你注意过以下技巧吗?1. Milk-based blockers may contain IgG that can cross-react with anti-goat antibodies. This can significantly increase background and reduce antibody titer. Milk may also contain endogenous biotin or phospho- epitopes that can cause higher background.2.To stretch the O ...
想和大家讨论一下关于dominant negative的问题。首先,什么是dominant negative?在网上查到的解释多为:显性抑制---虽然多数的突变都隐性的,可是在遗传学的实验上,也曾观察到显性的突变,如果这突变会抑制或破坏某一正常的功能,就称之为“显性抑制”。在实验中给野生型表达或转入无功能的基因或目的蛋白无功能类似物,观察是否会影响原来也具有正常功能的基因或蛋白的作用。一般用于验证实验的准确性。就我的理解, ...
前两天在网上提问,有不少朋友回答,万分感谢,后来我的一位同学给我寄来了科学出版社的一本蛋白质预测的书的WORD版,放在这儿给需要的人看看。 涉及到的因特网资源物理性质预测: Compute PI/MW http://expaxy.hcuge.ch/ch2d/pi-tool.html Peptidemass http://expaxy.hcuge.ch/sprot/peptide-mass.html TGREASE ftp://ftp.virginia.edu ...
一、蛋白质数据库1.UniProt (The Universal Protein Resource)网址:http://www.uniprot.org/http://www.ebi.ac.uk/uniprot/简介:由EBI(欧洲生物信息研究所)、PIR(蛋白信息资源)和SIB(瑞士生物信息研究所)合作建立而成,提供详细的蛋白质序列、功能信息,如蛋白质功能描述、结构域结构、转录后修饰、修饰位点、变异度、二级结构、三级结构等,同时提供其他数据库,包括 ...
酪安酸差色光谱法1.打开分光光度剂,预热30分钟,是紫外灯处于稳定发光状态2.在2容积为1mlde 微量石英比色杯中分别加入900ulPH7.4,PH12.0的0.1mol/l磷酸缓冲液,把盛有PH12.0缓冲液的比色杯放入样品杯中放入支架上,把盛有PH7.4缓冲液的比色杯放入到参比杯的支架上,然后准确的测出295nm波长下的光吸收值,或用250-350nm扫描3.在上述的2个比色杯中分别加入100UL的待测样品液,小 ...
最近2个月都在做原核表达,刚开始什么都不会,连SDS-PAGE都跑成模糊的一片,其中的辛酸只有自己知道,现在实验慢慢上正轨了,自己也积累了一些经验。很怀恋之前探索的那段时光,现在把我做蛋白表达的过程和一些问题写出来,希望能够帮助开始做蛋白表达的人少走一些弯路。1、表达载体的构建构建表达载体是比较简单的,不过也是需要对你的蛋白还有所用的载体有一个详细的认识,对于比较大的蛋白最好选用能够助溶的标签,但是也不是固定的 ...
watermark分子生物学基础 4.46Mhttp://immuneweb.xxmc.edu.cn/havrd%20molecular/DNAI.ppt蛋白质和DNA的关系 4.88Mhttp://immuneweb.xxmc.edu.cn/havrd%20molecular/DNAIII.pptDNA复制(第一讲) 1.28Mhttp://immuneweb.xxmc.edu.cn/havrd%20molecular/Replicatio ...
觉得这篇文章不错啊,贴出来与大家分享!恳请版主加分!真核表达系统的研究进展经络 陈勇自上世纪70年代基因工程技术诞生以来,基因表达技术已渗透到生命科学研究的各个领域。并随着人类基因组计划实施的进行,在技术方法上得到了很大发展,时至今日已取得令人瞩目的成就。在各种表达系统中,最早被采用进行研究的是原核表达系统,这也是目前掌握最为成熟的表达系统。该项技术的主要方法是将已克隆入目的基因DNA片段的载体 (一般为质粒)转化细 ...
随着SELDI技术从美国的引进,有部分战友已经接触到了这个技术,现把园里有关的帖子总结于下。SELDI 芯片的再现性http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=1115005&sty=3&keywords=SELDISELDI和飞行质谱所能检测的蛋白质的分子量范围是多少?http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=749497&sty=3&keywords= ...
很多免疫教科书上描述,人和兔子,还有猪的抗体可以用proteinA亲和纯化。小鼠腹水单抗用protein G亲和介质进行纯化。但是在实际科研中,我们发现用新的rProtein A也可以对小鼠腹水进行有效纯化我和不少人说起过这个事,但是还是有很多怀疑和种种疑问挑战经典理论确实是件难事我摘抄了实验室一次实验与大家分享,希望对大家有所帮助简单的实验步骤,适合没有层析仪,又希望快速得到抗体的实验室(此次纯化实验耗时约2小时) ...
