛋白质测序的问题http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=4 ...

质谱在肽和蛋白分析中的应用　　质谱已成为肽和蛋白分析的重要工具，主要归功于一些软电离技术的应用，如电喷雾(ESI)和基体辅助激光解吸电离(MALDI)。生物大分子多为极性、难挥发化合物，不易气化，用传统质谱无法测定。但随着新的离子化技术的广泛应用，现已能高效地电离一些完整或片断的大分子生物聚合物，从而进行质谱测定。本文对质谱在肽和蛋白分析的几个领域中的应用进展进行评述。1　软电离技术1.1　电喷雾电离(ESI)　电喷雾电离利用位于一 ...

由michael 战友上传并编写其简介！资料已转移至:老赵一号航母:/基础医学区/蛋白质技术专业组/pub/ 人物介绍：贺福初老师，中国蛋白质组学绝对的number 1(y)(y)毕业于复旦大学生物系，1985年在军事医学科学院放射医学研究所获硕士学位。现为中国科学院院士、军事医学科学院放射医学研究所所长、研究员、博士生导师，技术4级，大校军衔，同时，为复旦大学生物医学研究院院长。2002年初，作为首席科学家，领衔了在未来5年内资助 ...

100本最新分子生物学书籍Methods in Molecular Biology Volume 201-300http://rapidshare.com/files/58795488/201_Combinatorial_Library.pdfhttp://rapidshare.com/files/58796259/202_Thyroid_Hormone_Receptors.pdfhttp://rapidshare.com/files/5879 ...

我会把他们发到humanpress@56.com这个邮箱里，用户：humanpress密码：humanpress可能要1个月（老爷机太慢）我先从140.Chaperonin Protocols 向后发而后再发1-139，主要是考虑1-139年代较早，需要的人可能不多。METHODS IN MOLECULAR BIOLOGYJohn M. Walker, SERIES EDITORHumana Press Inc. Totowa, NJ www.humanapress.c ...

大家都知道蛋白质组学的方法可以用来寻找药物靶点，但是对于如何寻找药物靶点，如何确证药物靶点这些具体的东西还没有一个清晰的轮廓，这使得蛋白质组学在药物靶点寻找方面还停留在概念上。而最近Nature上的一篇文章是我们看到一线曙光。Sidney Kimmel癌症研究中心的SCHNITZER 领导的研究小组采用削减蛋白质组作图的方法加快蛋白组学寻找药物靶点的工作。Nature 429, 629 - 635PHIL OH, YAN LI, JINGYI YU, E ...

因版面内无人应助帖比较多，但并不能及时整理出来（一个月整理一次周期太长了），导致大量帖子沉降，好多站友的问题得不到及时的解答，极大打击了新战友的积极性，而且也使版面质量下降。因此本版特招聘无人应助帖整理人员2名。 而且我们会以1分欢迎您的到来！！要求：招聘条件如下：年龄：至少2个月（从注册日期算起）分数：至少10分以上（主要是为了招对论坛操作比较熟练的人）热情度：在本版发帖超过30帖。因整理无人应助帖是一个比较麻烦的事，故 ...

7月份无人应助贴整理如下：http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=3998234&sty=1&tpg=17&age=0http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=3994250&sty=1&tpg=18&age=0http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=3994953&sty=1&tpg=18&age=0http://www.d ...