看到坛子里最近有好多朋友发贴问膜蛋白的相关问题,尤其是一些新手。其实坛子里以前就有过不少这方面的讨论,只有你搜索一下就会发现好多有用的信息,肯定比你在那焦虑的等待别人回帖效果好。而且好多新人常常迫不及待的就重复发贴,造成了一定程度的资源浪费,而且这也是版规所不容许的。正好本人最近也在准备这方面的课题,所以顺手总结一下过往的一些帖子,希望对大家有所帮助。(数字仅为标号,绝非排名:P)小弟抛砖引玉,冀望各位不吝拍玉:) 小 ...
Western Blot一.配胶1.注意一定要将玻璃板洗净,最后用ddH2O冲洗,将与胶接触的一面向下倾斜置于干净的纸巾晾干。2.分离胶及浓缩胶均可事先配好(除AP及TEMED外),过滤后作为储存液避光存放于4℃,可至少存放1个月,临用前取出室温平衡(否则凝胶过程产生的热量会使低温时溶解于储存液中的气体析出而导致气泡,有条件者可真空抽吸3分钟),加入10%AP(0.7~0.8:100, 分离胶浓度越高AP浓度越低,15%的分离胶 ...
试剂配制(一)母液1.0mol/L Tris·HCl Tris (MW121.14) 30.29g蒸馏水 200ml溶解后,用浓盐酸调pH至所需点(见下所示),最后用蒸馏水定容至250ml,高温灭菌后室温下保存。 PH HCl7.4 约17ml7.5 约16m7.6 约15ml8.0 约10ml1.74mg/ml (10mmol/L)PMSF PMSF 0.174g异丙醇 100ml溶解后,分装于1.5ml离心管中,-20℃保存。0.2mol/L NaH2PO4 NaH2PO4(MW119.98) 1 ...
Current Opinion in Chemical Biology 2000, 4:489-494蛋白质组学对一个细胞或组织所表达的蛋白质进行的系统分析,而质谱是它的关键性分析工具。在过去的两年中,标准蛋白质组技术中的进展增进了更高水平自动化和敏感性的蛋白质识别技术。另外,新的技术促成了鉴定蛋白质功能相关特性的里程碑性的进展,包括它们的定量和在蛋白质复合物中复杂情况。缩写2DE two-dimensional gel electropho ...
Transformation of plasmid DNA to competent E. coli cellsTransformation is the process of getting the recombinant vector from a reaction mixture or vector solution into E. coli cells. To enable the cells to take up circular vector DNA they have to be made competent. The method for the preparation of co ...
网络来源,蛋白质组学电子书 小书库 ,希望其中一本或几本对各位有用。:D1、Cancer Proteomics: From Bench to BedsidePublisher: Humana Press | Language: English | ISBN:1588298582 | 300 pages | Data: 2007 | PDF | 3.5 MbDescription: This book provides the reader with broad perspectives and breadth of knowledge on current top ...
做生物的出国特别容易,因为做生物的赚钱少;职位大把大把的,就看你找不找;PS. 不能长期做,当个跳板不错;另:加密10,挡住小马甲~~~1. Postdoctoral Research Fellow, University of Maryland, Rockville, Maryland Postdoctoral Research FellowUniversity of MarylandDepartment: Center for Advanced Research in Biotechno ...
前段时间,美国赠送给我一个质粒,经联邦快递到达深圳海关,公司通知我要根据货物情况到相关行政职能部门办理入境申请,或者是省卫生厅科学教育处办理《人体物质出入境申请表》或《科研样品出入境申请表》 和《医用特殊物品准出入境证明》,或者是农业厅检疫处办理相关入境申请,然后报送深圳海关,再由海关办理其他清关手续(海关还要请专家审查,非常麻烦)。听起来很简单,等我请本单位出函给卫生厅,卫生厅说不是医学用品不归他们管,到农业厅,农业厅 ...
实验过程:1. 将SIGMA公司HRP标记的羊抗兔1:10,000开始,5倍稀释。点1ul到NC膜上,点完后迅速泡到PBS里。2. 配好发光底物后取出膜,将SuperSignal West Pico与ELC prime 分别加200ul到两块膜上。1min后,在膜表面覆盖塑料膜。3. 照相4. 将照相后的膜使用蒸馏水冲洗,然后加入TMB显色底物显色,看两膜显色深浅有无差别。结果:1. 发光情况30s结果1m30s5m30s20m30s从以上图片可以看出 ...
各位大侠,有个问题比较困惑,在Mascot上检索出来的蛋白并不是一一对应的,而是给出了几类蛋白,那么该如何选择呢?另外我的样本来自小鼠,如果检出的蛋白是(Rattus)的,是不是就不对呢?下面是一个例子,请各位百忙之中忙给予答复,谢谢。1. gi|27691060 Mass: 16225 Score: 67 Expect: 0.025 Queries matched: 7similar to tyrosine 3/tryptophan 5 -monooxygenase activ ...